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第一部分 常用生物化学实验技术及原理 1

第一章 生化实验基本操作 1

一、玻璃仪器的洗涤与清洁 1

二、吸量管的种类和使用 3

三、溶液的混匀 6

四、过滤 6

五、离心机的使用方法 6

六、生物化学常用缓冲液 7

第二章 实验样品的制备 9

一、植物样品的制备 9

二、动物样品的制备 11

三、微生物样品的制备 13

第三章 分光光度法 15

一、基本原理 15

二、分光光度法常用符号及意义 17

三、物质定性分析&l 8

四、物质定量分析 18

五、分光光度计 21

第四章 电泳技术 23

一、基本原理 23

二、纸电泳 24

三、醋酸纤维薄膜电泳 25

四、琼脂凝胶电泳 26

五、聚丙烯酰胺凝胶电泳 26

第五章 层析法 35

一、柱层析法的一般实验技术 35

二、吸附层析 38

三、分配层析 41

四、离子交换层析 45

五、凝胶层析 50

六、亲和层析 55

七、薄层层析 58

第二部分 基础实验 62

实验一 总糖的测定—蒽酮比色法 62

实验二 糖的硅胶G薄层层析 65

实验三 总氮量的测定—凯氏（Micro—KJeldahl）定氮法 67

实验四 蛋白质的两性反应和等电点的测定 72

实验五 蛋白质的沉淀及变性实验 75

实验六 蛋白质的呈色反应 77

实验七 纸层析法分离鉴定氨基酸 81

实验八 考马斯亮兰G—250染色法测定蛋白质含量 83

实验九 Lowry酚试剂法测定蛋白质含量 85

实验十 酪蛋白的制备 87

实验十一 紫外光谱吸收法测定蛋白质含量 89

实验十二 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 93

实验十三 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 95

实验十四 酶的特异性 98

实验十五 影响酶活性的因素 100

实验十六 淀粉酶活性的测定 102

实验十七 枯草杆菌蛋白酶活力测定 105

实验十八 紫外分光光度法测定核酸的含量 108

实验十九 琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA 110

第三部分 生物化学大实验 112

实验二十 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离禽类血清蛋白 112

实验二十一 SDS—聚丙烯酰胺凝胶测定蛋白质相对分子质量 115

实验二十二 离子交换柱层析法分离氨基酸 118

实验二十三 卵清蛋白的分段盐析、透析和凝胶过滤脱盐 121

实验二十四 凝胶过滤法测定蛋白质相对分子质量 125

实验二十五 改良Mohum法测定血清谷—丙转氨酶活性验 127

实验二十六 粗脂肪的提取和定量测定 131

实验二十七 维生素C的定量测定 133

实验二十八 大蒜细胞SOD的提取与分离 135

实验二十九 动物肝脏RNA的制备（苯酚法） 138

实验三十 小牛胸腺DNA的制备（浓盐法） 140

参考实验一 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳—血清蛋白的分离 142

参考实验二 亲和层析纯化胰蛋白酶 146

参考实验三 PAGE法分离过氧化物同工酶 150

参考资料 153

附录 154

一、硫酸铵饱和度计算表 154

二、缓冲溶液的配制 156

三、常见蛋白质相对分子质量参考值 172

四、常见蛋白质等电点参考值 174

实验室规则 177