基因工程原理与技术 第3版pdf电子书版本下载

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第一章 概论 1

一、基因工程的概念与基本步骤 2

二、基因工程技术的发展历程 4

三、基因工程的研究内容 8

第二章 基因与基因表达调控 11

第一节 基因的结构与功能 11

一、基因的分子基础 11

二、结构基因的基本结构 12

三、原核生物基因结构与调控模式 13

四、真核生物基因结构与调控模式 14

五、特殊结构与功能的基因 16

第二节 基因组的结构与功能 18

一、病毒基因组的结构与功能特点 19

二、原核生物基因组的结构与功能特点 20

三、真核生物基因组结构与功能的特点 20

四、线粒体基因组 21

五、人类基因组 22

第三节 基因的表达与调控 23

一、基因表达调控的基本原理 24

二、原核生物的基因表达调控 26

三、真核生物的基因表达调控 31

本章小结 36

思考题 37

第三章 核酸分子的分离提取与酶切连接 38

第一节 核酸的分离纯化 38

一、核酸分离提取的原则与要求 38

二、核酸提取的主要步骤 39

三、质粒DNA的分离纯化 40

四、基因组DNA的制备 42

五、RNA的提取 42

六、核酸的定量 43

七、核酸的凝胶电泳 44

第二节 DNA分子的酶切 47

一、限制性核酸内切酶 47

二、限制性内切酶切割DNA的方法 50

三、影响限制性内切酶活性的因素 53

四、DNA酶切的应用 54

第三节 DNA分子的连接 55

一、连接酶 55

二、DNA片段之间的连接 56

三、平末端DNA片段的连接 57

四、影响连接反应的因素 58

第四节 DNA分子的修饰 59

一、末端转移酶对DNA的修饰作用 59

二、T4多聚核苷酸激酶对DNA的修饰作用 60

三、碱性磷酸酶对DNA的修饰作用 61

本章小结 61

思考题 62

第四章 基因工程载体 63

第一节 质粒载体 63

一、质粒的一般生物学特性 63

二、理想质粒载体的必备条件 65

三、常用的质粒载体 65

第二节 噬菌体载体 69

一、噬菌体载体的生物学特性 69

二、λ噬菌体载体 70

第三节 酵母载体 75

一、整合型载体（YIp） 76

二、复制型载体（YRp） 77

三、附加体型载体（YEp） 77

第四节 Ti质粒表达载体 78

一、Ti质粒的结构 78

二、Ti质粒的改造 79

三、Ti质粒表达载体 80

第五节 病毒表达载体 81

一、昆虫细胞的杆状病毒表达载体 81

二、SV40病毒表达载体 82

三、反转录病毒载体 84

四、腺病毒克隆载体 88

第六节 人工染色体载体 91

一、酵母人工染色体（YAC）载体 92

二、细菌人工染色体（BAC）载体 94

三、P1人工染色体载体 96

本章小结 97

思考题 97

第五章 目的基因克隆 99

第一节 PCR扩增法获得目的基因 99

一、RT-PCR法 99

二、其他PCR法 101

第二节 基因的合成 107

一、DNA合成的原理 108

二、人工合成基因 109

第三节 基因组DNA的克隆 110

一、基因组文库的构建和检测 111

二、大片段文库在环境基因组中的应用 114

第四节 cDNA文库构建及筛选 115

一、RNA提取与质量鉴定 116

二、cDNA文库构建 117

三、cDNA文库的质量评价 120

第五节 差异克隆技术 120

一、mRNA差异显示技术（DDRT-PCR） 120

二、抑制性差减杂交技术 122

第六节 DNA诱变 124

一、定点突变 124

二、随机突变 127

第七节 转化、筛选与鉴定 128

一、重组DNA导入受体细胞 129

二、重组子的筛选与鉴定 133

三、DNA序列测定 135

本章小结 138

思考题 139

第六章 原核细胞基因工程 140

第一节 原核表达系统的种类 140

一、大肠杆菌表达系统 141

二、芽孢杆菌表达系统 142

三、链霉菌表达系统 142

四、蓝藻表达系统 143

第二节 原核细胞表达策略 143

一、融合型表达 144

二、非融合型表达 144

三、分泌型表达 145

四、多拷贝表达 145

五、整合型表达 146

六、提高表达效率的方法 147

第三节 基因工程菌的大规模培养 152

一、基因工程菌发酵的特点 152

二、基因工程菌的深层培养方式 153

三、相关发酵的反应器 155

第四节 原核细胞表达产物的分离纯化 156

一、分离纯化的目标与策略 156

二、分离纯化的一般过程 158

三、包涵体的溶解和重组蛋白的复性 160

四、分泌蛋白质的浓缩 162

第五节 基因工程菌不稳定性及对策 163

一、基因工程菌不稳定性产生的原因 163

二、改善基因工程菌不稳定性的方法 164

第六节 原核细胞表达应用举例 166

本章小结 167

思考题 168

第七章 酵母基因工程 169

第一节 酵母基因工程表达体系 169

一、酵母基因表达宿主系统 169

二、酵母表达载体 171

三、转化方法 175

第二节 常见酵母基因表达系统 175

一、酿酒酵母表达系统 175

二、毕赤酵母表达系统 178

三、解脂耶氏酵母表达系统 180

四、粟酒裂殖酵母表达系统 181

五、乳酸克鲁维亚酵母表达系统 183

第三节 影响外源基因表达的因素 184

一、转录水平控制 184

二、表达载体的拷贝数和稳定性 185

三、翻译水平控制 185

四、其他因素 186

五、酵母表达系统的新的应用方向 186

第四节 酵母基因工程应用举例 187

一、利用重组酵母生产乙肝疫苗 187

二、利用重组酵母生产人血清白蛋白 188

本章小结 189

思考题 190

第八章 动物基因工程 191

第一节 动物细胞基因工程 191

一、动物细胞表达体系 191

二、动物细胞表达载体的构建 196

三、动物细胞转化方法与筛选 198

第二节 转基因动物 202

一、转基因动物概念 202

二、哺乳动物的转基因操作 203

三、外源基因的整合与表达 207

第三节 动物转基因技术的应用前景 210

一、基因功能的研究 210

二、在农业上的应用 211

三、在医学上的应用 212

本章小结 213

思考题 214

第九章 植物基因工程 215

第一节 植物基因工程载体 215

一、植物基因工程载体的种类和特性 215

二、植物基因工程载体的构建 216

第二节 植物基因工程遗传转化的受体系统 221

一、植物基因转化受体的条件 221

二、转化受体系统的类型及其特性 222

第三节 植物遗传转化的方法 225

一、农杆菌介导法 225

二、基因枪转化法 227

三、花粉管通道转化法 228

四、电激转化法 228

五、化学物质诱导转化法 229

六、显微注射转化法 229

七、激光微束穿孔转化法 230

八、脂质体介导转化法 230

九、超声波法 230

十、碳化硅纤维介导转化法 230

第四节 转基因植物筛选与鉴定 230

一、生物学特性鉴定 231

二、分子生物学检测 231

三、基因芯片检测技术 234

第五节 高等植物基因的诱导表达系统 235

一、外源基因的四环素诱导系统 235

二、外源基因的乙醇诱导系统 237

三、外源基因的类固醇诱导系统 237

四、外源基因的地塞米松诱导和四环素抑制系统 238

第六节 植物基因工程的应用 239

一、基因工程生产转基因黄金水稻 239

二、抗虫害的转基因植物 240

三、抗除草剂植物的育种 240

本章小结 241

思考题 242

第十章 基因工程相关新技术 243

第一节 核酸分子杂交技术 243

一、核酸杂交的原理 243

二、核酸探针的制备 243

三、核酸杂交种类与方法 249

第二节 芯片技术 256

一、基因芯片的基本原理 256

二、基因芯片的种类 256

三、基因芯片制作技术的基本步骤 257

四、基因芯片技术的应用 259

第三节 蛋白质组学与酵母双杂交 259

一、蛋白质组学 259

二、酵母双杂交技术 261

第四节 基因敲除技术 264

一、Cre-LoxP基因敲除系统 265

二、基因敲除技术的应用 267

第五节 生物信息学 267

一、生物信息学概述 268

二、生物信息的检索及策略 269

三、生物大分子序列的比对分析 270

四、核酸序列分析 271

五、蛋白质结构分析 273

本章小结 277

思考题 277

第十一章 重组DNA技术的应用 279

第一节 DNA与疾病诊断 279

一、基因诊断的含义 279

二、基因诊断的原理及特点 280

三、基因诊断的方法 280

四、基因诊断的应用 283

五、问题及展望 285

第二节 疾病的基因治疗 285

一、基因治疗的概念及内容 286

二、基因治疗的分子机制 287

三、载体系统 287

四、基因治疗的策略与方法 287

五、疾病的基因治疗 288

六、问题及展望 290

第三节 传染病的防治 291

一、新发和再发传染病的特征 291

二、传染病防治的新策略及研究内容 292

三、基因工程疫苗 292

四、基因工程抗体 295

五、DNA重组技术在传染病防治方面的前景展望 296

本章小结 296

思考题 296

第十二章 基因工程产品的安全管理与专利保护 298

一、基因工程实验室生物安全管理 298

二、基因工程操作对象和转基因产品可能带来的危害 301

三、基因工程产品的安全管理现状 304

四、基因工程产品的专利及保护问题 306

本章小结 308

思考题 308

参考文献 309