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绪论 1

一、细胞的发现 1

二、细胞培养发展简史 2

三、本教材使用说明 3

四、细胞培养技术的学习方法 4

第一章　细胞培养的基本条件 7

第一节　细胞培养实验室的建立 7

一、细胞培养实验室设计原则与要求 7

二、细胞培养实验室的布局 7

三、细胞培养实验室的基本设备 10

第二节　培养仪器和材料 12

一、常用仪器设备 12

二、培养器皿与其他材料 15

三、培养器皿的清洗和消毒 17

第三节　细胞培养用液 24

一、培养基 24

二、清洗液 37

三、消化液 39

四、培养用液的灭菌与保存 39

第二章　细胞培养的基本原理和技术 43

第一节　细胞培养的基本原理 43

一、细胞培养的基本概念 43

二、培养细胞的生物学 44

第二节　细胞培养的准备和基本程序 49

一、细胞培养前的准备 49

二、细胞培养的基本程序与技术 50

第三节　细胞活性和增殖的检测 55

一、细胞活性的检测 55

二、细胞增殖的检测 57

第四节　细胞的冻存、复苏和运输 63

一、细胞的冻存 63

二、细胞的复苏 64

三、细胞的运输 65

第五节　细胞培养物污染的检测和排除 66

一、污染因素和预防措施 66

二、污染的检测 68

三、微生物污染的排除 72

第六节　显微观察和流式细胞术 73

一、相差显微镜 74

二、荧光显微镜 75

三、激光扫描共焦显微镜 78

四、流式细胞仪 80

第三章　上皮细胞及其干细胞的培养 84

第一节　内皮细胞和内皮祖细胞 84

一、血管内皮细胞 84

二、微血管内皮细胞 88

三、淋巴管内皮细胞 91

四、内皮祖细胞 95

第二节 胃和肠的上皮细胞 99

第三节　呼吸道上皮细胞 101

一、气管和支气管上皮细胞 102

二、Ⅱ型肺泡细胞 105

第四节　表皮细胞和表皮干细胞 107

一、角质形成细胞 107

二、表皮干细胞 108

三、毛囊干细胞 110

第五节　乳腺上皮细胞 113

第四章 结缔组织细胞及其干细胞的培养 116

第一节　固有结缔组织细胞 116

一、成纤维细胞 116

二、巨噬细胞 119

三、肥大细胞 122

四、脂肪细胞 126

五、脂肪干细胞 128

第二节　软骨细胞和成骨细胞 129

一、软骨细胞 129

二、成骨细胞 133

第三节　单核细胞和淋巴细胞 135

一、单核细胞 135

二、淋巴细胞 136

第四节　树突状细胞 138

一、外周血中的树突状细胞 138

二、骨髓中的树突状细胞 140

第五章　肌细胞及其干细胞的培养 142

第一节　平滑肌细胞 142

一、血管平滑肌细胞 142

二、胃肠平滑肌细胞 145

第二节　骨骼肌成肌细胞 147

一、鸟类骨骼肌成肌细胞 147

二、啮齿类骨骼肌成肌细胞 148

三、人骨骼肌细胞 149

第三节　心肌细胞 150

一、幼年和胚胎心肌细胞 150

二、成年心肌细胞 154

第四节　心肌干细胞 157

一、心脏内的心肌干细胞 157

二、骨髓中的心肌干细胞 158

第六章　神经组织细胞和神经干细胞的培养 161

第一节　神经元 161

第二节　神经胶质细胞 163

一、星形胶质细胞 163

二、少突胶质细胞 164

三、施万细胞 166

第三节　神经干细胞 169

第七章 骨髓间充质干细胞的培养及其诱导分化 172

第一节　骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定 172

一、贴壁培养法 172

二、密度梯度离心法 174

三、骨髓间充质干细胞的鉴定 175

第二节　骨髓间充质干细胞的诱导分化 177

一、向软骨和骨细胞的诱导分化 177

二、向心肌细胞和内皮细胞的诱导分化 181

三、向神经细胞的诱导分化 184

第八章　胚胎干细胞的培养及其诱导分化 187

第一节　小鼠胚胎干细胞的分离、培养与鉴定 187

一、小鼠胚胎干细胞的分离与培养 187

二、小鼠胚胎干细胞的鉴定 193

第二节 山羊胚胎干细胞的分离、培养与鉴定 199

一、山羊胚胎干细胞的分离与培养 199

二、山羊ES样细胞的鉴定 202

第三节　人胚胎干细胞的分离、培养与鉴定 204

一、人胚胎干细胞的分离与培养 204

二、人胚胎干细胞的鉴定 207

第四节　胚胎干细胞的诱导分化 208

一、胚胎干细胞诱导分化的基本策略及理论实践 208

二、胚胎干细胞向肝细胞的诱导分化 209

三、胚胎干细胞向神经前体细胞和终末细胞的诱导分化 211

四、胚胎干细胞向造血细胞的诱导分化 213

五、胚胎干细胞向其他类型细胞的诱导分化 215

第五节　胚胎干细胞系的建立与应用 216

一、胚胎干细胞系的建立 216

二、胚胎干细胞系的应用 217

三、胚胎干细胞研究与应用中存在的主要问题 219

第九章　肿瘤细胞和肿瘤干细胞的培养 220

第一节　实体肿瘤 220

一、肝癌细胞 221

二、胃癌细胞 225

三、肺癌细胞 227

四、乳腺癌细胞 230

五、卵巢癌细胞 233

第二节　血液肿瘤 235

第三节　肿瘤干细胞 237

一、肿瘤干细胞的分离和纯化 237

二、肿瘤干细胞的鉴定 242

第四节　肿瘤细胞系的鉴定 243

一、肿瘤细胞系的共同特征 243

二、人肿瘤细胞系的个别特性 245

三、细胞系污染的鉴定 246

第十章　培养细胞的相关生物学检测技术 249

第一节　细胞衰老与凋亡的检测 249

一、细胞衰老的检测 249

二、细胞凋亡的检测 254

第二节　细胞周期分析方法 263

第三节　细胞同步化方法 264

一、振荡分离法 264

二、低温培养法 265

三、血清饥饿法 265

四、两次阻滞法 266

五、细胞同步化检测 267

第四节　细胞迁移实验 268

一、细胞刮除法 268

三、细胞培养池法 269

第十一章　培养细胞的遗传学与分子生物学检测 272

第一节　培养细胞的遗传学检测 272

一、基因突变检测 272

二、染色体畸变分析 278

三、微核检测 282

第二节　培养细胞的分子生物学检测 285

一、培养细胞的DNA检测 286

二、培养细胞的RNA检测 288

三、培养细胞的蛋白质检测 290

四、分子生物学检测新技术介绍 292

第十二章　细胞培养技术的应用 294

第一节　体外细胞培养模型的建立与应用 294

一、细胞共培养模型的建立与应用 294

二、细胞外基质凝胶模型的建立与应用 296

三、生物材料的组织工程技术与应用 298

第二节　杂交瘤单克隆抗体技术 299

一、抗原的准备和动物免疫 300

二、杂交瘤制备 305

三、杂交瘤细胞株筛选 308

四、杂交瘤细胞株的亚克隆 309

第三节　培养细胞的基因导入技术 310

一、基因导入的基本原理 310

二、基因组功能研究中的基因导入 311

三、转基因动物中的基因导入 311

四、基因治疗中的基因导入 315

五、基因导入在其他领域中的应用 316

第四节　培养细胞的核移植技术及其应用 317

一、核移植技术的原理与方法 317

二、核移植技术的实际应用 324

英文缩写 326

中文索引 331