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第1章　特定基因的克隆 1

附1.1　Bad基因介绍 4

实验1.1 从核酸数据库中获得mBad基因编码序列 4

实验1.2　从细胞中提取总RNA 11

实验1.3 逆转录获得小鼠B16F10细胞的cDNA 15

实验1.4 PCR扩增目的基因mBad 17

附1.2　mBad基因PCR引物的设计 22

实验1.5　PCR产物的琼脂糖凝胶电泳回收 44

实验1.6 SDS碱裂解法提取质粒DNA 49

实验1.7 用质粒DNA小量抽提试剂盒制备质粒DNA 51

附1.3　克隆载体的选择 53

实验1.8　DNA的限制性酶切和酶切产物的回收 55

附1.4　酶切位点的选择 60

实验1.9　连接 62

附1.5　平端DNA的连接反应 64

实验1.10　转化 64

实验1.11 阳性重组子的筛选以及测序验证 69

第2章　克隆基因的表达和表达产物的纯化 73

实验2.1 His-tag EGFP在大肠杆菌中的表达和纯化 77

附2.1　融合蛋白表达载体pHis-EGFP的构建及融合蛋白的亲和纯化结果 81

实验2.2　GST-EBFP融合蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 83

附2.2　GST-EBFP的纯化结果 88

实验2.3 GST-EBFP在巴氏毕赤酵母中的表达 89

附2.3　pPICZ C-GST-EBFP重组质粒的构建、鉴定 94

实验2.4 GST-EGFP在昆虫细胞中的表达纯化 95

附2.4　重组AcNPV-EGFP病毒的构建与筛选 98

第3章　特定基因的功能研究 101

实验3.1 用重叠延伸PCR法进行EGFP基因的定点突变 102

附3.1　重叠延伸PCR法基因定点突变的实验结果 109

实验3.2 用单管大引物PCR法进行EGFP基因的快速定点突变 111

附3.2　单管大引物PCR法基因定点突变的实验结果 115

实验3.3　mBad基因在293T细胞中的瞬时表达 116

实验3.4　Western blotting检测瞬时转染基因的表达 118

实验3.5　人DNMT1基因干扰质粒shRNA真核表达载体的构建 126

附3.3　干扰质粒的设计 131

实验3.6　质粒DNA的大量纯化 131

实验3.7 脂质体法转染哺乳动物细胞MCF-7 133

附3.4　质粒转染结果 135

实验3.8 实时荧光定量PCR法检测DNMT1基因mRNA表达水平 135

附3.5 荧光定量PCR实验结果 139

实验3.9 利用荧光显微镜检测细胞骨架蛋白β-actin在A549细胞中的定位 140

附3.6 A549细胞中β-actin的荧光显微镜照片 145

实验3.10 流式细胞仪检测紫杉醇对A549细胞周期的影响 145

附3.7 紫杉醇处理对A549细胞周期的影响 154

实验3.11 流式细胞仪检测脐静脉内皮细胞增殖 155

附3.8 流式细胞仪检测脐静脉内皮细胞的增殖 158

实验3.12 流式细胞仪检测细胞凋亡 158

附3.9 流式细胞仪检测Jurkat淋巴瘤细胞的凋亡 162

第4章 蛋白质与蛋白质的相互作用 165

实验4.1 酵母双杂交体系发现FADD与Fas的相互作用 166

实验4.2 二维电泳比较FADD和FADD-/-细胞株的蛋白质表达差异 172

附4.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶的经验配方 181

附4.2 2DE常见问题与解决办法 183

实验4.3 GST pull-down验证FADD与Fas的相互作用 184

附4.3　GST pull-down验证FADD与Fas相互作用的结果示意图 188

实验4.4 免疫共沉淀分析FADD与Fas相互作用的结构域 188

附4.4　Fas与FADD不同结构域相互作用的Co-IP结果示意图 192

实验4.5 荧光共振能量转移技术（FRET）分析FADD与Fas相互作用 192

实验4.6　利用噬菌体肽库展示技术筛选与链霉亲和素特异性结合的氨基酸序列 199

第5章　DNA与蛋白质的相互作用 205

实验5.1 EMSA分析转录因子NF-кB与DNA结合序列的结合 206

实验5.2 染色质免疫沉淀（ChIP）分析NF-кB与TRAF1基因启动子序列的结合 212

实验5.3　报告基因检测技术分析不同细胞中PSMA基因的启动子活性 215

附录Ⅰ 网络资源 220

附录Ⅱ 常用仪器及供应商 223

附录Ⅲ 著名生物试剂公司及其特色产品 226

附录Ⅳ　常用溶液配制 229

附录Ⅴ 常用工具酶 237

附录Ⅵ 实验室常用技术参数资料 242