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目录 3

上篇　基因克隆理论 3

第一章　概论 3

第一节　基因研究历史回顾 3

第二节　遗传的物质基础 3

第三节　基因和基因克隆的概念 5

第四节　基因工程的研究内容和安全性 6

第一节　核酸的结构和功能 10

第二章　基因的结构和功能 10

第二节　遗传物质的组织结构 15

第三节　基因组的结构和功能 23

第三章　蛋白质的结构和功能 35

第一节　蛋白质的基本单位和分类 35

第二节　蛋白质的分子结构和理化性质 39

第三节　蛋白质的生物学功能 49

第四章　基因克隆中常用的工具酶 52

第一节 限制性核酸内切酶 52

第二节　DNA聚合酶 56

第三节　DNA连接酶 60

第四节　修饰酶 61

第五章　基因克隆的载体 65

第一节　质粒载体 65

第二节　噬菌体载体 79

第三节　病毒载体 84

第四节　大容量载体 91

第六章　基因的表达和调控 95

第一节　原核生物基因的表达调控 96

第二节　真核生物基因的表达调控 112

第七章　基因克隆在治疗和诊断中的应用与进展 127

第一节　基因治疗研究进展 127

第二节　基因诊断的研究进展 130

第八章　基因克隆技术在生物制药中的应用 136

第一节　概况 136

第二节　基因工程药物 137

第三节　基因工程抗体 137

第四节　基因工程疫苗 138

第五节　核酸疫苗 139

第六节　生物医药的发展方向 139

下篇　基因克隆技术 143

第九章　分子生物实验中的常用仪器及试剂的配制 143

第一节 分子生物实验室的常规仪器及设备 143

第二节　常用试剂的配制 145

第十章　琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳 149

第一节　原理 149

第二节　琼脂糖电泳 149

第三节　聚丙烯酰胺凝胶电泳 150

第四节 电泳的影响因素 151

第五节 电泳中常用的指示剂和染色剂 152

第十一章 目的基因克隆 154

第一节 化学合成法获取目的基因 154

第二节　PCR扩增法获取目的基因 154

第三节 RT-PCR法获取目的基因 159

第一节　感受态细胞的制备和质粒的转化 162

第十二章　载体的准备 162

第二节　质粒DNA的提取 163

第十三章 目的基因与载体的连接 165

第一节 目的基因和载体的酶切 165

第二节　从凝胶中回收DNA 168

第三节 目的基因和载体的连接 169

第十四章　重组载体的检测 172

第一节　酶切和电泳检测 172

第二节 DNA序列测序鉴定 172

第二节　脂质体法 178

第十五章　重组载体的转染 178

第一节　磷酸钙共沉淀法 178

第三节　反转录病毒感染法 179

第四节　腺病毒载体转染法 180

第五节　结果和转染方法的选择 181

第十六章　重组体插入基因、RNA和表达产物蛋白质的检测 183

第一节　Southern blot 183

第二节　Northern blot 186

第三节　Western blot 188