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第一篇 组织培养技术 3

第一章 绪论和基本理论知识&鄂征 3

第一节 绪论 3

一、组织培养基本概念 3

二、对组织培养的评价 5

三、组织培养发展简史 5

第二节 组织培养细胞生物学 9

一、体内外细胞的差异和分化 9

二、培养细胞形态分类 11

三、培养细胞形态结构 14

四、组织培养细胞的生长和增殖过程 16

五、培养细胞增殖动力学 20

六、组织培养细胞遗传学特征 23

七、细胞和细胞、细胞和基质的相互关系 26

第三节 培养细胞生存环境、条件和代谢 26

一、无污染环境 26

二、温度 26

三、气体环境和氢离子浓度 27

四、体外培养细胞生存所需基本物质 28

五、渗透压 31

六、培养基 31

七、附着底物 32

八、抑制细胞生长因素 32

九、细胞代谢和调控 32

第四节 体外培养细胞成功率的分析 35

一、组织和细胞供体年龄 35

二、培养条件 35

三、贴附底物 36

四、培养方法 36

第五节 建立细胞系或细胞株 36

一、体外培养细胞的种类和命名 36

二、建立细胞系（或株）的要求 38

三、已建立细胞系或株的鉴定、管理和使用 38

第二章 组织培养设施和基本条件&徐新来 鄂征 40

第一节 实验室设计 40

第二节 无菌操作设施和工作间 40

一、净化工作台 40

二、无菌操作室 41

三、无菌操作箱 42

四、清洗和准备区 43

五、温育和贮存区 43

六、观察和研究区 43

第三节 实验室设备 43

一、电热恒温箱 43

二、电热干燥箱 43

三、冰箱 44

四、显微镜 44

五、水纯化装置 44

六、洗刷装置 44

七、抽滤装置 44

八、细胞冷冻贮存器 45

九、离心机 45

十、天平 46

十一、加样器 46

第四节 器械 47

第五节 培养器皿 47

一、玻璃瓶皿 47

二、塑料瓶皿 48

第三章 培养用液&徐新来 鄂征 50

第一节 水和平衡盐溶液 51

一、水 51

二、平衡盐溶液 51

第二节 天然培养基 52

一、鸡血浆的制备 52

二、鸡胚浸出液的制备 53

三、血清 54

四、水解乳蛋白 56

五、胶原 56

第三节 合成培养基 56

一、合成培养基的种类 57

二、合成培养基的成分 61

三、合成培养液的配制 62

四、无血清培养基 63

第四节 培养基的选择 67

一、经验法 67

二、实验法 68

第五节 其它常用液 68

一、消化液 68

二、pH调整液 69

三、抗生素液 70

第四章 清洗与消毒&鄂征 徐新来 71

第一节 清洗 71

一、玻璃器皿的清洗 71

二、胶塞的清洗 74

三、塑料器皿的清洗 74

四、包装 74

第二节 消毒 74

一、物理消毒法 75

二、化学消毒法 76

三、抗生素消毒（灭菌） 76

第五章 基本培养技术&鄂征 78

第一节 组织培养的基本操作和培养技术 78

一、培养操作基本要领和要求 78

二、基本培养操作技术 79

第二节 常规组织培养法 92

一、天然培养基组织培养法 92

二、人工合成培养基组织培养法 92

第三节 特殊培养法 98

一、二倍体细胞培养法 98

二、加支持物培养法 100

三、单细胞分离（克隆）培养 100

四、球体细胞培养 107

五、微载体细胞培养法&徐新来 109

六、悬浮培养法&鄂征 111

第六章 组织培养的污染、检测和排除&鄂征 徐新来 112

第一节 污染途径 112

第二节 污染对细胞的影响 113

一、真菌污染 113

二、细菌污染 114

三、支原体污染 114

第三节 微生物污染的排除 117

一、抗生素除菌法 117

二、加温除菌法 118

三、动物体内接种除菌法 118

四、巨噬细胞吞噬法 118

第七章 个别细胞和组织的培养&鄂征 120

第一节 正常细胞培养 120

一、上皮细胞类培养 121

二、结缔组织类细胞培养 128

三、肌组织细胞培养 131

四、神经组织细胞培养 132

第二节 肿瘤细胞培养 133

一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 133

二、培养方法 134

第八章 组织培养细胞性状生物学检测&鄂征 139

第一节 细胞一般形态学观察法 139

一、固定细胞观察法 139

二、电子显微镜（电镜）观察法 143

第二节 免疫细胞化学技术观察细胞成分法&李吉友 144

一、原理 144

二、标本制备及固定 145

三、染色方法 146

第三节 活细胞直接观察方法&鄂征 150

一、相差观察和摄影 150

二、缩时显微摄电影和闭路电视记录 151

第四节 培养细胞生物学性状检测 151

一、细胞培养常规检查 151

二、细胞生物学性状检测 153

第九章 细胞遗传学性状检测&鄂征 162

第一节 性染色质检测 162

一、原理 162

二、方法 162

第二节 培养细胞染色体显示法 164

一、原理 164

二、传代培养细胞染色体显示法 165

三、人末梢血微量全血培养染色体显示法 167

四、羊水细胞培养 169

第三节 染色体结构显示和检测 170

一、染色体显带 170

二、姐妹染色单体分化染色 172

三、染色体脆性位点的检测 174

四、微核检测（陈泉光） 175

五、非程序DNA合成检测（UDS） 176

第四节 染色体基因定位&鄂征 178

一、原理 178

二、染色体原位杂交基因定位技术&吕有勇 鄂征 179

第五节 染色体显微切割法 186

一、原理 186

二、方法 187

第十章 组织培养细胞工程技术&鄂征 190

第一节 建立突变细胞系 190

一、原理 190

二、方法 191

第二节 细胞融合&陈泉光 鄂征 193

一、原理 193

二、聚乙二醇融合法 193

第三节 细胞脱核法&鄂征 198

一、原理 198

二、方法 199

第四节 细胞同步化法 199

第十一章 组织培养在实验研究中的应用&鄂征 202

第一节 组织培养药物测试 202

一、细胞选择 203

二、检测药物 204

第二节 细胞培养在杂交瘤技术中的应用&徐新来 207

一、原理 207

二、杂交瘤细胞的制备 209

三、单克隆抗体的大量制备 214

第三节 酶联免疫技术（ELISA）检测抗体法&万文徽 214

一、原理 214

二、方法 214

三、实验室中几种酶联免疫测定方式及其用途 219

第十二章 体外培养细胞的转化和DNA转导技术&鄂征 220

第一节 基本概念和原理 220

一、细胞转化与恶变 220

二、细胞转化基本过程 221

第二节 诱变因素诱发培养细胞转化的程序 222

一、细胞的选择 222

二、诱发培养细胞的转化 224

三、转化细胞的检测 225

第三节 几种常用转化细胞和转化技术 226

一、致癌化学物转化细胞 226

二、病毒转化细胞 226

三、癌基因转化细胞 228

第四节 基因细胞内导入技术 228

一、基因导入的概念、生物学意义和技术要点&甄理达 鄂征 228

二、技术方法&甄理达 鄂征 吕有勇 230

三、转基因技术&鄂征 242

第二篇 分子细胞学技术 253

第十三章 分子细胞学基本理论知识&鄂征 253

第一节 分子细胞学技术基本理论知识 253

一、细胞和基因 253

二、RNA生物学性状 260

三、遗传和变异 261

第二节 细胞基因工程概要 262

一、细胞基因工程原理 262

二、培养细胞和细胞基因工程 262

三、分子细胞学实验安全知识 262

第十四章 分子细胞学实验室基本设备、技术原理和常规技术操作&鄂征 264

第一节 基本设备条件&鄂征 264

一、培养设备 264

二、灭菌设备 264

三、塑料和玻璃制品 264

四、小型仪器设备 265

五、离心机 265

六、电泳设备 265

七、高级仪器设备 265

八、专用操作间 266

第二节 细胞中大分子的分离、纯化等常规技术 266

一、层析分离法 266

二、核酸提取法&柯杨 鄂征 271

三、电泳技术&李振甫 鄂征 280

四、细菌培养技术&鄂征 289

五、噬菌体的培养、滴定和保存 297

第三节 细胞基因工程生物工具（工具酶、质粒和噬菌体） 299

一、工具酶 299

二、载体 309

三、核素探针标记技术 324

四、非放射性标记法 338

第十五章 细胞基因工程 341

第一节 DNA物理图谱和DNA分子体外连接（重组）&张青云 张建明 341

一、DNA物理图谱 341

二、DNA体外连接 346

三、影响连接相关因素 353

四、重组子转化和扩增 354

第二节 基因克隆&鄂征 357

一、基因组文库法 357

二、cDNA文库 368

第三节 细胞外基因扩增&邓国仁 何洛文 张青云 李诤 376

一、PCR原理 376

二、PCR条件的要求和建立 376

三、PCR最适条件的选择 381

四、PCR方法 381

五、PCR产物分析方法 382

六、PCR技术的应用 383

第四节 未知基因的探查&李华 385

一、差减cDNA文库法 385

二、差异显示法 392

第五节 同源重组基因打靶&鄂征 395

一、同源重组纲要 395

二、同源重组技术方法 400

第十六章 培养细胞基因性状探查和表达的检测 412

第一节 DNA（基因）探查检测&柯杨 412

一、Southern Blot 412

二、点迹印迹杂交 416

第二节 培养细胞中RNA的检测 419

一、甲醛胶电泳分离RNA及Northern Blot的基本原理 419

二、方法 420

第三节 蛋白质检测（Western Blot） 421

一、专用设备及试剂 422

二、方法 422

第四节 基因性状的其它检测方法&鄂征 423

一、基因长度多态性（RFLP）检测 423

二、基因遗传变异检测 427

第五节 DNA序列分析&蔡红 427

一、基本原理 427

二、DNA测序技术 428

第十七章 分子细胞学技术在研究中的应用 436

第一节 抗癌药物耐药性的检测&韩复生 张霆钧 436

一、原理 436

二、多药耐药性检测方法 438

三、DNA拓扑异构酶的检测 443

四、谷胱苷肽（GSH）及其转移酶的检测 450

第二节 基因诊断和治疗技术&鄂征 452

一、关于基因诊断和治疗 452

二、基因诊断和治疗的理论基础 453

三、基因诊断 454

四、基因治疗 457

附录 463

一、常用缩写词 463

二、重要名词释义 466

三、人和动物的主要细胞系（株） 473

四、基本单位和数据 478

五、核酸数据 482

六、氨基酸和蛋白质数据 485

七、杂用干液 487

八、常用缓冲液 488

九、酸和碱数据 494

十、常用层析数据 495

十一、培养基 497

十二、载体 501

十三、细菌菌株一览表 502

十四、常用大肠杆菌菌株遗传标记 505

参考文献 507

《组织培养和分子细胞学技术》中文索引 508