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绪论 1

上篇　热带植物基因工程原理第1章　基因工程载体和工具酶 15

1.1　基因工程载体 15

1.2　植物基因工程载体 32

1.3　人工染色体载体 42

1.4　工具酶 45

第2章 目的基因的分离与克隆 57

2.1 目的基因 57

2.2 目的基因的分离与克隆 57

第3章　基因重组和基因工程 101

3.1 自然界的基因转移和重组 101

3.2　基因概念的认知 107

3.3　基因组学 108

3.4　基因重组 111

第4章 目的基因的转化 128

4.1　重组DNA分子转入原核生物细胞 128

4.2　重组DNA分子转入植物细胞 131

第5章　重组体的筛选与鉴定 153

5.1　遗传标记表型特征筛选法 153

5.2　重组子结构特征筛选法 156

5.3　核酸分子杂交检测法 167

5.4 目的基因定位检测法 176

5.5　转基因植物的检测与鉴定 179

第6章　外源基因的表达与调控 192

6.1　基因的表达与调控概述 192

6.2　外源基因的瞬时表达和稳定表达 200

6.3　原核生物的基因表达与调控 201

6.4　真核生物的基因表达与调控 206

第7章　植物基因工程研究进展 218

7.1　转基因植物发展现状 218

7.2　转基因植物的应用 225

7.3　转基因植物的安全性评价 230

下篇　热带植物基因工程操作技术第8章 目的基因克隆与功能分析 239

8.1　聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术 239

8.2　RT-PCR技术 240

8.3 mRNA差别显示法 242

8.4　抑制消减杂交法 248

8.5　cDNA微列阵分析技术 255

8.6　RACE技术 259

8.7　T-DNA插入突变技术 263

8.8　酵母双杂交技术 268

8.9　宏基因组文库构建 270

8.10　cDNA代表性差异分析 274

8.11　基因组文库的构建 278

8.12　cDNA文库构建 290

8.13　扣除杂交法 294

8.14　限制酶介导整合技术 296

8.15　实时荧光PCR 298

8.16　图位克隆分离目的基因 300

8.17　转座子标签技术 304

8.18　热不对称性交互PCR（Tail-PCR） 307

8.19　反向PCR（Inverse PCR,iPCR） 311

8.20　染色体步移法 314

8.21 电子克隆（in silico cloning） 318

8.22　基因互补技术 320

8.23　基因敲除技术 321

8.24　RNA干扰技术 325

第9章　热带植物基因组核酸制备 334

9.1　细菌基因组DNA提取 334

9.2　细菌基因组RNA提取 334

9.3　真菌基因组DNA提取 334

9.4　真菌基因组RNA提取 334

9.5　热带植物土壤基因组DNA制备 335

9.6　质粒DNA提取 335

9.7　橡胶树叶片基因组总DNA提取 337

9.8　橡胶树叶片和茎基因组总RNA提取 338

9.9　橡胶树胶乳基因组总RNA提取 339

9.10　橡胶树树皮基因组总RNA提取 339

9.11　香蕉基因组总DNA提取 339

9.12　香蕉基因组总RNA提取 339

9.13　杧果基因组总DNA提取 340

9.14　杧果基因组总RNA提取 341

9.15　荔枝基因组总DNA提取 342

9.16　无核荔枝胚胎总RNA提取 342

9.17　龙眼基因组总DNA提取 344

9.18　龙眼基因组总RNA提取 344

9.19　番木瓜基因组总DNA提取 345

9.20　番木瓜基因组总RNA提取 346

9.21 马槟榔叶片基因组总DNA提取 346

9.22　马槟榔种仁基因组总RNA提取 347

9.23　木薯基因组总DNA提取 348

9.24　木薯基因组总RNA提取 349

9.25　甘蔗基因组总DNA提取 349

9.26　甘蔗基因组总RNA提取 350

9.27　油棕叶片基因组总DNA提取 350

9.28　水稻基因组总DNA提取 351

9.29　水稻基因组总RNA提取 352

第10章　热带植物基因工程受体系统建立 353

10.1　橡胶（Hevea basiliensis Muell.Arg.）组织培养 353

10.2　蓝桉（Eucalyptus globulus Labill.）组织培养 354

10.3　胡椒（Piper nigrum L.）组织培养 355

10.4 咖啡（Coffea spp.）组织培养 356

10.5　香蕉（Musa nana Lour.）组织培养 356

10.6　杧果（Mangifera indica L.）组织培养 357

10.7　荔枝（Litchi chinensis Sonn.）组织培养 358

10.8　龙眼（Dimocarpus longan Lour.）组织培养 359

10.9　椰子（Cocos nucifera L.）组织培养 360

10.10　木薯（Manihot esculenta Crantz）组织培养 361

10.11　甘蔗（Saccharum sirense Roxb.）组织培养 362

10.12　牧草（Grazing breeding）组织培养 363

10.13　笔花豆（Stylosanthes spp.）组织培养 364

10.14　益智（Alpinia oxyphylla Miq.）组织培养 365

10.15　砂仁（Amomum villosum Lour.）组织培养 365

10.16　白豆蔻Amomum kravanh Pierre ex Cagnep.）组织培养 366

10.17　长春花［Catharanhus roseus(L.)G.Don］组织培养 367

10.18　海南粗榧（Cephalotaxus hainanensis Li）组织培养 368

10.19　海南猫须草［Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y.Wu］组织培养 369

10.20　海南龙血树（Dracaena cambodiana Pierre ex Cagnep.）组织培养 370

10.21　蝴蝶兰（Phalaenopsis hybrid.）组织培养 371

10.22　水稻（Oryza sativa L.）组织培养 372

第11章　热带植物基因工程转化技术 373

11.1　Cohen转化法 373

11.2　电转化法 374

11.3　原生质体转化法（CryK13V基因对绿色木霉原生质体的转化） 375

11.4　转染 377

11.5　转导 378

11.6　根癌农杆菌Ti质粒转化系统 379

11.7 发根农杆菌Ri质粒载体基因转化（发根农杆菌介导的茶树遗传转化） 383

11.8　植物病毒载体介导基因转化（植物病毒载体介导的蚕豆遗传转化） 383

11.9　DNA直接导入基因转化 384

11.10　种质系统介导基因转化 389

第12章　重组体的筛选和鉴定 392

12.1　抗药性筛选法 392

12.2　显色模型筛选法 392

12.3　噬菌斑PCR筛选法 395

12.4　DNA限制性酶切图谱法 395

12.5　菌落PCR 396

12.6　菌落（或噬菌斑）原位杂交法 396

12.7　原位PCR 397

12.8　Southern杂交 399

12.9　Northern杂交 401

12.10　Western杂交技术 402

12.11 酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay） 405

12.12　基因组DNA序列测定技术 406

12.13　RAPD技术 419

12.14　RFLP技术 421

12.15　AFLP技术 424

附录 428

附录1　常用的测量单位及换算 428

1．常用的测量单位 428

2．DNA片段的分子质量 428

3．DNA物质的量与质量间的换算 429

4．核酸摩尔浓度溶液的配制 429

附录2　常用的分子质量标准物 429

1．DNA分子质量标准（bp） 429

2．RNA分子质量标准物 430

3．蛋白质分子质量标准 430

附录3　凝胶电泳中凝胶浓度的分离范围 431

1．琼脂糖凝胶浓度有效分离的线状DNA的大小范围 431

2．PAGE凝胶浓度有效分离的蛋白质分子质量范围 431

附录4　常用限制酶的主要性质及缓冲液 431

1．常用限制酶的主要性质 431

2．限制性内切核酸酶作用的3种缓冲液 432

附录5　常用抗生素配制及使用浓度 432

附录6　主要溶液（母液）及缓冲液配制 433

附录7　常用的农杆菌培养基成分（g/L） 435

附录8　植物细胞工程常用的培养基配方（mg/L） 436

附录9　分子生物学常用缩语 442

附录10　热带植物细胞工程常用缩语 444

附录11　百年诺贝尔奖（生理学医学） 447

附录12　部分重要的生物信息学网络资源 452

附录13　热带植物基因工程相关术语解释 453