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分子生物学实验安全守则 1

第1篇 基础性实验 5

实验1 动物细胞及组织基因组DNA的提取 5

实验2 植物组织基因组DNA的提取 8

实验3 大肠杆菌基因组DNA的提取 10

实验4 酵母基因组DNA的提取 12

实验5 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 15

实验6 PCR基因扩增及扩增产物的回收 17

实验7 DNA体外重组 21

实验8 大肠杆菌感受态的制备与质粒DNA转化 23

实验9 重组质粒DNA的小量提取 26

实验10 重组质粒DNA的酶切鉴定 28

实验11 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 31

实验12 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 33

实验13 蛋白质的纯化 37

第2篇 综合性实验 43

实验14 RNA的提取、鉴定及逆转录聚合酶链反应 43

实验15 实时荧光定量PCR对线虫基因表达的分析 48

实验16 启动子报告基因载体DNA的克隆与大量制备 51

实验17 哺乳动物细胞的外源DNA转染及启动子荧光素酶报告基因活性分析 56

实验18 GFP融合蛋白的过表达及其检测 59

实验19 蛋白质免疫荧光实验检测基因的表达和定位 62

实验20 蛋白质的免疫印迹检测基因的表达 65

实验21 间接酶联免疫吸附法检测癌基因的表达 68

实验22 利用PCR反应对DNA分子进行体外定点突变 71

实验23 染色质免疫共沉淀检测转录因子与启动子的结合 75

实验24 凝胶迟滞电泳检测转录因子在启动子上的结合位点 79

实验25 蛋白质免疫共沉淀检测转录因子间的相互作用 84

实验26 哺乳动物双杂交实验检测转录因子间相互作用 88

实验27 GST pull-down检测蛋白质分子间的相互作用 91

第3篇 研究性实验 97

实验28 过表达外源基因对哺乳动物细胞增殖的影响 97

实验29 线虫RNA干扰的基因沉默 99

实验30 植物转基因功能分析 104

第4篇 中学相关生物学实验指导（分子生物学篇）一、中学生物课程标准中分子生物学实验内容的概述 111

二、中学分子生物学实验设计分析与指导 111

三、中学生物学综合性、研究性实验立项及设计思路 112

附录 114

Ⅰ 分子生物学常用数据 114

Ⅱ 常用溶液和培养基的配制 116

Ⅲ 溴化乙锭溶液的净化处理 119

Ⅳ 细菌保存 120