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实验篇 3

实验一 酵母细胞的观察 3

实验二 营养缺陷型、温度敏感型和紫外敏感型突变株的分离和鉴别 8

实验三 减数分裂作图 15

实验四 有丝分裂重组和随机孢子分析 23

实验五 酵母转化 31

实验六 胞导和核配 39

实验七 基因置换 45

实验八 ras2抑制基因的分离 54

实验九 细胞型操作 58

实验十 用插入穿梭诱变法分离端粒沉默抑制基因 67

实验十一 双杂合蛋白互作分析法 74

技术和方案篇 81

技术和方案1 酵母的高效转化 81

技术和方案2 酵母菌落直接质粒转化法 83

技术和方案3 酵母DNA分离 84

技术和方案4 酵母蛋白质的抽提 89

技术和方案5 酵母RNA的分离 90

技术和方案6 质粒DNA的羟胺突变 93

技术和方案7 酵母β-半乳糖苷酶的测定 94

技术和方案8 羧肽酶Y的平板鉴定 97

技术和方案9 随机孢子分析 98

技术和方案10 酵母活体染色 99

技术和方案11 酵母免疫荧光 100

技术和方案12 固定化细胞的肌动蛋白染色 102

技术和方案13 PCR介导基因破坏法 103

技术和方案14 酵母菌落PCR方法 105

附录 109

附录A 培养基 109

附录B 菌株保存 119

附录C 酵母遗传图谱和物理图谱 120

附录D 模格 127

附录E 用于Southern印迹作图的菌株电泳核型 128

附录F 菌株 130

附录G 用标准血球计数板进行酵母计数 132