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实验课要求及实验室安全规则 1

第一篇 生物分子的定性定量测定方法 2

1 滴定分析法 2

1．1 酸碱滴定法的原理和操作 2

1．2 氧化还原滴定法的原理和操作 3

2 紫外—可见分光光度法 4

2．1 原理 4

2．2 紫外—可见分光光度计 5

2．3 吸光度的测定和浓度计算 5

3 荧光分光光度法 6

3．1 原理 6

3．2 荧光分光光度计 6

3．3 荧光强度的测定和浓度计算 7

4 电化学检测法 7

4．1 原理 7

4．2 电化学检测仪 8

4．3 电流值的测定和浓度计算 8

5 其他测定方法 8

6 实验部分 8

实验一 总糖和还原糖含量的测定 8

实验二 葡萄糖传感器检测样品中葡萄糖含量 11

实验三 玉米种子中色氨酸含量的测定 13

实验四 蛋白质的定量分析 15

Ⅰ．总氮量的测定——微量凯氏定氮法 15

Ⅱ．Folin—酚试剂法（Lowry法） 17

Ⅲ．考马斯亮蓝染色法（Bradford法） 19

Ⅳ．双缩脲法 20

Ⅴ．紫外吸收法 22

实验五 核酸的定量分析 23

Ⅰ．紫外分光光度法测定核酸含量 23

Ⅱ．利用糖类的颜色反应测定核酸含量 24

Ⅲ．定磷法测定核酸含量（钼蓝比色法） 26

实验六 维生素被B2（核黄素）的荧光测定法 28

实验七 食物中维生素C的提取和含量测定 30

实验八 植物材料中总黄酮的提纯与鉴定 32

第二篇 生物大分子的性质研究 34

7 糖类的理化性质 34

7．1 物理性质 34

7．2 单糖的氧化反应 34

7．3 单糖的强酸脱水和颜色反应 35

7．4 多糖的水解 35

8 脂质的理化性质 36

8．1 物理性质 36

8．2 甘油三酯的水解和皂化 36

8．3 不饱和脂肪酸的化学性质 36

8．4 羟基脂肪酸的酰基化 37

9 蛋白质的理化性质 37

9．1 胶体性质 37

9．2 两性解离和等电点 38

9．3 沉淀作用 38

9．4 变性作用 39

9．5 颜色反应 39

9．6 紫外吸收性质 40

10 核酸的理化性质 40

10．1 物理性质 40

10．2 紫外吸收性质 40

10．3 显色反应 41

10．4 变性和复性 41

11 实验部分 42

实验九 糖类的呈色反应 42

实验十 脂肪碘值的测定 44

实验十一 氨基酸和蛋白质的呈色反应 46

实验十二 蛋白质的两性反应和等电点的测定 48

实验十三 蛋白质的沉淀和变性反应 49

第三篇 酶促反应动力学和酶活力测定 52

12 酶的概论 52

12．1 酶的概念和分类 52

12．2 酶的催化特点 52

12．3 生物工程常用酶制剂简介 53

13 酶促反应动力学 54

13．1 底物浓度对酶促反应速率的影响 54

13．2 温度对酶促反应速率的影响 55

13．3 pH对酶促反应速率的影响 56

13．4 激活剂对酶促反应速率的影响 56

13．5 抑制剂对酶促反应速率的影响 56

14 酶活力测定 57

14．1 酶活力单位的定义和酶活力的概念 58

14．2 酶活力测定方法的类型和特点 59

15 实验部分 59

实验十四 酶作用的专一性 59

实验十五 酶的激活和抑制 61

实验十六 底物浓度对酶活性的影响——蔗糖酶米氏常数的测定 62

实验十七 过氧化物酶动力学性质分析 65

实验十八 大麦萌发前后淀粉酶活力的比较 66

实验十九 糖化型淀粉酶活力的测定 68

实验二十 发色底物测定大曲中 70

α-葡萄糖苷酶活力 70

实验二十一 蛋白酶活力的测定 72

第四篇 生物分子的分离技术 75

16 生物分离的一般过程和特点 75

17 生物样品的预处理 76

17．1 固液分离 76

17．2 细胞的破碎 76

17．3 生物分子的提取技术 77

18 生物分子的粗分级 77

18．1 浓缩技术 77

18．2 沉淀技术 78

18．3 膜分离技术 79

19 生物分子的细分级 80

19．1 层析技术 80

19．2 电泳技术 81

19．3 离心分离技术 83

20 实验部分 83

实验二十二 酵母RNA的提取及其组分的鉴定 83

实验二十三 核苷酸的DEAE-纤维素薄板层析法 85

实验二十四 氨基酸纸层析及蛋清氨基酸成分研究 86

实验二十五 蛋白酶的盐析沉淀 89

实验二十六 醋酸纤维薄膜电泳分离蛋白质 91

实验二十七 凝胶过滤层析测定蛋白质的相对分子质量 93

实验二十八 SDS-聚丙烯酰胺凝 95

胶电泳（SDS—PAGE）法测定蛋白质的相对分子质量 95

实验二十九 DNA的琼脂糖凝胶电泳 99

第五篇 物质代谢过程研究 102

21 物质代谢概论 102

21．1 代谢的概念和含义 102

21．2 代谢途径和代谢中间产物 102

21．3 代谢的催化剂和调节位点 103

22 物质代谢的研究方法 103

22．1 测量气体法 103

22．2 代谢物化学分析法 104

22．3 同位素示踪法 104

22．4 添加酶的抑制剂 104

22．5 代谢工程方法 105

23 实验设计和数据统计方法 106

24 实验部分 107

实验三十 葡萄糖代谢中间产物的定性分析 107

实验三十一 碘乙酸抑制糖酵解 110

实验三十二 发酵过程中无机磷的利用和ATP的生成 112

实验三十三 脂肪转化为糖类的定性实验 114

实验三十四 脂肪酸的β-氧化作用 115

实验三十五 植物组织的转氨基作用 118

实验三十六 瓦勃氏呼吸仪法研究氨基酸的脱羧作用 120

实验三十七 设计正交实验比较几种因素对酵母发酵作用的影响 125

第六篇 综合性、设计性和研究型实验 129

实验三十八 酵母蔗糖酶粗提取、纯化及其酶性质研究 129

实验三十九 固定化酵母细胞水解蔗糖 135

实验四十 马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验 137

实验四十一 用不同分离技术提取柠檬酸的工艺比较研究 140

实验四十二 蛋白酶抑制剂的筛选和制备 144

参考文献 147