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1概述 1

1.1基本概念 1

目 录 1

1.2 PNA的化学 2

1.3 PNA的物理化学性质 3

1.4 PNA作为分子生物学工具 6

1.4.1增强的PCR扩增 6

1.4.2 PNA的预凝胶杂交 7

1.4.5测定端粒的大小 8

1.4.3 PNA辅助的稀有切割 8

1.4.4人工限制性酶系统 8

1.4.6核酸的纯化 9

1.5 PNA作为诊断的工具 9

1.6 PNA在基因靶向药物研究中的应用 10

1.6.1 反义应用 10

1.6.2抗基因性质 10

1.6.3 PNA的细胞内导入 11

1.6.6 抗病毒PNA 12

1.6.5 PNA在癌症基因治疗中的应用 12

1.6.4抗微生物PNA 12

1.7研制PNA的公司及其产品 13

参考文献 13

2 PNA的化学 22

2.1 用BOC化学合成PNA寡聚物 22

2.1.1 PNA合成 23

2.1.2合成方案 28

2.1.3讨论 35

参考文献 37

2.2 用FMOC化学合成PNA寡聚物 39

2.2.1 PNA合成 41

2.2.2小结 50

参考文献 51

2.3 PNA/DNA嵌合体 51

2.3.1合成策略和单体PNA构成单元 53

2.3.2 Mmt／乙酰基保护的单体构成单元的合成循环 54

2.3.3 PNA和DNA之间连接剂的选择 58

2.3.4实验方案 59

2.3.5举例 61

2.3.6讨论 66

参考文献 69

2.4用MMT化学合成PNA-DNA嵌合体 71

2.4.1讨论 73

2.4.2材料 75

2.4.3方法 76

2.4.4结论 79

参考文献 80

2.5 PNA的标记 81

2.5.1实验方案 82

2.5.2举例 83

2.5.3小结 86

参考文献 87

2.6手性PNA的合成 89

2.6.1手性肽核酸单体的合成 89

2.6.2 以N－氨乙基－D－脯氨酸为骨架的手性肽核酸的合成 90

2.6.3 用Fmoc工艺合成手性PNA（l-或d-Ala）单体及寡聚物 91

参考文献 99

3 PNA的杂交性质和分析、检测 100

3.1 PNA-NA作用的热力学 100

3.1.1样品制备的概况 101

3.1.2吸收熔解曲线 102

3.1.3等温滴定量热法 106

3.1.4结论 108

参考文献 109

3.2 PNA的性质 110

3.2.1杂交亲和性 110

3.3 PNA－双链DNA链顶替复合物及其鉴定技术 111

3.3.1链顶替复合物的形成 111

3.2.3特异性识别能力 111

3.2.2杂交条件 111

3.3.2 PNA－双链DNA链顶替复合物的鉴定技术 113

3.3.3结语和前瞻 127

参考文献 127

3.4 PNA与DNA修饰酶的相互作用 129

3.4.1 PNA对端粒酶活性的抑制 129

3.4.2 PNA检测解旋酶活性 134

参考文献 139

3.5基质辅助解吸飞行时间质谱检测PNA杂交物用于基因分析 140

3.5.1实验方案 142

3.5.2实验结果 145

3.5.3讨论 147

参考文献 151

4 PNA在分子生物学研究中的应用 154

4.1 PNA导向的基因组DNA特异切割 154

4.1.1操作程序 156

4.1.2实例 157

4.1.3讨论 159

参考文献 162

4.2双链DNA的捕获 165

4.2.1操作规程 166

4.2.2实例 168

4.2.3讨论 169

参考文献 172

4.3 PNA亲和标记探针杂交、纯化核酸 174

4.3.1 操作规程 176

4.3.2实例 178

4.3.3应用和局限性 179

参考文献 180

4.4运用PNA进行质粒的标记 182

4.4.1操作规程 183

4.4.2实例结果 187

4.4.3讨论 190

参考文献 191

4.5 PNA封闭探针——增强探针分析的特异性 191

4.5.1材料和方法 192

4.5.2结果与讨论 196

参考文献 203

4.5.3结论 203

4.6 PCR锁止技术（PCR Clamping） 204

4.6.1 PCR锁止技术简介 204

4.6.2操作规程 206

4.6.3实例 207

4.6.4展望 211

参考文献 211

4.7 PNA预凝胶杂交 212

参考文献 214

5肽核酸在药物开发中的潜在应用 215

5.1.1 PNA的细胞内导入 216

5.1 药物开发中的PNA技术 216

5.1.2 PNA的反义作用 218

5.1.3 PNA的抗基因作用 219

5.1.4 PNA作为调节基因表达的工具 223

参考文献 224

5.2 PNA作为抗菌剂 227

参考文献 232

5.3 PNA在癌症基因治疗中的应用 232

参考文献 234

5.4 PNA作为抗病毒药物 235

参考文献 236

5.5 PNA药物的前景 236

参考文献 238

6 PNA在诊断领域的应用 239

6.1 PNA技术 239

6.1.1 PNA探针 239

6.1.2 自身报告的PNA探针和Q-PNA PCR 240

6.1.3 PNA探针的设计 243

参考文献 245

6.2.1 PNA探针在组织化学的原位杂交中的应用 247

6.2 PNA探针的应用 247

6.2.2 PNA荧光原位杂交（FISH）在细胞遗传学分析中的应用 252

6.2.3 PNA探针在微生物分析中的应用 254

参考文献 262

6.3 PNA在流式细胞仪中应用 265

参考文献 267

6.4 PNA探针应用前景展望 267

参考文献 268

7 PNA在生物芯片和生物传感器中的应用 270

7.1.1实验方案 271

7.1 PNA阵列用于核酸检测 271

7.1.2结果 277

7.1.3讨论 279

参考文献 280

7.2 PNA生物传感器用于核酸检测 281

7.2.1实验方案 282

7.2.2举例 284

7.2.3讨论和展望 288

参考文献 290

附录 291