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第一章　基础实验 1

Ⅰ．显微镜技术 1

1-1　普通光学显微镜的使用 1

1-2　暗视野显微镜的使用 6

1-3　相差显微镜的使用 8

1-4　显微测微计的使用 11

Ⅱ．微生物的形态构造 14

1-5　细菌的涂片及简单染色法 14

1-6　革兰氏染色法 16

1-7　抗酸性染色法 19

1-8　细胞壁染色法 21

1-9　荚膜染色法 23

1-10　鞭毛染色法 26

1-11　芽孢染色法 30

1-12　细胞内含物的染色法 32

1-13　放线菌形态特征的初步观察 34

1-14　酵母菌细胞核的染色 36

1-15　根霉假根的观察 37

1-16　根霉接合孢子的观察 39

1-17　载片培养及其观察方法 40

1-18 昆虫病毒多角体的观察 42

1-19 四大类微生物菌落形态的比较和识别 43

Ⅲ．培养基的配制和灭菌 46

1-20　培养基的配制 46

1-21　加压蒸汽灭菌法 51

1-22　干热灭菌法 52

1-23　过滤除菌法 54

1-24　微生物的接种方法 56

Ⅳ．接种、分离和纯化 56

1-25　稀释涂布和平板划线分离法 65

1-26　真菌的单孢子分离法 70

1-27　用厌氧袋法分离培养丙酮丁醇梭菌 73

Ⅴ．生长繁殖和若干生理生化反应的测定 78

1-28　微生物的计数 78

1-29　细菌生长曲线的测定 85

1-30　细菌的生理生化反应——试纸法 88

Ⅵ．菌种保藏 91

1-31　简易常用保藏法 91

1-32　冷冻干燥保藏法 94

参考文献 96

第二章　微生物的分离与鉴定 97

Ⅰ．细菌 97

2-1　芽孢杆菌、肠道杆菌、假单胞菌及球菌的分离纯化 97

2-2 芽孢杆菌属（Bacillus）种的鉴定 101

2-3 肠杆菌科（Enterobacteriaceae）各属的鉴定 115

2-4 假单胞菌属（Pseudomonas）的鉴定 122

2-5 革兰氏阳性球菌的鉴定 133

2-6　放线菌的分离 164

Ⅱ．放线菌 164

2-7　放线菌菌体形态的观察 167

2-8　放线菌细胞化学组分的测定 174

2-9　放线菌抗菌谱的测定 178

2-10　放线菌分科、分属的鉴定 180

2-11　链霉菌属的分群 187

2-12　放线菌种的鉴定 189

Ⅲ．酵母菌 197

2-13　酵母菌的分离 197

2-14　酵母菌的分属鉴定 200

2-15　酵母菌种的鉴定 205

Ⅳ．丝状真菌 232

2-16　小型丝状真菌的分离 232

2-17　水霉科（Saprolegniaceae）常见属的分离与鉴定 236

2-18 毛霉科（Mucoraceae）常见种的鉴定 241

2-19 散囊菌目（Eurotiales）常见代表种的鉴定 246

2-20 球壳菌目（Sphaeriales）常见代表种的鉴定 249

2-21 曲霉属（Aspergillus）的分群（种群） 253

2-22 青霉属（Penicillium）的分系（种系） 258

2-23 镰孢菌属（Fusarium）种的鉴定 267

2-24 半知菌亚门（Deuteromycotina）常见种的鉴定 273

参考文献 278

第三章 微生物的生理生化 281

Ⅰ．青霉素发酵 281

3-1　青霉素发酵 281

3-2　青霉素效价的生物测定 283

3-3　青霉素发酵过程中糖的利用 290

3-4　青霉素发酵过程中氨态氮的变化 294

3-5　前体物质对青霉素生物合成的影响 298

3-6　天冬氨酸和苏氨酸对赖氨酸生物合成的代谢调节 302

Ⅱ．微生物的代谢调节 302

Ⅲ．瓦勃氏定容呼吸测定仪的应用 308

3-7　瓦勃氏呼吸仪反应瓶常数的测定 308

3-8 应用瓦勃氏呼吸仪测定NaHCO3释放CO2的体积 312

3-9　大肠杆菌的呼吸作用——耗氧速度的测定及碘乙酸的影响 319

3-10　发酵液中L-谷氨酸的定量测定 322

Ⅳ．抗生素筛选中的早期鉴别 335

3-11　抗生素的一般筛选方法 335

3-12　用纸上pH层析法确定抗生素的离子特性 339

3-13　用捷克八溶剂系统纸层析法鉴别抗生素 342

3-14　用纸电泳法鉴别抗生素的离子特性 345

3-15　用薄层层析法分离和鉴别抗生素 348

Ⅴ．蛋白质、酶及核酸的测定 351

3-16　蛋白质含量的简易测定法 351

3-17　α淀粉酶活力的测定 354

3-18　蛋白酶活力的测定 358

3-19　细菌细胞中大分子DNA的分离与提纯 363

3-20　细菌细胞核酸含量的测定 366

3-21　用二苯胺法作脱氧核糖核酸（DNA）的定量测定 369

3-22 细菌转移核糖核酸（tRNA）的分离纯化 373

3-23 细菌核糖体的分离与纯化 375

3-24　核糖核酸（RNA）的定量测定 379

Ⅵ．大肠杆菌λ噬菌体及其DNA的制备与鉴定 383

3-25　λ噬菌体——E．coli225（λ）的制备及其效价测定 383

3-26　λ噬菌体——E．coli225（λ）的分离纯化 387

3-27　λ噬菌体DNA的制备及琼脂糖电泳鉴定 394

3-28 限制性内切核酸酶EcoRI的分离纯化及其对λ-DNA的酶切作用 398

3-29 λDNA生物学活性的测定——对大肠杆菌的转染作用 404

Ⅰ．大肠杆菌（E．coli）lac-突变型的诱变、筛选和鉴定 408

参考文献 408

第四章　微生物的遗传变异和育种 412

4-1　在鉴别性培养基上检出大肠杆菌乳糖操纵子的各种突变型 412

4-2　用紫外线诱变大肠杆菌筛选乳糖调节基因突变型 415

4-3　用EMS诱变大肠杆菌筛选i-突变型 419

4-4　用转座子诱发的插入突变来筛选i-、z-和y-突变型 424

4-5　利用抑制基因来检测无义突变 428

Ⅱ．高产菌株的诱变育种 433

4-6　通过筛选抗反馈抑制突变型提高赖氨酸产量 433

4-7　用紫外线和氟乙酸选育酵母菌的柠檬酸高产菌株 436

4-8　耐高浓度自身代谢产物的抗反馈抑制突变型的选育 442

4-9　用快中子辐照选育抗生素高产菌株 448

4-10　应用快中子和多烯类抗生素选育霉菌蛋白酶的高产菌株 459

Ⅲ．营养缺陷型突变株的筛选 463

4-11酵母菌营养缺陷型的诱变、筛选和鉴定 463

Ⅳ．诱变剂的检测 471

4-12　用Ames方法检测诱变剂和致癌剂 471

4-13　用中断杂交法进行基因定位 480

Ⅴ．基因定位 480

4-14　通过梯度转移进行基因定位 485

4-15　lacz基因内点突变的精细定位 488

Ⅵ．基因重组 492

4-16　细菌蛋白酶产生菌的杂交育种 492

4-17　半乳糖基因的高频转导 495

Ⅶ．基因工程技术 501

4-18　λ噬菌体DNA和Charon4ADNA的酶切图谱分析 501

4-19　λ噬菌体DNA的体外包装 505

4-20　大肠杆菌pBR322质粒DNA的分离和纯化 511

参考文献 516

Ⅰ．免疫血清学技术 519

5-1　免疫血清的制备 519

第五章　免疫学实验技术 519

5-2　试管凝集反应 525

5-3　双向琼脂扩散试验 527

5-4　对流免疫电泳 530

5-5　琼脂免疫电泳 532

5-6　火箭免疫电泳 536

5-7　交叉免疫电泳和火箭-线形免疫电泳 539

5-8　免疫球蛋白的提取——盐析法 543

Ⅱ．免疫荧光技术 543

5-9　免疫球蛋白的纯化——离子交换层析法 547

5-10　免疫荧光标记及测定方法 551

Ⅲ．细胞免疫技术 557

5-11 白细胞移动抑制试验（LMIT） 557

5-12　免疫特异性玫瑰花结试验 560

5-13 抗体生成细胞的检测——溶血空斑试验 563

5-14　小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬试验 566

参考文献 573