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第一篇 生化物质分离纯化技术的基本原理 1

第一章　培养液的预处理 2

一、凝聚和絮凝 2

二、加沉淀剂 2

三、调节培养液的pH 3

四、吸附作用 3

第二章　细胞破碎 3

一、机械法 4

二、非机械法 6

第三章　基因工程菌包涵体的分离纯化 7

一、包涵体的洗涤和目标蛋白的变性溶解 8

二、目标蛋白的复性 8

第四章　沉淀法 10

一、盐析法沉淀蛋白质 10

二、等电点沉淀法 13

三、有机溶剂沉淀法 13

四、其他沉淀方法 13

第五章　膜分离技术 14

一、膜分离技术的分类 14

二、膜的性能参数 15

三、膜的结构和材料 16

四、膜组件型式和操作方式 17

五、浓差极化 18

六、影响膜分离的因素 19

七、膜的污染和清洗 20

八、膜亲和过滤法 20

第六章　有机溶剂萃取法 20

一、基本原理和操作 20

二、分配系数和弱电解质的分配平衡 21

三、影响萃取操作的因素 22

第七章　两水相萃取 24

一、基本概念 24

二、成相系统 24

三、分配平衡 25

四、影响分配系数K？的因素 26

五、亲和分配 27

第八章　反胶束萃取 28

一、基本概念和反胶束相系统 28

二、反胶束萃取过程 30

三、影响反胶束萃取的因素 31

四、亲和反胶束萃取 33

第九章　超临界流体萃取 33

一、超临界流体的特性 33

二、超临界流体的溶解性能 35

三、超临界流体萃取的基本操作和设备 36

四、夹带剂对超临界CO2流体萃取的强化作用 37

五、超临界萃取的特点和应用 37

第十章　微波萃取技术 38

一、基本原理 38

二、微波萃取的特点 39

三、影响微波萃取的因素 40

四、微波萃取设备 41

五、微波萃取技术的应用 42

第十一章　离子交换法 42

一、离子交换剂 42

二、离子交换树脂的分类 43

三、离子交换树脂几个主要的物理参数 45

四、离子交换树脂的交换能力和选择性 46

五、离子交换树脂和操作条件的选择 47

第十二章　大网格（大孔）树脂吸附法 47

一、大网格树脂吸附剂的结构和类型 47

二、吸附等温线 49

三、大网格树脂吸附法提取生化物质工艺条件的选择 49

第十三章　色层分离法 51

一、基本概念 51

二、凝胶层析 53

三、离子交换层析 55

四、亲和层析 57

第十四章　电泳技术 59

一、基本原理 59

二、凝胶电泳 60

三、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 61

四、等电聚焦电泳 62

参考文献 65

第二篇 生物分离工程基础实验 67

实验一 絮凝技术预处理发酵液及滤饼的质量比阻测定 67

实验二　碱性蛋白酶的盐析沉淀 69

实验三　Folin法测定碱性蛋白酶活性 71

实验四　有机溶剂萃取法中pH对表观分配系数的影响 74

实验五　反胶束萃取法pH对萃取率的影响 76

实验六　PEG/(NH4)2SO4两水相系统的相图 78

实验七　两水相系统中蛋白质分配系数的测定 79

实验八　考马斯亮蓝比色法测定蛋白质含量 81

实验九　离子交换树脂总交换容量的测定 82

实验十　大网格吸附树脂的吸附等温线的制作 86

实验十一　凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量 88

实验十二　聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点 91

第三篇 生物分离工程大型综合实验 95

实验一　四环素的沉淀法提取及鉴定 95

Ⅰ 四环素的沉淀法提取工艺 95

Ⅱ 比色法测定四环素的化学效价 97

Ⅲ 薄板层析法鉴定四环素成品纯度 98

实验二 用超滤技术浓缩和分离碱性蛋白酶 100

实验三 用两种分离技术提取红霉素的工艺比较 104

Ⅰ 有机溶剂萃取法制备硫氰酸红霉素的工艺研究 104

Ⅱ 大网格树脂吸附法提取红霉素的工艺研究 106

Ⅲ 比色法测定红霉素效价 109

实验四 用反胶束萃取技术提取胰蛋白酶 111

Ⅰ 反胶束萃取法提取胰蛋白酶的工艺研究 111

Ⅱ 胰蛋白酶酶活和比活的测定方法 114

实验五　超临界萃取青蒿素和HPLC鉴定 116

Ⅰ 超临界CO2流体萃取青蒿素 116

Ⅱ 用高效液相色谱（HPLC）鉴定青蒿素纯度 119

实验六　用微波萃取和大网格树脂吸附法提取茶多酚 122

Ⅰ 微波萃取和常规萃取提取茶多酚的工艺比较 123

Ⅱ 大网格树脂吸附法精制茶多酚 126

Ⅲ 酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚含量 128

实验七　用两种分离技术提取柠檬酸的工艺比较 129

Ⅰ 钙盐沉淀法提取柠檬酸 130

Ⅱ 离子交换法提取柠檬酸 134

实验八　离子交换法提取抗生素的工艺研究 137

实验九　离子交换法制备纯水 140

实验十　凝胶层析法纯化胰激肽原酶 144

Ⅰ Sephadex G-75凝胶层析法纯化胰激肽原酶 144

Ⅱ 紫外分光光度法测定胰激肽原酶活性 148

实验十一　重组人酸性成纤维细胞生长因子的分离和纯化 150

Ⅰ 菌体的细胞破碎和前处理 150

Ⅱ 亲和层析法纯化目标蛋白 153

Ⅲ SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定相对分子质量及纯度 155

实验十二　基因工程血管生长抑素包涵体的变性和复性工艺研究 159

Ⅰ 菌体的细胞破碎和洗涤 160

Ⅱ 目标蛋白的变性溶解和凝胶层析纯化的工艺研究 162

Ⅲ 目标蛋白的复性工艺研究 165

Ⅳ 四唑盐（MTT）比色法检测细胞活性 167

实验十三　包涵体TRAIL蛋白的复性和纯化 170

Ⅰ 包涵体TRAIL蛋白复性的前处理 171

Ⅱ　包涵体复性方法的研究 173

Ⅲ 用亲和层析和离子交换层析法分离纯化目标蛋白复性液 176

附录 181

一、实验室常用酸碱的密度和浓度 181

二、一些常见蛋白质相对分子质量参考值 181

三、一些常见蛋白质的等电点参考值 182

四、某些氨基酸的等电点参考值 183

五、硫酸铵饱和度计算表 184

六、酸度计标准缓冲溶液的配制方法 185

七、常用缓冲溶液的配制方法 186