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第一篇　动物细胞培养技术 2

第一章 动物细胞培养概述 2

第一节 动物细胞培养的基本概念及其优缺点 2

一、动物细胞培养的概念 2

二、动物细胞培养的优缺点 2

第二节　动物细胞培养发展史 4

一、动物细胞培养技术的创立 4

二、动物细胞培养技术的发展 5

第三节　动物细胞培养的应用 7

一、在生物学领域的基础研究中的应用 7

二、在临床医学上的应用 7

三、在动物育种上的应用 8

四、在生物制品生产上的应用 8

第四节 动物细胞培养工作的基本要求和工作方法 8

一、动物细胞培养工作的基本要求 8

二、动物细胞培养工作方法 9

【理论难点自测】 10

实验实训项目 动物细胞培养的无菌操作 10

第二章　动物细胞培养的基本知识 13

第一节　培养细胞的细胞生物学 13

一、培养细胞的生长类型和形态特征 13

二、培养细胞分化状态的变化 15

三、培养细胞的生长特点 16

四、培养细胞的生长和增殖过程 18

第二节　培养细胞的生长条件 21

一、营养需要 21

二、生存环境 23

第三节　动物细胞培养实验室 24

一、动物细胞培养实验室的设置 24

二、动物细胞培养实验室的设备 26

三、动物细胞培养实验室常用器具 29

【理论难点自测】 33

实验实训项目 动物细胞培养常用设备的使用 33

第三章 动物细胞培养的准备工作 36

第一节　培养用品的清洗、包装和灭菌 37

一、培养用品的清洗 37

二、培养用品的包装 40

三、培养用品的消毒灭菌 41

第二节 动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理 44

一、平衡盐溶液 44

二、消化液 44

三、天然培养基 45

四、合成培养基 48

五、完全培养基 49

六、无血清培养基 50

七、其他常用液 50

【理论难点自测】 51

实验实训项目一 动物细胞培养实验器具的清洗、包装和灭菌 52

实验实训项目二 几种动物细胞培养用液的配制和无菌处理 55

第四章 动物细胞培养的基本技术和方法 59

第一节　培养细胞的取材与分离 59

一、培养细胞的取材 59

二、组织材料的分离 61

第二节　动物细胞的原代培养技术 62

一、组织块培养法 63

二、消化培养法 64

第三节　培养细胞的观察和检测技术 64

一、培养细胞的常规观察 64

二、细胞生长曲线的测定 66

三、细胞培养的污染检测及其排除 67

第四节　动物细胞传代培养技术 70

一、原代培养的首次传代 70

二、细胞传代方法 71

三、细胞系的维持 72

第五节　细胞的冻存、复苏和运输技术 72

一、细胞的冻存 72

二、细胞的复苏 73

三、细胞的运输 74

【理论难点自测】 74

实验实训项目一　细胞计数及密度换算 75

实验实训项目二　小鼠胎儿细胞的原代培养（组织块培养法） 77

实验实训项目三 鸡胚原代细胞的培养（消化培养法） 79

实验实训项目四　培养细胞的观察 82

实验实训项目五　细胞活性检查 84

实验实训项目六　原代培养细胞的传代 86

实验实训项目七　细胞冻存技术 88

实验实训项目八　细胞的常规复苏技术 90

第五章 动物细胞的大规模培养 93

第一节 动物细胞大规模培养概述 93

一、动物细胞大规模培养技术的概念 93

二、动物细胞大规模培养技术的应用 93

三、动物细胞大规模培养的一般工艺流程 94

第二节　动物细胞大规模培养的方法和操作方式 95

一、动物细胞大规模培养的方法 95

二、大规模培养技术的操作方式 101

第三节　动物细胞生物反应器 103

一、搅拌罐式生物反应器 104

二、气升式生物反应器 105

三、中空纤维生物反应器 107

四、其他生物反应器 108

【理论难点自测】 108

实验实训项目一 Vero细胞的微载体培养 109

实验实训项目二 动物细胞生物反应器的使用或参观 110

第六章 特殊细胞培养概要 111

第一节　正常组织细胞的培养 111

一、上皮细胞培养 111

二、神经细胞培养 113

第二节　肿瘤细胞培养 114

一、体外培养肿瘤细胞的生物学特性 114

二、肿瘤细胞的培养要点 115

【理论难点自测】 117

实验实训项目一 异体动物接种成瘤实验 118

实验实训项目二 肿瘤细胞的软琼脂集落实验 119

第七章 与动物细胞培养相关的部分实验技术 122

第一节　单克隆抗体的制备 122

一、单克隆抗体的概念 122

二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理 123

三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要过程 123

四、制备单克隆抗体可能出现的主要问题 128

第二节　细胞的基因转染技术 129

一、待转染细胞的准备 129

二、常用的细胞转染方法 129

【理论难点自测】 131

实验实训项目一　细胞融合 132

实验实训项目二　细胞克隆 135

第二篇　植物细胞培养技术 140

第八章 植物细胞培养概论 140

第一节　植物组织与细胞培养 140

一、植物组织培养 140

二、植物细胞培养 142

第二节　植物细胞培养的发展史 143

一、植物细胞培养的创立阶段 143

二、植物细胞培养的发展阶段 144

三、植物细胞培养的应用研究阶段 144

第三节　植物细胞培养的应用 145

一、在植物育种方面的应用 146

二、在植物脱毒方面的应用 147

三、在离体快繁方面的应用 147

四、在植物种质资源保存方面的应用 147

【理论难点自测】 147

实验实训项目 植物细胞培养无菌操作训练 148

第九章 植物细胞培养的条件 150

第一节 植物细胞培养的实验室条件 150

一、植物细胞培养实验室的设计 150

二、植物细胞培养实验室的仪器和设备 151

三、植物细胞培养的培养器具 153

第二节　植物细胞培养的培养基 155

一、培养基的组成 156

二、常用的植物细胞培养基种类 158

三、植物细胞培养的培养基配制 159

第三节 植物细胞培养的环境条件 162

一、温度 162

二、湿度 163

三、光照 163

四、气体 164

五、pH 164

【理论难点自测】 165

实验实训项目一　植物组织细胞培养基母液的配制和保存 166

实验实训项目二 植物组织细胞培养基的配制和灭菌 167

实验实训项目三　植物细胞培养常用设备的使用 169

第十章 植物细胞培养的基本过程和方法 171

第一节　植物细胞的获取 171

一、从外植体直接分离植物细胞 171

二、通过愈伤组织诱导获取植物细胞 173

第二节　植物细胞的悬浮培养 175

一、悬浮细胞的诱导 175

二、悬浮培养细胞的生长和测定 176

三、悬浮培养细胞的同步化 176

第三节　植物细胞的固定化培养 177

一、植物细胞固定化的方法 177

二、固定化植物细胞的培养方法 179

第四节　单细胞培养 179

一、植物单细胞的制备 179

二、植物单细胞的培养 179

三、影响植物单细胞培养的因素 181

第五节　原生质体培养 182

一、植物原生质体的特点 182

二、植物原生质体的制备 183

三、植物原生质体的培养方法 186

【理论难点自测】 187

实验实训项目一　胡萝卜和白菜成熟胚愈伤组织培养 187

实验实训项目二　植物细胞悬浮培养 189

第十一章 植物细胞的大规模培养 191

第一节　植物细胞大规模培养概述 191

一、植物细胞大规模培养技术的概念 191

二、植物细胞大规模培养的应用和工业前景 191

三、植物细胞大规模培养流程 194

第二节 植物细胞大规模培养技术 194

一、植物细胞规模化培养体系的建立 194

二、植物细胞的大规模培养方法 195

第三节　植物细胞生物反应器 197

一、搅拌式生物反应器 198

二、非搅拌式生物反应器 199

三、植物细胞固定化培养生物反应器 200

【理论难点自测】 201

实验实训项目 种子细胞筛选与细胞规模化培养 201

附录　细胞培养技术常用术语中英文对照 203

参考文献 208