动物细胞培养 基本技术和特殊应用指南 原书第7版pdf电子书版本下载

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第1章 绪论 1

1.1历史背景 2

1.2组织培养的优点 10

1.2.1环境控制 10

1.2.2样品的特征和均一性 11

1.2.3经济、规模和机械化 11

1.2.4体内环境的体外模拟 11

1.3局限性 11

1.3.1专业技能 11

1.3.2量的问题 12

1.3.3去分化和选择 12

1.3.4细胞的起源 13

1.3.5不稳定性 13

1.4体外的主要差异 13

1.5组织培养的类型 14

参考文献 16

第2章 培养细胞的生物学 21

2.1细胞培养环境 21

2.2细胞黏附 21

2.2.1细胞黏附分子 22

2.2.2细胞间连接 23

2.2.3细胞骨架 24

2.2.4细胞外基质 24

2.2.5细胞迁移 25

2.3细胞增殖 26

2.3.1细胞周期 26

2.3.2细胞增殖调控 27

2.4细胞分化 27

2.4.1细胞分化的诱导和保持 30

2.4.2细胞分化及去分化潜能 31

2.5细胞信号转导 32

2.6能量代谢 34

2.7培养细胞的起源 34

2.7.1培养的开始 35

2.7.2细胞系的演化 36

2.7.3细胞的衰老 36

2.7.4连续细胞系的转化和建立 36

2.8术语定义 38

参考文献 39

第3章 实验室设计及布局 42

3.1布局、陈设和服务设施 42

3.1.1必备条件 44

3.1.2服务 48

3.1.3通风装置 48

3.2设计与布局 49

3.2.1无菌操作区 49

3.2.2层流柜 50

3.2.3工作台 50

3.2.4检疫和防范 50

3.2.5培养 51

3.2.6准备区 54

3.2.7储存 55

3.3灾害管理 57

参考文献 58

第4章 设备和材料 59

4.1组织培养实验室的要求 59

4.2无菌工作区 61

4.2.1层流生物安全柜 61

4.2.2手推车 63

4.2.3无菌液体处理——移液和分液 63

4.2.4倒置显微镜 69

4.2.5照相机和监视器 71

4.2.6解剖显微镜 71

4.2.7离心机 71

4.2.8细胞计数 72

4.3孵育和培养 73

4.3.1恒温箱 73

4.3.2 湿式CO2培养箱 73

4.3.3温度记录仪 76

4.3.4滚筒支架 76

4.3.5磁力搅拌器 77

4.3.6培养器皿 77

4.4准备和灭菌 78

4.4.1洗涤 78

4.4.2培养基和试剂的制备 79

4.4.3灭菌 80

4.5储存 82

4.5.1耗材 82

4.5.2冰箱和冷冻箱 82

4.5.3冻存容器 83

4.5.4程序降温仪 83

4.6实验室辅助设备 84

4.6.1计算机和网络 84

4.6.2正置显微镜 84

4.6.3低温冷冻箱 84

4.6.4共聚焦显微镜 85

4.6.5 PCR热循环仪 85

4.7专用设备 85

4.7.1显微注射装置 85

4.7.2菌落计数器 85

4.7.3离心式淘洗器 85

4.7.4流式细胞仪 86

参考文献 86

第5章 无菌技术 87

5.1无菌技术的目的 87

5.1.1污染风险 87

5.1.2维持无菌状态 88

5.2无菌环境的基本要素 89

5.2.1层流 90

5.2.2安静区域 91

5.2.3操作台 92

5.2.4个人卫生 93

5.2.5试剂和培养基 94

5.2.6培养物 94

5.3无菌处理 94

5.3.1擦拭 94

5.3.2加盖 94

5.3.3灼烧 95

5.3.4试剂瓶和培养瓶的操作 95

5.3.5移液 96

5.3.6大容量移液 97

5.3.7液体倾倒 97

5.4标准化操作 97

5.4.1培养瓶和试剂瓶 103

5.4.2培养皿和多孔培养板 103

5.5仪器和设备 104

5.5.1冰箱和冷室 104

5.5.2恒温箱 104

5.5.3盒装培养物 106

5.5.4充入CO2气体 106

参考文献 107

第6章 安全性、生物伦理及验证 108

6.1实验室安全 108

6.2危险性评估 108

6.3标准操作程序 110

6.4安全规则 110

6.5常规安全 112

6.5.1操作者 112

6.5.2设备 113

6.5.3玻璃器皿和锐利物品 113

6.5.4化学毒性 114

6.5.5气体 115

6.5.6液氮 116

6.5.7烧伤 116

6.6火 116

6.7电离辐射 117

6.7.1摄入 117

6.7.2放射性废物的处理 117

6.7.3标记试剂的辐照 118

6.7.4高能源辐照 118

6.8生物危害性 118

6.8.1生物防范水平 118

6.8.2生物安全柜（BSC） 121

6.8.3人体活检材料 123

6.8.4细胞系 125

6.8.5遗传操作 126

6.8.6生物危险性废物的处理 126

6.8.7净化和熏蒸 126

6.9生物伦理 127

6.9.1动物组织 127

6.9.2人体组织 127

6.10质量保证 129

6.10.1操作程序 129

6.10.2质量控制（QC） 129

6.10.3确认 130

6.10.4身份验证 130

6.10.5起源 130

6.10.6污染 131

参考文献 131

第7章 培养器皿和附着物 134

7.1附着物 134

7.1.1附着和生长 134

7.1.2常用的附着材料 134

7.1.3附着物替代品 135

7.2表面处理 136

7.2.1附着物包被 136

7.2.2饲养层 138

7.2.3非黏性附着物 139

7.3培养器皿的选择 139

7.3.1细胞产量 140

7.3.2多孔板 141

7.3.3培养瓶和培养皿 142

7.3.4高细胞产量 143

7.3.5悬浮培养 144

7.3.6通气 144

7.3.7取样和分析 145

7.3.8不均匀生长 146

7.3.9成本 146

7.4特殊系统 147

7.4.1渗透性支持物 147

7.4.2三维基质 148

参考文献 148

第8章 成分明确培养基及补充物 151

8.1培养基的发展史 151

8.2物理化学特征 152

8.2.1 pH 152

8.2.2 CO2和碳酸盐 153

8.2.3缓冲作用 155

8.2.4氧气 155

8.2.5渗透压 164

8.2.6温度 165

8.2.7黏度 166

8.2.8表面张力和成泡性 166

8.3平衡盐溶液 166

8.4完全培养基 167

8.4.1氨基酸 167

8.4.2维生素 168

8.4.3盐类 169

8.4.4葡萄糖 169

8.4.5有机补充物 169

8.4.6激素和生长因子 169

8.4.7抗生素 170

8.5血清 170

8.5.1蛋白质 172

8.5.2生长因子 172

8.5.3激素 173

8.5.4营养物及代谢物 173

8.5.5脂类 173

8.5.6矿物质 173

8.5.7抑制物 173

8.6培养基和血清的选择 174

8.6.1血清批次预约 176

8.6.2血清的测试 176

8.6.3热灭活 177

8.7其他添加物 177

8.7.1氨基酸水解物 177

8.7.2胚胎浸出液 177

8.7.3适应性培养基 177

8.8储存 178

参考文献 178

第9章 无血清培养基 181

9.1血清的缺点 189

9.2无血清培养基的优点 190

9.3无血清培养基的缺点 190

9.4血清的替代 191

9.4.1无血清培养基的商业供应 191

9.4.2血清替代物 191

9.4.3无血清传代培养 193

9.4.4激素 193

9.4.5生长因子 194

9.4.6血清中的营养物质 194

9.4.7蛋白质和多聚胺 199

9.4.8黏度 199

9.5无血清培养基的研发 199

9.6无血清培养基的选择 200

9.6.1细胞或产物特异性 200

9.6.2细胞系对无血清培养基的适应性 200

9.7无血清培养基的制备 204

9.8无动物蛋白培养基 204

9.9小结 204

参考文献 205

第10章 准备与灭菌 209

10.1准备试剂与用品 209

10.2设备与液体的灭菌 209

10.2.1干热灭菌 210

10.2.2压力-蒸汽灭菌 210

10.2.3射线灭菌 211

10.2.4化学灭菌 211

10.2.5无菌指示器 211

10.2.6过滤灭菌 212

10.3设备 214

10.3.1玻璃器皿 214

10.3.2玻璃移液管 217

10.3.3螺口盖 219

10.3.4清洁剂的选择 222

10.3.5种类繁杂的设备 222

10.3.6可重复使用的灭菌过滤器 224

10.4试剂与培养基 225

10.4.1水 226

10.4.2纯水器的维护 228

10.4.3平衡盐溶液 228

10.4.4培养基的配制与灭菌 230

10.5培养基的灭菌 235

10.5.1可高压灭菌的培养基 235

10.5.2除菌过滤 235

10.5.3血清 244

10.5.4其他试剂的准备与灭菌 244

10.6培养基的质控、检测和储存 244

10.6.1质量控制 244

10.6.2无菌检测 245

10.6.3培养基和血清的培养检测 245

10.6.4储存 251

参考文献 252

第11章 原代培养 253

11.1原代培养入门 253

11.1.1用于解离组织的蛋白酶 253

11.1.2解离过程的共同特点 255

11.2组织分离 256

11.2.1小鼠胚胎 256

11.2.2鸡胚 260

11.2.3人体活检材料 261

11.3原代培养的类型 263

11.3.1原代外植 263

11.3.2酶的解离作用 266

11.3.3温胰蛋白酶消化 267

11.3.4低温预处理的胰蛋白酶消化 270

11.3.5鸡胚器官原基 273

11.3.6其他酶解过程 277

11.3.7胶原酶 277

11.3.8机械法解离 279

11.3.9分离活细胞 281

11.3.10原代培养小结 283

11.3.11原始记录 283

参考文献 284

第12章 传代培养和细胞系 286

12.1术语定义 286

12.2传代培养和扩增 286

12.2.1交叉污染和鉴定错误 289

12.2.2支原体污染 289

12.2.3细胞系的命名 290

12.2.4培养物的年龄 290

12.2.5有限细胞系和连续细胞系 291

12.3选择细胞系 291

12.4常规培养 292

12.4.1细胞形态的意义 292

12.4.2培养基的更换 294

12.4.3标准的换液方案 294

12.5传代 296

12.5.1传代标准 297

12.5.2单层生长细胞典型的传代方案 299

12.5.3生长周期和传代比率 303

12.5.4悬浮培养细胞的扩增 307

12.5.5悬浮生长细胞的传代 309

12.5.6培养条件的标准化 311

12.5.7抗生素的使用 311

12.5.8培养记录 312

参考文献 314

第13章 身份认证和验证 316

13.1细胞系的身份认证 316

13.1.1错误身份认定和交叉污染 316

13.1.2错误身份认定和交叉污染的原因 320

13.1.3避免错误身份认定和交叉污染 321

13.1.4细胞系身份认证的技术 321

13.1.5 DNA绘谱 322

13.1.6通过DNA条码测定动物细胞的种属 330

13.1.7同工酶分析 336

13.1.8染色体含量 341

13.1.9染色体显带技术 344

13.1.10染色体分析 345

13.1.11身份认证的必要性 345

13.2细胞身份的验证 346

13.2.1细胞的身世记录 347

13.2.2微生物污染 347

13.2.3步骤 347

13.3质量保证 348

13.3.1细胞系 348

13.3.2培养基和试剂 348

13.3.3培养器皿 348

13.3.4仪器 348

13.3.5设施 349

参考文献 349

第14章 污染 352

14.1污染的来源 352

14.1.1操作者的技术 355

14.1.2环境 355

14.1.3生物安全柜的使用和维护 356

14.1.4湿度恒温箱 356

14.1.5冷藏库 357

14.1.6无菌材料 357

14.1.7引入的细胞系和活组织 357

14.1.8隔离 357

14.2微生物污染的种类 357

14.3污染物的监控 358

14.3.1可见的微生物污染 358

14.3.2支原体 360

14.3.3支原体的荧光染色 361

14.3.4 PCR法检测支原体 365

14.3.5检测支原体的替代方法 366

14.3.6支原体检测服务 367

14.3.7病毒污染 367

14.4污染培养物的处理 368

14.5污染的去除 368

14.5.1细菌、真菌和酵母菌 368

14.5.2支原体的消除 369

14.5.3清除病毒污染 371

14.5.4顽固污染 371

14.6交叉污染 372

14.7结论 372

参考文献 372

第15章 冻存和建库 374

15.1冻存的意义 374

15.2冻存前的注意事项 374

15.2.1鉴定 375

15.2.2何时冻存 375

15.3冻存细则 375

15.3.1细胞冻存的理论背景 375

15.3.2细胞浓度 376

15.3.3冻存液 376

15.3.4冷却速度 377

15.3.5冻存管 380

15.3.6低温冰箱 381

15.3.7培养细胞的冻存 385

15.3.8冻存记录 387

15.3.9冻存管的解冻 388

15.3.10培养瓶冻存 391

15.3.11玻璃化保存 391

15.4冻存库的设计和监控 392

15.4.1库存管理、分配和使用 393

15.4.2细胞库存的连续更换 394

15.5细胞库 394

15.6细胞的运输 395

15.6.1冻存管 396

15.6.2活细胞 397

参考文献 398

第16章 克隆培养及筛选 400

16.1细胞的克隆培养 400

16.2贴壁率的刺激 404

16.2.1促进克隆生长的条件 405

16.2.2条件培养基 406

16.2.3饲养层细胞 407

16.3悬浮克隆培养 409

16.4细胞克隆的分离 414

16.4.1单层贴壁细胞克隆的其他分离技术 416

16.4.2悬浮细胞克隆 417

16.5复制性培养 418

16.6选择性培养基和抑制剂 418

16.7细胞与基质的相互作用 420

16.7.1选择性黏附 420

16.7.2选择性脱壁 420

16.7.3基质性质 420

16.7.4选择性饲养层 421

16.7.5半固体培养基选择 421

参考文献 422

第17章 细胞分选 425

17.1细胞密度及等密度沉降法 425

17.2细胞体积与沉降速率 429

17.2.1单位重力沉降 429

17.2.2离心淘洗分离技术 429

17.3以抗体为基础的分选技术 431

17.3.1免疫磁珠分选 431

17.3.2荧光活化的细胞分选法 434

17.4初试细胞分离者的选择 435

参考文献 435

第18章 细胞系鉴定 437

18.1鉴定的需求 437

18.2基因型鉴定 437

18.2.1真实性验证 438

18.2.2种属鉴定 438

18.2.3转化 438

18.3表型鉴定 438

18.3.1谱系或组织标记 438

18.3.2独特标记物 441

18.4细胞形态学 441

18.4.1显微镜 446

18.4.2染色 447

18.4.3细胞学检查所用培养器皿：单层培养 449

18.4.4悬浮细胞细胞学检查的标本制备 450

18.4.5光学显微照相技术 451

18.4.6活细胞成像 453

18.4.7共聚焦显微镜 453

18.5抗原标记 453

18.5.1免疫染色 455

18.5.2免疫分析 456

18.6间隔性记录 457

18.7细胞周期 459

18.7.1细胞分离 459

18.7.2阻断 459

参考文献 460

第19章 分化 462

19.1体内表型的表达 462

19.1.1去分化 463

19.1.2细胞谱系选择 463

19.2分化阶段 463

19.3增殖和分化 464

19.4定向和细胞谱系 464

19.5干细胞可塑性 465

19.6分化标记物 466

19.7诱导分化 467

19.7.1细胞相互作用 467

19.7.2全身性因子 469

19.7.3细胞-基质相互作用 472

19.7.4极性和细胞形状 473

19.7.5动态应激 474

19.7.6氧张力 474

19.8分化和恶性 474

19.9应用 474

参考文献 475

第20章 三维培养 481

20.1细胞的相互作用和表型表达 481

20.1.1三维培养的优点和局限性 482

20.1.2模型的选择 483

20.2器官培养 487

20.2.1气体和营养物质的交换 487

20.2.2结构的完整性 488

20.2.3生长与分化 488

20.2.4器官培养的局限性 489

20.2.5器官培养的类型 489

20.3组织型培养 491

20.3.1凝胶和海绵技术 491

20.3.2中空纤维 492

20.3.3细胞球体 492

20.3.4悬滴培养 495

20.3.5微载体 496

20.3.6类器官 496

20.3.7转动室系统 497

20.3.8藻酸盐活细胞固定术 498

20.3.9滤膜小皿插件 498

20.3.10神经聚集物的培养 501

20.4器官型培养 503

20.4.1组织等同物 503

20.4.2组织工程 503

20.5三维构建物中细胞的成像 505

参考文献 505

第21章 规模与自动化 510

21.1规模悬浮培养 510

21.1.1连续和分批培养 513

21.1.2一次性生物反应器 514

21.1.3规模和复杂性 514

21.1.4搅匀和换气 514

21.2单层规模培养 519

21.2.1多表面扩增器 520

21.2.2旋转培养 523

21.2.3微载体 526

21.2.4巨型微载体 529

21.2.5灌流式单层培养 530

21.3程序控制 530

21.4大规模培养程序 532

21.5自动化 535

21.5.1机器人培养细胞 536

21.5.2高通量筛选（HTS） 537

21.5.3三维高通量筛选 537

参考文献 540

第22章 衰老，永生化和转化 542

22.1在细胞系特征描述中的作用 543

22.2遗传不稳定性和异质性 544

22.2.1遗传不稳定性 544

22.2.2染色体畸变 545

22.3永生化 545

22.3.1衰老的控制 546

22.3.2病毒基因致永生化 547

22.3.3人成纤维细胞的永生化 550

22.3.4端粒酶诱导的永生化 554

22.3.5供选择的永生化策略 558

22.4生长控制异常 559

22.4.1停泊不依赖性 559

22.4.2接触抑制 560

22.4.3血清依赖 562

22.4.4癌基因 562

22.5致瘤性 563

22.5.1恶性化 563

22.5.2肿瘤移植 563

22.5.3侵袭力 564

22.5.4血管发生 565

22.5.5纤溶酶原活化因子 568

参考文献 569

第23章 定量 574

23.1细胞计数 574

23.1.1血细胞计数器 575

23.1.2电子计数 579

23.1.3染色的单层细胞 583

23.1.4流式细胞仪 584

23.2细胞重量和细胞压积 585

23.3 DNA含量 586

23.4蛋白质 586

23.5合成速率 586

23.5.1 DNA合成 586

23.5.2蛋白质合成 586

23.6准备样品用于酶分析和免疫分析 587

23.7细胞计数 587

23.7.1原位标记 587

23.7.2流式细胞术 587

23.8重复取样 587

23.8.1数据获得 588

23.8.2数据分析 588

23.9细胞增殖 589

23.9.1实验设计 590

23.9.2生长周期 590

23.9.3单层细胞生长曲线的分析 593

23.9.4培养基体积、细胞浓度和细胞密度 595

23.9.5悬浮培养 597

23.9.6生长周期的各个阶段 598

23.9.7生长曲线的衍生物 599

23.10贴壁效率 600

23.10.1集落形成分析 602

23.10.2自动集落计数 603

23.11标记指数 604

23.11.1生长分数 604

23.11.2有丝分裂指数 605

23.11.3分裂指数 605

23.12放射自显影术 606

23.13细胞周期时间 607

23.14细胞迁移 608

参考文献 608

第24章 细胞毒性 610

24.1活性、毒性和存活 610

24.2体外局限性 611

24.2.1药物代谢动力学 611

24.2.2新陈代谢 611

24.2.3组织和全身反应 612

24.3分析方法的类型 612

24.3.1生存力 612

24.3.2存活 615

24.3.3细胞增殖测定 620

24.3.4代谢性细胞毒性测定 620

24.3.5微滴定实验 620

24.3.6微滴定与克隆存活的比较 625

24.3.7药物的相互作用 625

24.4细胞毒性实验的应用 626

24.4.1抗癌药物筛选 626

24.4.2肿瘤药物的前瞻性实验 626

24.4.3药物学实验 627

24.5基因毒性 627

24.5.1姐妹染色单体交换的诱变实验 627

24.5.2致癌性 627

24.6炎症反应 628

参考文献 629

第25章 特殊类型细胞的培养 632

25.1特殊细胞培养技术 635

25.2上皮细胞 635

25.2.1表皮 636

25.2.2角膜 637

25.2.3乳腺 637

25.2.4子宫颈 637

25.2.5胃肠道 638

25.2.6肝 638

25.2.7人肝细胞系HepaRG 639

25.2.8胰 640

25.2.9气管和支气管上皮 640

25.2.10口腔上皮 640

25.2.11前列腺 640

25.3间充质细胞 640

25.3.1结缔组织 641

25.3.2 脂肪组织 641

25.3.3肌 641

25.3.4软骨 642

25.3.5骨 643

25.3.6内皮细胞 643

25.4神经外胚层细胞 643

25.4.1神经细胞 643

25.4.2神经胶质细胞 644

25.4.3内分泌细胞 646

25.4.4黑素细胞 646

25.5造血细胞 647

25.5.1红细胞 647

25.5.2髓细胞和巨噬细胞 647

25.5.3淋巴细胞 648

25.6单克隆抗体的制备 648

25.7生殖腺 650

25.7.1卵巢 650

25.7.2睾丸 650

25.8冷血动物细胞的培养 650

25.8.1鱼细胞 651

25.8.2昆虫细胞 651

25.9肿瘤细胞培养 651

25.10取材 652

25.10.1代表性细胞的选择 652

25.10.2组织的冷冻保存 653

25.11分离 653

25.12原代培养 654

25.13肿瘤细胞的选择培养 655

25.13.1选择培养基 655

25.13.2汇合饲养层 655

25.13.3悬浮克隆 658

25.13.4异种移植 658

25.14细胞系的建立 659

25.14.1原代肿瘤培养物的传代 659

25.14.2连续细胞系 659

25.15肿瘤细胞培养物的特征 660

25.15.1肿瘤细胞的异质性 660

25.15.2组织型培养 661

25.16特殊类型肿瘤 661

25.16.1乳腺 661

25.16.2肺 662

25.16.3胃 663

25.16.4结肠 663

25.16.5胰腺 664

25.16.6卵巢 664

25.16.7前列腺 664

25.16.8膀胱 665

25.16.9皮肤 665

25.16.10子宫颈 666

25.16.11胶质细胞瘤 666

25.16.12神经母细胞瘤 667

25.16.13精原细胞瘤 667

25.16.14淋巴瘤和白血病 667

参考文献 667

第26章 干细胞 677

26.1胚胎干细胞 677

26.1.1小鼠胚胎干细胞的诱导 677

26.1.2小鼠胚胎干细胞的传代培养和扩增 677

26.1.3人胚胎干细胞的原代培养 678

26.1.4鱼胚胎来源的多能干细胞 680

26.2生殖细胞 680

26.3胚外细胞 680

26.3.1羊水细胞的培养 680

26.3.2从新生儿或青年来源的细胞 680

26.3.3成人来源的多能干细胞 680

26.3.4人骨髓来源间充质干细胞 681

26.3.5前列腺上皮干细胞 681

26.3.6牙上皮干细胞 681

26.3.7诱导多潜能干细胞 682

26.4造血干细胞 683

26.4.1小鼠骨髓长期培养 686

26.4.2人骨髓长期培养 686

26.5再生医学中干细胞的应用 687

26.6肿瘤干细胞 690

参考文献 691

第27章 培训纲要 697

27.1目的 697

27.2实验制备及操作技巧 699

27.3基本的细胞培养技术 711

27.4高阶练习 734

27.5特殊练习 749

参考文献 749

第28章 问题与对策 750

28.1细胞异常形态 750

28.2细胞生长缓慢 751

28.2.1仅限于自己细胞出了问题 751

28.2.2其他人也遇到同样的问题 751

28.3培养基 752

28.3.1试剂配方、准备和存储 752

28.3.2不稳定试剂 754

28.3.3配制培养基各种成分的纯度 754

28.4基质和容器 755

28.5微生物污染 755

28.5.1仅限于单个实验者的问题 755

28.5.2普遍问题 756

28.5.3室内供气和层流净化工作台 757

28.5.4特定污染 758

28.6化学污染 758

28.6.1玻璃器皿 758

28.6.2移液管 759

28.6.3水的纯化 759

28.6.4低温冻存 759

28.6.5粉末或气溶胶 759

28.7原代培养 759

28.7.1原代培养的存活率低 759

28.7.2选择细胞错误 761

28.7.3污染 761

28.8分化 761

28.9饲养 762

28.9.1常规单层培养 762

28.9.2克隆培养 762

28.10传代 762

28.10.1收获率低或生长缓慢 762

28.10.2生长不均匀 763

28.11克隆 764

28.11.1培养皿形成的克隆数过低 764

28.11.2培养皿形成的克隆数太多 765

28.11.3非随机分布 765

28.12交叉污染和错误标记 765

28.13冻存 765

28.13.1复苏时存活率低 765

28.13.2冻存后细胞形态发生变化 766

28.13.3冻存细胞丢失 767

28.14细胞计数 767

28.14.1用血细胞计数板计数 767

28.14.2使用阻抗法电子计数仪计数 767

参考文献 768

第29章 结语 769

附录Ⅰ 计算配制及试剂制备 770

参考文献 787

附录Ⅱ 术语 788

参考文献 796

索引 797