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第1章 流式细胞术的发展简史 1

第2章 仪器原理 7

2.1．概述 7

2.2．流式细胞计的工作原理 8

2.3．散射光的测量 10

2.3.1．前向角散射 11

2.3.2．侧向散射 13

2.4荧光测量 16

2.4.1．光源 17

2.4.2．滤片 19

2.4.3．检测器——光电倍增管和硅光电二极管 20

2.4.4．光谱重叠的校正 23

2.4.5．自发荧光 23

2.4.6．荧光的线性测量和对数测量 24

2.4.7．细胞群体的DNA直方图和变异系数 25

2.5．液流系统 29

2.5.1．稳流和雷诺数 30

2.5.2．喷嘴 31

2.5.3．流动室 33

2.5.4．Coulter效应 35

2.6.1．小水滴的形成 36

2.6细胞分选器 36

2.6.2．水滴的充电与偏转 38

2.6.3．决定逻辑 39

2.7．缝扫描 39

2.8．流式细胞计的技术指标 41

2.9．标准样品 44

2.9.1．标准样品的性质 46

2.9.2．非生物学标准样品荧光微球 46

2.9.3．生物学标准样品 47

3.1．DNA、RNA含量 52

第3章 细胞的参量和荧光探针 52

3.1.1．PI和EB 54

3.1.2．MI和CA？和Olivomycin 56

3.1.3．HO33342、HO33258和DAPI 56

3.1.4．7-AAD 58

3.1.5．AO和PY 58

3.2．DNA碱基组成 61

3.3．染色质结构 62

3.4．总蛋白含量 63

3.5．抗体和其他分子的共价标记 64

3.6．细胞的活性 69

3.7．DNA合成 70

3.8．细胞膜电位 70

3.9．细胞内pH 75

3.10．细胞内的钙 78

3.11．细胞膜的流动性或微粘度 84

3.12．流式细胞术荧光探针的发展前景 85

第4章 流式细胞术的样品制备 88

4.1．单层培养细胞分散为单个细胞 88

4.2．实体组织分散为单个细胞 89

4.2.1．实体组织分散为单个细胞的原则 89

4.2.2．实体组织分散为单个细胞的方法 91

4.2.3．实体组织分散为单个细胞的实例 95

4.3．流式细胞术进行DNA分析时样品的长期保存方法 97

4.4．实体瘤细胞脱核制备 98

4.4.1．一步快速核分离和染色程序 98

4.4.2．多步核分离和染色程序 100

4.5．石蜡包埋组织的流式细胞样品制备 102

4.5.1．石蜡包埋组织的流式细胞样品制备 103

4.5.2．从石蜡包埋组织分离细胞核的另一个方法 103

4.5.3．石蜡包埋组织脱核的参考标准——切片厚度和荧光染色 104

4.6．染色体悬浮液的制备 105

4.5.4．对石蜡包埋组织脱核的分析 105

第5章 数据的获取与分析 108

5.1．数据的显示 109

5.1.1．单参数直方图 109

5.1.2．二维点图 110

5.1.3．二维等高图 111

5.1.4．假三维图 112

5.1.5．多维数据的显示 113

5.2．数据分析 115

5.2.1．非参数分析 115

5.2.2．DNA直方图的比较分析 116

5.3．DNA直方图的定量分析 118

5.3.1．矩形作图法 119

5.3.2．峰反射作图法 120

5.3.3．作图法的误差 121

5.4．DNA直方图的参数分析 123

5.4.1．二阶多项式拟合法 124

5.4.2．多正态拟合法 127

5.4.3DNA直方图参数拟合分析的误差 129

5.5．细胞周期各时相的时间 130

5.6．双参数图分析 131

5.7．多参数数据分析 133

第6章 流式细胞术在细胞生物学中的应用 140

6.1．细胞群体的各周期时相百分比 140

6.2．DNA合成速率 142

6.3．细胞周期参数的测定 145

6.4．用溴脱氧脲嘧啶核苷单克隆抗体研究细胞周期 147

6.5．用多参数流式细胞术研究细胞周期 151

6.5.1．多参数流式细胞术 151

6.5.2．DNA含量及细胞大小 152

6.5.3．DNA含量和RNA含量双参数相关测量 154

6.5.4．由双参数图分析细胞周期各亚时相 156

6.6．药物对细胞周期的影响 159

6.7．流式细胞核型分析 162

6.8．在分子遗传学领域中的应用 165

6.9．精子和雄性生殖细胞的研究 166

6.9.1．DNA含量的高分辨率测量及分选 167

6.9.2．用于精细胞的研究 168

6.10．在微生物学中的应用 171

6.10.1．仪器、方法与技术关键 171

6.10.2．细菌的细胞周期 173

6.10.3．病毒与细胞的相互作用 174

6.11．测量细胞突变作用 175

6.11.1．对致突作用的测定 175

6.11.2．对体外细胞突变的测定 175

6.11.3．基因扩增 176

6.11.4．致丝裂性的测定 176

6.11.5．次黄嘌呤鸟嘌呤核糖基转移酶（HGPRT） 176

6.11.7．血型蛋白A变异株 177

6.12．流式细胞术在植物细胞中的应用 177

6.11.6．血色蛋白变异株 177

6.13．细胞内游离钙的流式测定 185

第7章 流式细胞术在免疫学中的应用 187

7.1．流式细胞术应用于免疫研究中的技术问题 187

7.1.1．流式细胞术在免疫研究中的多功能特点 187

7.1.2．荧光滤片 189

7.1.3．免疫技术用荧光染料 190

7.1.4．阳性细胞群体标准及荧光强度的判定 193

7.1.5．免疫荧光标本的制备 195

7.1.6．免疫荧光标本的特殊处理技术 196

7.2．流式细胞术在免疫生物学和免疫技术研究上的应用 199

7.2.1．细胞表面标记及抗原决定簇性质的研究 199

7.1.7．设备消毒 199

7.2.2．细胞抗原表达的研究 201

7.2.3．免疫和肿瘤细胞测定及分选中的应用 203

7.2.4．克隆细胞及杂交瘤的选择和鉴定 204

7.3．FCM在免疫功能测定中的应用 205

7.3.1．细胞介导细胞毒试验 205

7.3.2．吞噬功能实验 206

7.3.3．循环免疫复合物的测定 207

7.3.4．其他免疫指标的检查 207

8.1.1．酶学方法 210

第8章 流式细胞术在肿瘤学中的应用 210

8.1．实体肿瘤组织单细胞悬液样品制备方法 210

8.1.2．化学方法 212

8.1.3．机械性方法 213

8.2．实体肿瘤组织单细胞核（裸核）悬液样品的制备 214

8.3．石蜡包埋肿瘤组织单细胞样品制备 215

8.3.1．石蜡包埋组织单细胞分散的方法和步骤 216

8.3.2．石蜡包埋组织单细胞样品制备方法存在的问题 218

8.4．流式细胞术在肿瘤学中的应用 220

8.4.1．流式细胞术在检测癌前病变和协助肿瘤早期诊断中的应用 220

8.4.2．流式细胞术在肿瘤细胞学诊断中的应用 223

8.4.3．流式肿瘤DNA异倍体 225

8.4.4．流式DNA异倍体对交界性肿瘤诊断的意义 226

8.4.5．流式DNA倍体分析在恶性肿瘤预后估价中的作用 226

8.4.6．流式细胞术评价肿瘤化疗疗效的作用 228

第9章 流式细胞术在血液学中的应用 232

9.1．DNA倍体分析 232

9.2．细胞增殖周期分析 234

9.2.1．细胞周期分析的方法 234

9.2.2．细胞周期分析的意义 235

9.3．血细胞免疫学研究 239

9.3.1．正常血细胞分化成熟的研究 240

9.3.2．在急性白血病免疫分型中的应用 246

9.4．残存白血病的研究 248

9.5．血小板病的研究 251

9.6．FCM在分子生物学研究中的应用 252

9.7．几种染色方法 254

9.7.1．蛋白质-DNA染色法 254

9.7.2．吖啶橙（AO）染色法 255

9.7.3．免疫抗体标记与DNA双染色法 255

9.7.4．DNA与ras基因蛋白检测法 255

9.7.5．PCNA与DNA双染色法 256