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第一章 引言 1

1 蜜蜂在农业中的地位 1

1.1 蜜蜂在农业增产中的重要作用 1

1.2 蜜蜂在农业可持续发展中的作用 2

1.3 我国养蜂业在世界的地位 3

2 化学农药与蜜蜂 4

2.1 农药对蜜蜂毒性的生物测定 5

2.2 亚致死剂量杀虫剂对蜜蜂的影响 10

3 东方蜜蜂和西方蜜蜂的比较研究 18

4 蜜蜂的解毒酶研究进展 19

4.1 蜜蜂乙酰胆碱酯酶研究 20

4.2 蜜蜂羧酸酯酶研究 22

4.3 蜜蜂谷胱甘肽硫转移酶研究 23

4.4 蜜蜂多功能氧化酶研究 26

5 研究目的和意义 30

5.1 研究目的 30

5.2 研究意义 30

第二章 蜜蜂羧酸酯酶的最适反应条件的测定 31

1 材料与方法 31

1.1 试剂 31

1.2 试虫来源 31

1.3 酶源制备 32

1.4 CarE活性测定方法 32

1.5 蛋白质含量测定 32

1.6 实验设计 32

2 结果与分析 33

2.1 正交试验结果的极差分析 33

2.2 正交试验结果的方差分析 34

2.3 试验因子各水平间的差异显著性比较 35

3讨论 36

第三章 蜜蜂解毒酶系的体躯与亚细胞分布研究 38

1 材料与方法 39

1.1 试虫 39

1.2 试剂及仪器 39

1.3 AchE、CarE和GST在蜜蜂体躯的分布 39

1.4 AchE、CarE和GST的亚细胞分布 39

1.5 AchE活性测定 40

1.6 CarE活性测定 41

1.7 GST活性测定 41

1.8 可溶性蛋白质含量测定 42

2 结果与分析 42

2.1 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同组织AchE活性 42

2.2 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同组织CarE活性 44

2.3 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同组织GST活性 45

2.4 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同亚细胞层AchE活性 47

2.5 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同亚细胞层CarE活性 48

2.6 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同亚细胞层GST活性 48

3 讨论 49

第四章 蜜蜂发育期解毒酶系变化的研究 55

1 材料与方法 55

1.1 试虫 55

1.2 试剂及仪器 56

1.3 酶源提取与制备 56

1.4 AchE活性测定 56

1.5 CarE活性测定 57

1.6 GST活性测定 57

1.7 可溶性蛋白质含量测定 57

2 结果与分析 57

2.1 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同虫态AchE活性 57

2.2 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同发育期CarE活性 58

2.3 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同发育期羧酸酯酶Km测定 59

2.4 东方蜜蜂和西方蜜蜂不同发育期GST活性测定 60

2.5 西方蜜蜂成年工蜂不同日龄的AchE活性变化 61

2.6 西方蜜蜂成年工蜂不同日龄的羧酸酯酶活性变化 62

2.7 西方蜜蜂成年工蜂不同日龄的谷胱甘肽硫转移酶活性变化 63

2.8 不同蜂种AchE活性比较 63

2.9 不同蜂种CarE活性比较 64

2.10 不同蜂种GST活性比较 65

3 讨论 66

第五章 化学农药对蜜蜂解毒酶系的影响研究 71

1 材料与方法 72

1.1 试虫 72

1.2 试剂、化学药剂及仪器 72

1.3 农药对蜜蜂的毒性测定 73

1.4 亚致死剂量化学药剂对蜜蜂的影响样品取样 73

1.5 酶源提取与制备 74

1.6 AchE活性测定 74

1.7 CarE活性测定 74

1.8 GST活性测定 74

1.9 化学农药对蜜蜂CarE的离体抑制测定 74

1.10 可溶性蛋白质含量测定 75

2 结果与分析 75

2.1 东方蜜蜂和西方蜜蜂对5种化学药剂的敏感性比较 75

2.2 5种亚致死剂量的化学药剂对东方蜜蜂和西方蜜蜂的AchE活性影响 76

2.3 5种亚致死剂量的化学药剂对东方蜜蜂和西方蜜蜂的CarE活性影响 80

2.4 5种亚致死剂量的化学药剂对东方蜜蜂和西方蜜蜂的GST活性影响 83

2.5 5种化学药剂对东方蜜蜂和西方蜜蜂的CarE离体抑制作用 87

3 讨论 89

第六章 总结 93

1 总结 93

2 本研究的创新之处 95

3 讨论 95

参考文献 97