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第一章 核酸的分子结构与分子杂交的基本原理 1

第一节 发现核酸 1

第二节 核酸的分子结构 5

一、核苷酸的结构 5

二、DNA的分子结构 9

三、RNA的分子结构 18

第三节 核酸分子杂交的基本原理及在医学中的应用 21

一、DNA的变性 23

二、DNA的复性 25

三、核酸杂交在医学中的应用简介 27

参考文献 27

第二章 核酸分子杂交的类型 28

第一节 固相核酸分子杂交类型 28

一、菌落原位杂交（colony in situ hybridization） 28

二、斑点杂交（dot blot） 29

三、Southern印迹杂交（Southern blot） 30

四、Northern印迹杂交（Northern blot） 31

五、组织原位杂交（tissue in situ hybridization） 32

六、固相夹心杂交 35

七、其他固相杂交类型 35

八、固相核酸杂交的几点说明 36

第二节 液相核酸分子杂交类型 36

一、吸附杂交 36

二、发光液相杂交 37

三、液相夹心杂交 37

四、复性速率液相分子杂交 38

参考文献 38

第三章 核酸探针的种类、标记及检测 39

第一节 核酸探针的种类 40

一、DNA探针 40

二、cDNA探针 41

三、RNA探针 41

四、寡核苷酸探针 42

第二节 核酸探针的标记和检测 43

一、放射性同位素核酸探针的标记和检测 44

二、非放射性核酸探针的标记和检测 47

参考文献 49

第四章 核酸分子杂交实验因素的优化 50

一、探针的选择 50

二、探针的标记方法 51

三、探针的浓度 51

四、杂交率 52

五、杂交最适温度 52

六、杂交的严格性 53

七、杂交反应时间 54

八、杂交促进剂 55

参考文献 55

第五章 斑点杂交 56

一、概述 56

二、杂交方法 57

三、斑点杂交的应用 61

参考文献 63

第六章 Southern印迹杂交 64

第一节 Southern印迹杂交的基本原理 64

一、DNA从凝胶到膜上的转移方法 64

二、Southern杂交膜 67

三、核酸探针的标记 68

第二节 Southern印迹法的基本过程 70

一、DNA样品的酶切和电泳 70

二、准备用于转移的凝胶 72

三、DNA从琼脂糖凝胶转移到固相支持物 73

四、探针标记 74

五、杂交 75

六、洗膜 77

七、杂交结果的检测 77

八、杂交膜的重复使用 78

九、注意事项 78

十、杂交严谨性 80

第三节 Southern杂交的应用进展 81

参考文献 85

第七章 Northern印迹杂交 86

第一节 Northern印迹杂交的基本原理 86

第二节 杂交方法 88

一、RNA电泳 88

二、将变性RNA转移至尼龙膜 92

三、杂交和结果检测 96

四、杂交结果的分析 100

第三节 Northern杂交的应用与进展 101

一、反向Northern杂交和Northern杂交筛选mRNA表达 101

二、高通量反向Northern印迹杂交和Northern杂交 102

参考文献 105

第八章 原位杂交 106

第一节 原位杂交组织化学技术的由来及发展 106

第二节 原位杂交技术的基本方法 108

一、玻片准备和组织固定 109

二、样品的预处理 110

三、预杂交 110

四、杂交 111

五、杂交后的清洗 112

六、免疫学检测 112

七、观察结果 115

第三节 原位杂交的影响因素 116

一、影响杂交的主要因素 116

二、影响杂交的其他因素 118

第四节 探针标记 120

一、探针标记的直接法和间接法 120

二、半抗原标记 120

三、标记方法 124

四、地高辛、生物素或荧光染料标记探针 125

第五节 荧光原位杂交 137

一、FISH技术的发展史 138

二、FISH技术操作 140

三、FISH的应用 146

四、FISH技术的进展 149

参考文献 153

第九章 菌落原位杂交 154

一、小量细菌克隆的原位杂交筛选 155

二、中等量细菌克隆的原位杂交筛选菌落 155

三、大量细菌克隆的原位杂交筛选 157

四、菌落的裂解及DNA结合于滤膜 158

五、与菌落的影印滤膜进行杂交 159

参考文献 160

第十章 DNA芯片技术 162

第一节 生物芯片与DNA芯片 162

一、生物芯片与DNA芯片的概念 163

二、DNA芯片的主要类型 164

第二节 DNA芯片技术的基本原理与方法 165

一、芯片的制备 165

二、样品的准备 169

三、分子杂交 169

四、检测分析 171

第三节 DNA芯片技术的应用概况 171

一、DNA序列分析 172

二、基因突变检测 173

三、基因表达谱分析 174

四、基因组研究 174

五、基因诊断 176

六、药物研究与开发 176

七、其他领域 177

参考文献 177

常用缓冲溶液的配制 178