生物化学技术原理及应用 第4版pdf电子书版本下载

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第一编　概述 3

第一章　生命大分子物质的制备 3

第一节　材料的选择与处理 3

一、材料选择 3

二、材料处理 4

第二节　测定方法的确立 5

一、目的与要求 5

二、常用的测定方法 5

第三节　细胞破碎 8

一、机械破碎 8

二、溶胀和自溶 9

三、化学处理 9

四、生物酶降解 9

第四节　抽提 10

一、抽提的含义 10

二、抽提有效成分的影响因子 10

第五节　浓缩 13

一、沉淀法 13

二、吸附法 13

三、超过滤法 13

四、透析法 14

五、减压蒸馏法 14

六、冰冻干燥法 14

第六节　纯化方案的设计与评价 14

一、纯化方案的设计 15

二、纯化方案的评价 16

第七节　有效成分纯度和性质的分析 17

第八节　应用实例 17

一、高纯度人转铁蛋白的制备 17

二、叶绿体的提取与4.5S RNA的制备 17

三、细菌质粒DNA的提取 17

思考题 18

参考文献 18

第二编　纯化方法 21

第二章　沉淀法 21

第一节　基本原理与沉淀类型 21

一、基本原理 21

二、制备蛋白质 21

三、制备核酸 30

第二节　应用实例 33

一、脾磷酸二酯酶的纯化 33

二、细菌染色体DNA的制备 33

三、蔗糖酶的初步纯化 34

思考题 34

参考文献 35

第三章　吸附层析 36

第一节　吸附柱层析 37

一、常用术语 37

二、基本原理 38

三、吸附剂 39

四、洗脱液 42

五、层析柱的制备与层析操作 42

六、应用与实例 44

第二节　薄层层析 46

一、操作及注意事项 47

二、应用实例 52

第三节　聚酰胺薄膜层析 53

一、基本原理 53

二、应用实例 54

思考题 57

参考文献 58

第四章　疏水层析 59

第一节　基本原理 59

一、疏水作用 59

二、吸附剂 60

第二节　操作与应用 60

一、层析柱的制备 60

二、加样与洗脱 61

三、应用实例 61

思考题 63

参考文献 63

第五章　离子交换层析 64

第一节　基本原理 64

第二节　离子交换剂的分类及性质 66

一、分类 66

二、性质 72

第三节　离子交换剂与缓冲液的选择 79

一、离子交换剂的选择 79

二、缓冲液的选择 80

三、加样量的确定 83

第四节　操作 83

一、离子交换剂的处理、再生和转型 83

二、分离物质的交换 84

三、物质的洗脱与收集 85

第五节　应用 87

一、制备、纯化生命物质 87

二、测定蛋白质的等电点 90

思考题 90

参考文献 91

第六章　凝胶过滤 92

第一节　凝胶的分类及性质 92

一、葡聚糖凝胶 93

二、琼脂糖凝胶 95

三、聚丙烯酰胺凝胶 96

四、Sephacryl 97

五、Superdex 98

第二节　基本原理 98

第三节　操作 101

一、凝胶的选择和处理 101

二、凝胶柱的制备 102

三、加样与洗脱 103

四、凝胶柱的再生及保存 107

第四节　应用 107

一、脱盐和浓缩 107

二、分离生命物质 108

三、去除热源物质 109

四、测定分子质量 109

五、其他 112

思考题 112

参考文献 112

第七章　亲和层析 113

第一节　基本原理 113

第二节　操作 115

一、载体的选择 115

二、配体的选择 116

三、亲和吸附剂的制备 117

四、特异性吸附 119

五、分离大分子物质 121

六、亲和层析柱的再生 122

第三节　提高吸附剂的操作容量 122

一、在配体和载体间引入“手臂” 122

二、增加配体取代的程度 124

三、配体与载体衍生物以最少的键连接 124

四、载体多孔性的影响 124

五、其他 125

第四节　应用实例 125

一、纯化大分子物质 125

二、研究酶的结构与功能 128

三、实例 129

思考题 132

参考文献 132

第八章　聚焦层析 133

第一节　基本原理 133

一、多缓冲剂和多缓冲交换剂 133

二、聚焦层析特性 134

第二节　操作 137

一、多缓冲剂的选择 137

二、多缓冲交换剂用量的确定 138

三、多缓冲交换剂的处理 138

四、样品的准备 138

五、加样和洗脱 138

六、样品中多缓冲剂的去除 139

第三节　应用 139

一、分离模型蛋白质 139

二、分离复杂物质 140

三、鉴定某些酶的性质 141

思考题 142

参考文献 142

第九章　高效液相色谱 143

第一节　基本原理 144

一、高效液相色谱仪 144

二、固定相 146

第二节　反相高效液相色谱 149

一、固定相、流动相和色谱柱 150

二、纯化糖基化白蛋白肽片段 152

第三节　应用 154

一、定性和定量分析 154

二、测定酶活性 155

三、测定蛋白质分子质量 155

四、分离核酸和蛋白质 156

思考题 161

参考文献 161

第十章　固定化的酶与微生物 162

第一节　制备方法 162

一、固定化酶 162

二、固定化微生物 166

第二节　制品的性质 166

一、酶的相对活性 166

二、活性曲线与最适pH 167

三、稳定性 168

四、米氏常数 169

五、其他 169

第三节　应用实例 170

一、工业方面 170

二、医学方面 171

三、生化分析方面 171

四、实例 173

思考题 175

参考文献 175

第三编　鉴定方法 179

第十一章　标记 179

第一节　核酸标记 179

一、标记物的制备及类型 179

二、非核素标记 180

三、核素标记 189

四、标记物纯化 190

五、探针的鉴定 191

第二节　蛋白质标记 193

一、非核素标记 194

二、核素标记 198

三、样品分析的注意要点 199

第三节　应用 200

一、cDNA组学和蛋白质组学 201

二、激酶的磷酸化和脱磷酸化 204

三、蛋白质半衰期的测定 206

思考题 207

参考文献 207

第十二章　重组DNA 208

第一节　重组DNA的部件 208

一、工具酶 208

二、载体 211

三、目的基因 213

第二节　重组 218

一、黏性末端连接法 218

二、平端连接法 220

三、平黏连接法 220

四、T-A连接法 221

五、同聚物加尾连接法 221

六、人工接头连接法 221

第三节　DNA扩增 223

一、重组DNA导入宿主细胞 223

二、重组子的筛选与鉴定 225

三、表达产物的纯化 228

第四节　应用实例 228

一、分离总RNA和mRNA 228

二、反转录合成第一链cDNA 228

三、PCR扩增及其产物纯化 229

四、PCR产物的克隆 229

五、重组质粒的提取及分析 229

思考题 230

参考文献 230

第十三章　DNA序列测定 231

第一节　双脱氧链终止法 231

一、基本原理 231

二、载体系统 232

三、测序试剂 236

四、测序操作 238

五、变性电泳 241

六、序列读取 242

第二节　PCR法 243

一、直接测序 243

二、循环测序 244

第三节　化学降解法 245

一、测序原理 245

二、具体操作 246

第四节　应用与进展 249

一、应用实例 249

二、测序进展 250

思考题 251

参考文献 251

第十四章　生物芯片 252

第一节　基因芯片 252

一、基本原理和工作流程 252

二、制备及操作 255

三、应用实例 260

第二节　蛋白质芯片 265

一、原理及特点 265

二、制备与操作 266

三、应用实例 268

第三节　芯片实验室 271

一、结构与制作 271

二、应用实例 274

思考题 280

参考文献 280

第十五章　聚合酶链反应 281

第一节　基本原理 281

一、反应系统 281

二、反应过程及条件 285

第二节　PCR的类型 288

一、普通PCR 288

二、原位PCR 288

三、反转录PCR 289

四、反向PCR 290

五、不对称PCR 290

六、巢式PCR 290

七、彩色PCR 291

第三节　应用 291

一、筛选目的基因 291

二、直接测序 292

三、标记DNA探针 292

四、寻找新基因 292

五、检测环境中的致病菌与指示菌 292

思考题 293

参考文献 293

第十六章　细胞凋亡的检测 294

第一节　基本原理与主要特性 294

一、基本原理 295

二、主要特性 304

第二节　检测凋亡的方法 306

一、形态学 306

二、DNA片段 308

三、酶活性与组蛋白 310

四、流式细胞仪 312

第三节　应用 314

一、抗肿瘤药物的研究和开发 314

二、疾病的诊断和治疗 314

思考题 316

参考文献 316

第十七章　生物传感器 317

第一节　基本原理 317

一、离子选择电极 318

二、生物活性材料 319

第二节　类型与制备 319

一、类型 319

二、制备 320

第三节　应用 321

一、工业方面 321

二、医学方面 321

三、环境监测方面 322

思考题 323

参考文献 323

第十八章　电泳 324

第一节　泳动度概论 325

第二节　聚丙烯酰胺凝胶电泳 327

一、基本原理 327

二、不连续垂直柱状凝胶电泳 333

三、不连续垂直板凝胶电泳 343

四、连续的盘状凝胶和垂直板凝胶的电泳 344

五、线性和阶梯式梯度的柱状及板状凝胶电泳 346

六、双向电泳 347

第三节　琼脂糖凝胶和半干式聚丙烯酰胺凝胶的电泳 349

一、琼脂糖凝胶电泳 350

二、质粒DNA分子质量的测定 352

三、半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳 353

第四节　变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 354

一、SDs-聚丙烯酰胺凝胶电泳 354

二、尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳 356

三、SDS-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳 357

第五节　聚丙烯酰胺凝胶电聚焦 358

一、基本原理 358

二、载体两性电解质的理化性质 359

三、载体两性电解质的pH范围与用量选择 360

四、测定蛋白质的等电点 360

第六节　毛细管电泳 364

一、基本原理与类型 364

二、电泳装置 367

三、应用实例 369

第七节　印迹法（转移电泳） 373

一、基本原理 373

二、操作及注意事项（以蛋白质为例） 374

三、应用 376

思考题 377

参考文献 377

第十九章　免疫分析 378

第一节　抗体的性质、制备及纯化 378

一、抗体的性质 378

二、多克隆抗体的制备 379

三、单克隆抗体的制备 384

四、抗体的检测 388

五、抗体的纯化 391

第二节　抗原抗体反应 393

一、凝集反应 393

二、免疫扩散 396

三、免疫电泳 398

四、固相免疫吸附（含ELISA） 402

五、免疫微球测定 409

思考题 414

参考文献 414

第二十章　气相色谱 415

第一节　基本原理 415

一、常用术语 415

二、塔板与速率理论 417

第二节　气相色谱仪的构造 420

一、载气流速的控制和测量 420

二、进样系统 421

三、恒温室 421

四、色谱柱 421

五、检定器 425

第三节　操作 426

一、操作要点 426

二、条件的选择 427

第四节　定性和定量检测 427

一、定性检测 427

二、定量检测 428

第五节　应用 431

一、分析蛋白质和氨基酸 431

二、分析核酸 432

三、分析糖类物质 432

四、分析脂肪酸 433

五、分析农药 433

思考题 433

参考文献 433

参考文献 434

附录 443

中英文缩写词 456