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概述 1

一、生物化学与分子生物学实验课的性质、任务与目的 1

二、生物化学与分子生物学实验室安全与规则 1

三、实验报告书写 2

第一章 基本实验操作与常用技术及仪器的使用 3

第一节 基本实验操作 3

一、玻璃器皿的洗涤与干燥 3

二、移液器的使用 4

三、液体的混匀 6

四、沉淀的分离 6

五、常用生物材料的处理 7

第二节 常用技术及仪器的使用 9

一、离心技术与离心机 9

二、分光光度分析技术与分光光度计及酶标仪 10

三、电泳技术与电泳仪 12

四、层析技术与层析柱 16

五、体外DNA扩增技术与PCR仪 20

第二章 经典验证性实验 26

实验一 蛋白质的盐析作用 26

实验二 乳酸脱氢酶及其辅酶I的作用 27

实验三 血清谷丙转氨酶活性的测定 29

实验四 血糖浓度测定 32

一、Folin-吴氏法 32

二、葡萄糖氧化酶偶联法（GOD-POD法） 34

实验五 胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响 36

实验六 运动对尿中乳酸含量的影响 37

实验七 酮体的生成和利用 39

实验八 胆固醇提取定性 40

实验九 血清总胆固醇的测定 42

一、醋酐-硫酸单一试剂显色法测定总胆固醇 42

二、氧化酶法测定血清总胆固醇 43

第三章 综合性实验 45

实验十 蛋白质含量的测定 45

一、紫外分光测定法 45

二、Lowry法测定蛋白质含量 46

三、考马斯亮蓝法 48

实验十一 血清LDH同工酶谱分析 49

一、乙酸纤维素薄膜电泳法 50

二、琼脂糖凝胶电泳法 52

实验十二 碱性磷酸酶Km值的测定 55

实验十三 碱性磷酸酶分离纯化及比活性的测定 57

一、碱性磷酸酶的提取分离和纯化 58

二、碱性磷酸酶比活性的测定 60

实验十四 DNA琼脂糖凝胶电泳 63

实验十五 聚合酶链式反应技术（PCR）体外扩增DNA 64

实验十六 质粒DNA的制备（碱变性法） 66

实验十七 血清蛋白质的电泳分离 69

一、血清蛋白质乙酸纤维素薄膜电泳 69

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳（圆盘电泳） 71

实验十八 SDS-PAGE电泳测定蛋白质的相对分子量 75

实验十九 蛋白质印迹 79

第四章 研究性实验 82

实验二十 凝胶过滤层析法分离纯化脲酶 82

实验二十一 离子交换层析法分离血清蛋白质 86

实验二十二 RT-PCR技术 87

一、总RNA的提取 87

一、RT-PCR 89

实验二十三 真核生物基因组DNA的提取与鉴定 90

实验二十四 基因克隆及蛋白原核表达 92

第五章 创新性实验 96

实验二十五 食管癌PAX9基因的克隆及重组载体构建 96

实验二十六 支架蛋白RACK1小干扰RNA抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖、迁移和侵袭 102

附录 106

附录1 常用溶液的配制 106

附录2 常用培养基的配制 111