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第一篇 生物化学与分子生物学实验基本要求 1

第一章 实验室安全守则 1

第一节 实验室规则 1

第二节 实验室安全 1

第二章 实验设计与实验报告 4

第一节 实验设计 4

第二节 实验误差 5

第三节 实验记录 6

第四节 实验报告 6

第三章 基本实验技能 8

第一节 基本操作 8

第二节 常用实验器材的使用 9

第四章 实验动物与实验样品 12

第一节 实验动物 12

第二节 实验样品 13

第二篇 基本实验技术及原理 15

第五章 分光光度技术 15

第一节 基本原理 15

第二节 分光光度计 16

第六章 层析技术 18

第一节 基本原理 18

第二节 吸附层析 18

第三节 分配层析 19

第四节 离子交换层析 19

第五节 凝胶层析 20

第六节 亲和层析 21

第七章 电泳 24

第一节 电泳的基本原理 24

第二节 电泳的分类 25

第三节 常用电泳技术 26

第四节 电泳后大分子的检测 28

第八章 离心 29

第一节 离心技术的基本原理 29

第二节 离心分离的常用方法 30

第三节 离心机的主要类型及使用 30

第九章 聚合酶链式反应 33

第一节 标准PCR 33

第二节 逆转录PCR 34

第三节 实时荧光定量PCR 34

第四节 原位PCR 35

第五节 PCR扩增产物分析 35

第十章 印迹技术 37

第一节 核酸分子杂交 37

第二节 蛋白质免疫印迹 38

第十一章 重组DNA技术 40

第一节 目的基因的获取 40

第二节 载体的选择与构建 41

第三节 目的DNA与载体的连接 41

第四节 重组DNA分子转入受体细胞 42

第五节 重组体的筛选与鉴定 42

第六节 目的基因的表达 43

第三篇 生物化学实验 44

第十二章 蛋白质含量测定 44

实验一 改良Lowry法测定蛋白质含量 44

实验二 改良微量凯氏定氮法测定蛋白质含量 45

实验三 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 47

实验四 BCA法测定蛋白质含量 48

实验五 紫外吸收法测定蛋白质含量 49

第十三章 蛋白质的分离与纯化 51

实验六 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 51

实验七 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离血清蛋白 52

实验八 凝胶柱层析法分离血红蛋白与DNP-胰糜蛋白酶 54

实验九 离子交换层析法分离混合氨基酸 55

实验十 亲和层析法纯化谷胱甘肽硫转移酶 57

第十四章 酶学实验 59

实验十一 血清肌酸激酶活性测定 59

实验十二 碱性磷酸酶活性测定 61

实验十三 改良穆氏法测谷-丙转氨酶活性 62

实验十四 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 64

实验十五 乳酸脱氢酶同工酶分析 65

第十五章 糖代谢 67

实验十六 邻甲苯胺法测血糖浓度 67

实验十七 葡萄糖氧化酶法测血糖浓度 68

实验十八 班氏定性法检测尿糖 70

实验十九 胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响 71

实验二十 饱食和饥饿对动物肝糖原含量的影响 72

第十六章 脂代谢 74

实验二十一 血清甘油三酯含量的测定 74

实验二十二 血清胆固醇含量的测定 76

实验二十三 酮体的生成及测定 77

实验二十四 超速离心法分离血浆脂蛋白 78

第四篇 分子生物学实验 80

第十七章 基因组DNA的提取与鉴定 80

实验二十五 蛋白酶K消化法提取基因组DNA 80

实验二十六 改良碘化钾法提取人外周血基因组DNA 82

实验二十七 磁珠法提取外周血基因组DNA 83

实验二十八 DNA的琼脂糖凝胶电泳 84

第十八章 RNA的提取与鉴定 86

实验二十九 异硫氰酸胍法提取总RNA 86

实验三十 动物组织mRNA的提取 88

实验三十一 RNA的甲醛变性凝胶电泳 90

第十九章 感受态细胞的制备和转化 92

实验三十二 CaCl2法制备感受态细胞及质粒DNA转化 92

实验三十三 大肠埃希菌的电击转化 93

第二十章 质粒DNA的提取与酶切鉴定 96

实验三十四 碱裂解法提取质粒 96

实验三十五 煮沸裂解法提取质粒 98

实验三十六 质粒DNA的酶切鉴定 99

第二十一章 聚合酶链式反应 101

实验三十七 聚合酶链式反应（PCR） 101

实验三十八 逆转录PCR 102

实验三十九 实时定量PCR 104

第二十二章 印迹技术 105

实验四十 Southern印迹杂交实验 105

实验四十一 Northern印迹杂交实验 107

实验四十二 蛋白质免疫印迹实验 109

第五篇 综合实验 112

实验四十三 糖脂代谢检测 112

实验四十四 无虹膜症的基因诊断 113

实验四十五 重组人干扰素的制备 114

第六篇 自设计实验 116

实验四十六 奶粉中蛋白质含量测定 116

实验四十七 果蔬维生素C含量测定 116

实验四十八 血清淀粉酶活性测定 117

实验四十九 亲子关系的鉴定 118

实验五十 2型糖尿病的基因多态性检测 119

实验五十一 转基因小鼠基因型鉴定 119