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第一部分 基础实验 3

第一周 环境微生物的检测和菌落识别 3

实验Ⅰ-1-1环境中微生物的检测 3

实验Ⅰ-1-2斜面接种与培养 8

实验Ⅰ-1-3点接种与培养 13

实验Ⅰ-1-4穿刺接种法和细菌运动力的观察 16

实验Ⅰ-1-5四大类微生物菌落形态的识别 18

第二周 细菌染色法和光学显微镜的使用 23

实验Ⅰ-2-1普通光学显微镜的使用 23

实验Ⅰ-2-2细菌的涂片及简单染色法 28

实验Ⅰ-2-3革兰氏染色法（经典法） 30

实验Ⅰ-2-4革兰氏染色法（三步法） 32

实验Ⅰ-2-5显微测微尺的使用 34

第三周 细菌的芽孢、荚膜和鞭毛染色法 37

实验Ⅰ-3-1芽孢染色法 37

实验Ⅰ-3-2荚膜染色法 39

实验Ⅰ-3-3鞭毛染色法 41

实验Ⅰ-3-4相差显微镜的使用 45

实验Ⅰ-3-5暗视野显微镜的使用 48

第四周 放线菌和真菌的培养与形态观察 50

实验Ⅰ-4-1放线菌的插片、搭片培养和形态观察 50

实验Ⅰ-4-2真菌的载片培养和形态观察 52

实验Ⅰ-4-3根霉孢子囊和假根的观察 55

实验Ⅰ-4-4蓝色犁头霉接合孢子囊的形成和观察 58

实验Ⅰ-4-5霉菌子囊壳、子囊和子囊孢子的观察 60

第五周 培养基的配制、分装和灭菌 63

实验Ⅰ-5-1通用培养基的配制 63

实验Ⅰ-5-2鉴别性培养基的配制 70

实验Ⅰ-5-3选择性培养基的配制 73

实验Ⅰ-5-4加压蒸汽灭菌法 76

实验Ⅰ-5-5培养皿的干热灭菌法 79

实验Ⅰ-5-6过滤除菌技术 81

第六周 微生物生长量的测定和生长曲线的绘制 84

实验Ⅰ-6-1细菌的液体接种法和培养特征的观察 84

实验Ⅰ-6-2细菌生长曲线的测定 88

第七周 微生物的显微镜直接计数法 91

实验Ⅰ-7-1酵母菌和霉菌孢子的直接计数法 91

实验Ⅰ-7-2细菌细胞的直接计数法 95

第八周 微生物的间接计数法 99

实验Ⅰ-8-1平板菌落计数法 99

实验Ⅰ-8-2乳酸菌和双歧杆菌的简便快速计数法 103

实验Ⅰ-8-3用MPN法测定活性污泥中的硝化细菌数 106

第九周 微生物的纯种分离法 110

实验Ⅰ-9-1用平板划线法分离菌种 110

实验Ⅰ-9-2用浇注平板法和涂布平板法分离菌种 113

实验Ⅰ-9-3真菌的单孢子分离法 115

实验Ⅰ-9-4真菌的菌丝尖端切割分离法 118

第十周 检测噬菌体的基本实验技术 121

实验Ⅰ-10-1大肠埃希氏菌噬菌体的分离和纯化 121

实验Ⅰ-10-2噬菌体效价的测定 124

实验Ⅰ-10-3溶原性细菌的检测和鉴定 128

第十一周 微生物的遗传变异实验 132

实验Ⅰ-11-1紫外线对枯草芽孢杆菌产生淀粉酶的诱变效应 132

实验Ⅰ-11-2用梯度平板法筛选大肠埃希氏菌抗药性突变株 134

实验Ⅰ-11-3大肠埃希氏菌营养缺陷型突变株的筛选 137

实验Ⅰ-11-4 Ames试验法 142

实验Ⅰ-11-5细菌的原生质体融合 145

第十二周 物理、化学因素对微生物生长的影响 150

实验Ⅰ-12-1温度、pH和渗透压对微生物生长的影响 150

实验Ⅰ-12-2消毒剂和杀菌剂最低抑制浓度（MⅠC）的测定 154

实验Ⅰ-12-3用杯碟法测定抗生素的效价 157

第十三周 菌种的保藏原理与方法 162

实验Ⅰ-13-1常用的简易保藏法 162

实验Ⅰ-13-2甘油保藏法 164

实验Ⅰ-13-3干燥保藏法 167

实验Ⅰ-13-4冷冻真空干燥保藏法 170

实验Ⅰ-13-5液氮超低温保藏法 173

第十四周 细菌鉴定中的常规和微量快速生理生化反应 177

实验Ⅰ-14-1若干常规生理生化反应 177

实验Ⅰ-14-2应用APⅠ-20E细菌鉴定系统鉴定肠杆菌科和部分其他革兰氏阴性杆菌 182

第十五周 微生物分子生物学基础实验 188

实验Ⅰ-15-1细菌总DNA的小量制备 188

实验Ⅰ-15-2利用PCR技术制备基因片段 189

实验Ⅰ-15-3蓝白斑筛选技术在基因克隆中的应用 191

实验Ⅰ-15-4氯化钙法制备大肠埃希氏菌感受态细胞和质粒DNA的转化 193

实验Ⅰ-15-5重组质粒DNA的小量制备和电泳验证 194

第十六周 血清学反应实验技术 197

实验Ⅰ-16-1免疫血清的制备 197

实验Ⅰ-16-2凝集反应 203

实验Ⅰ-16-3环状沉淀试验 206

实验Ⅰ-16-4用鲎试剂法测定细菌内毒素 209

实验Ⅰ-16-5双向琼脂扩散沉淀反应 211

第二部分 任选实验 217

1.菌种分离、纯化和筛选技术 217

实验Ⅱ-1-1利用选择性培养基分离固氮菌、酵母菌和土壤真菌 217

实验Ⅱ-1-2酸奶的制作和其中乳酸菌的分离 219

实验Ⅱ-1-3甜酒酿的制作及酒药中根霉的分离 223

实验Ⅱ-1-4杀虫细菌——苏云金芽孢杆菌的分离 225

实验Ⅱ-1-5杀虫真菌——白僵菌的分离 227

实验Ⅱ-1-6酚降解细菌的分离、纯化和筛选 230

实验Ⅱ-1-7食用菌菌种的分离和制种技术 236

实验Ⅱ-1-8颉颃性放线菌的筛选法 241

2.厌氧菌培养技术 245

实验Ⅱ-2-1厌氧罐技术 245

实验Ⅱ-2-2用厌氧袋法分离培养丙酮丁醇梭菌 248

实验Ⅱ-2-3针筒厌氧培养法 252

实验Ⅱ-2-4用亨盖特滚管技术分离严格厌氧菌 255

3.动、植物病毒实验技术 260

实验Ⅱ-3-1植物病毒的接种、培养和定量测定 260

实验Ⅱ-3-2动物病毒的鸡胚接种、培养和病毒滴度测定 263

实验Ⅱ-3-3家蚕质型多角体病毒的培养和分离提纯 266

4.水体微生物学检测技术 269

实验Ⅱ-4-1水中细菌总数的测定 269

实验Ⅱ-4-2水中总大肠菌群的检测 272

实验Ⅱ-4-3应用测菌管检测野外水体中微生物的数量 278

实验Ⅱ-4-4五日生化需氧量（BOD5）的测定 282

5.微生物培养技术 285

实验Ⅱ-5-1微生物细胞的固定化及其应用 285

实验Ⅱ-5-2培养基的正交设计与分析 289

实验Ⅱ-5-3台式自控发酵罐的原理、构造和使用 295

6.微生物遗传变异实验技术 302

实验Ⅱ-6-1转座子Tn5的遗传学效应 302

实验Ⅱ-6-2 lac-突变型的互补测验 306

实验Ⅱ-6-3大肠埃希氏菌λ噬菌体的高频转导 311

实验Ⅱ-6-4质粒DNA转化酵母细胞 314

实验Ⅱ-6-5质粒从大肠埃希氏菌到链霉菌的接合转移 317

7.分子微生物学实验技术 319

实验Ⅱ-7-1细菌DNA中（G+C）mol%值的测定 319

实验Ⅱ-7-2利用16S rRNA基因序列鉴定细菌 325

实验Ⅱ-7-3利用ITS序列鉴定真菌 328

实验Ⅱ-7-4环境样品中微生物群落结构的分析 331

8.免疫学实验技术 335

实验Ⅱ-8-1巨噬细胞吞噬功能的测定 335

实验Ⅱ-8-2用间接ELISA测定抗血清的效价 338

参考文献 341

附录 345

一、若干微生物的学名及其音标 345

二、酸碱指示剂的配制 349

三、常用培养基成分 350

四、染色液和试剂的配制 353

五、蒸汽压力与温度的关系 355

六、培养基容积与加压灭菌所需时间 355

七、缓冲液的配制表 355

八、常用消毒剂表 357

九、市售浓酸和氨水的相对密度和实际浓度 357

十、相对密度与糖度换算表 358

十一、常用干燥剂 358

十二、十进制倍数和分数的词冠表（国际制） 359

十三、常用的计量单位 359

十四、洗液的配制 359

十五、标准筛孔对照表 360

十六、部分国家的菌种保藏机构名称和网址信息 361