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第一章 核酸的分离纯化 1

第一节 从哺乳动物组织中制备基因组DNA 2

实验一 从哺乳动物组织中制备基因组DNA 2

Ⅰ常规制备组织或培养细胞基因组DNA 2

Ⅱ快速制备组织或培养细胞基因组DNA 4

Ⅲ从血白细胞中制备基因组DNA 5

第二节 核酸的定量和质量检测及贮存 6

实验二 核酸的定量和质量检测及贮存 6

Ⅰ异硫氰酸胍／氯化铯超离心法制备总RNA 7

第三节 从哺乳动物组织中制备总RNA 7

实验三 从哺乳动物组织中制备总RNA 7

Ⅱ酸性异硫氰酸胍／酚／氯仿抽提分离总RNA 9

第四节 琼脂糖凝胶电泳 12

实验四 琼脂糖凝胶电泳 15

Ⅰ常规琼脂糖凝胶电泳 15

Ⅱ碱性琼脂糖凝胶电泳 16

Ⅰ酚的重蒸馏 17

实验五 酚／氯仿抽提液的制备 17

第五节 酚／氯仿抽提液的制备 17

ⅡSS－酚（saltsaturatedphenol）的制备 18

第二章 分子杂交 20

第一节 核酸分子探针的标记概述 20

第二节 Southern印迹杂交 26

实验一 Southern印迹杂交 26

Ⅰ虹吸印迹法 27

Ⅲ真空转移法 29

Ⅱ电转法 29

第三节 Northern印迹杂交 30

实验二 Northern印迹杂交 30

Ⅰ聚乙二醛和二甲基亚砜变性电泳 31

Ⅱ甲醛变性胶电泳法 32

Ⅲ甲基氢氧化汞电泳 33

第四节 斑点及狭缝印迹杂交 34

实验三 斑点及狭缝印迹杂交 34

Ⅰ标准方法 35

Ⅲ完整细胞斑点吸印法 36

Ⅱ胞质RNA的快速提取及点样法 36

第五节 核酸原位杂交 37

实验四 核酸原位杂交 37

Ⅰ组织细胞内mRNA的原位杂交 38

Ⅱ与间期细胞内染色质DNA的原位杂交 40

Ⅲ非放射性核素标记在核酸原位杂交中的应用 40

第六节 Western印迹 42

实验五 Western印迹 42

第三章 分子克隆 45

第一节 质粒DNA的小量提取 45

实验一 质粒DNA的小量提取 45

第二节 DNA的限制性核酸内切酶消化 48

实验二 DNA的限制性核酸内切酶消化 48

第三节 目的DNA片段的回收 52

实验三 目的DNA片段的回收 52

Ⅰ低熔点琼脂糖凝胶电泳回收DNA片段 53

Ⅱ透析袋电泳洗脱法回收目的DNA片段 54

实验四 载体质粒DNA与目的DNA片段的连接 56

第四节 载体质粒DNA与目的DNA片段的连接 56

第五节 重组质粒DNA转化细菌 58

实验五 重组质粒DNA转化细菌 58

第六节 重组克隆筛选和鉴定 61

实验六 重组克隆筛选和鉴定 61

Ⅰ平板筛选 64

Ⅱ酶切分析及凝胶电泳检测鉴定 65

第七节 削减杂交克隆 66

实验七 削减杂交克隆 66

Ⅳ序列测定 66

Ⅴ免疫分析 66

ⅢPCR检测 66

第四章 DNA序列的测定 70

第一节 DNA序列测定方法的概述 70

第二节 制备序列测定的DNA模板 74

实验一 制备序列测定的DNA模板 74

Ⅰ从M13噬菌体中制备单链模板 75

Ⅱ从重组质粒中制备双链DNA模板 77

实验二 双脱氧法测定DNA序列 78

第三节 测定DNA序列 78

第四节 变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳 83

实验三 重组质粒序列测定反应产物的电泳 83

第五章 聚合酶链反应 86

第一节 基本PCR技术 86

第二节 PCR引物设计 92

第三节 RT-PCR技术 93

实验一 RT-PCR 93

实验二 反向PCR 95

第四节 反向PCR 95

第五节 差异显示PCR 99

实验三 差异显示PCR 99

第六章 cDNA文库的构建 105

第七章 蛋白质表达 111

第一节 外源性基因在大肠杆菌中的诱导表达 111

实验一 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建 111

实验二 诱导靶蛋白表达的优化 113

第二节 外源性基因在真核细胞中的表达 114

实验三 大量表达靶蛋白 114

实验四 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建 115

实验五 转染 116

Ⅰ电穿孔法 116

Ⅱ磷酸钙共沉淀法 117

ⅢDEAE－葡聚糖转染技术 118

Ⅳ脂质体法 118

实验六 转染克隆的筛选和分离 121

实验七 在稳定转染的细胞中检测目的基因的表达 123

第三节 在稳定转染的细胞中检测目的基因的表达 123

第八章 反转录病毒载体介导的基因转移 127

实验一 复制缺陷性重组反转录病毒的构建 128

实验二 磷酸钙介导的重组反转录病毒载体转染 131

实验三 获取和滴定病毒 132

第九章 蛋白质的分离纯化和分析 133

第一节 比色法测定蛋白质含量 133

实验一 Folin－酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质浓度 134

实验二 改良Lowry法测定蛋白质浓度 136

实验三 考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质浓度 139

实验四 紫外吸收法测定蛋白质含量 141

第二节 蛋白质的单向聚丙烯酰胺凝胶电泳 143

实验五 盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 145

实验六 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定蛋白质分子量 149

实验七 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测定蛋白质分子量 154

第三节 蛋白质的双向凝胶电泳 157

实验八 IEF/SDS-PAGE双向电泳分离血清蛋白质 158

实验九 AGE/PG-PAGE双向电泳分离鉴定前β－高密度脂蛋白 163

第四节 蛋白质的凝胶过滤层析 166

实验十 葡聚糖凝胶层析法测定蛋白质分子量 168

第五节 蛋白质的离子交换层析 173

实验十 一离子交换层析法纯化细胞色素c 175

第六节 蛋白质的亲和层析 178

实验十 二亲和层析法纯化猪胰蛋白酶 180

实验十 三亲和层析法纯化尿激酶 184

第七节 高效液相层析分离纯化蛋白质 187

第八节 质谱法分析蛋白质、多肽 195

第一节 血清IgG的纯化及鉴定 202

实验一 血清IgG的纯化及鉴定 202

第十章 免疫生物化学 202

第二节 免疫电泳技术 205

实验二 单向定量电泳（火箭免疫电泳） 206

实验三 单向免疫扩散测定人血清载脂蛋白B100 208

实验四 酶联免疫分析技术 209

实验五 双抗体夹心法检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg） 210

第十一章 生物芯片技术 212

第一节 概述 212

第三节 生物芯片技术的应用 221

第二节 生物芯片的操作基因芯片蛋白芯片芯片实验室 221

第十二章 生物信息学 229

第一节 生物信息数据库和查询 229

第二节 局部序列相似性对比 231

实验一 局部序列相似性对比 231

第三节 蛋白质的结构与功能预测 240

实验二 蛋白质的结构与功能预测 240

第四节 基因芯片表达数据的聚类分析 246

实验三 基因芯片表达数据的聚类分析 246

附录1 常用的标准蛋白质marker及其分子量参考值 256