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序 1

前言 1

第1章 干细胞的分离纯化 1

1.1 密度梯度离心法 1

1.2 单抗贴壁铺展法 3

1.3 免疫磁珠分选技术 4

1.4 流式细胞分选法 17

1.5 组织消化法 22

主要参考文献 23

2.1 光学显微镜 24

第2章 干细胞的鉴定 24

2.2 电子显微镜 32

2.3 共聚焦显微镜 43

2.4 流式细胞术鉴定特异基因的表达 47

主要参考文献 51

第3章 胚胎干细胞体外培养与定向诱导分化 53

3.1 胚胎干细胞分离培养 53

3.2 小鼠胚胎干细胞定向诱导分化 66

主要参考文献 69

第4章 成体干细胞分离培养扩增及体外分化 70

4.1 造血干／祖细胞 70

4.2 间充质干细胞 83

4.3 神经干细胞 101

4.4 血管内皮祖细胞 105

4.5 肌肉干细胞 108

4.6 肝脏干细胞 114

4.7 胰腺干细胞 122

4.8 皮肤干细胞的扩增及定向诱导分化 124

主要参考文献 128

第5章 干细胞体内增殖分化 131

5.1 干细胞向成体动物体内移植——NOD/SCID小鼠造血干／祖细胞移植 131

5.2 干细胞向动物胚胎移植——胚胎干细胞囊胚植入构建嵌合体 135

5.3 体内可见光成像技术用于干细胞研究 144

主要参考文献 157

6.1 干细胞细胞周期检测技术 158

第6章 干细胞增殖、分化及其调控的分析检测 158

6.2 干细胞分化检测 164

6.3 干细胞增殖分化调控的研究策略 164

6.4 常规操作 168

6.5 增殖分化调控机制的研究 185

6.6 干细胞增殖分化调控研究范例Ⅰ——由生命现象到功能分子 225

6.7 干细胞增殖分化调控研究范例Ⅱ——由功能分子到生命现象的调控 233

主要参考文献 241

第7章 核移植技术 243

7.1 总论 243

7.2 核移植操作所需的主要设备与试剂 244

7.3 核移植技术的主要操作步骤 246

7.4 核移植技术的注意事项及影响因素 253

主要参考文献 255

第8章 基因打靶技术 256

8.1 打靶载体构建 256

8.2 中靶ES细胞的筛选 260

主要参考文献 266

第9章 干细胞与组织工程实验技术 267

9.1 干细胞与骨组织工程 267

9.2 干细胞与软骨组织工程 272

9.3 干细胞与皮肤组织工程 281

9.4 干细胞与肌腱组织工程 285

9.5 干细胞与心肌组织工程 290

9.6 干细胞与血管组织工程 298

9.7 干细胞与肝组织工程 302

主要参考文献 315

第10章 干细胞的保存与复苏 318

10.1 造血干细胞低温保存的生物学基础 318

10.2 冷冻保护液的选择 318

10.3 冷冻保存方法的选择 320

10.4 冷冻保存的设备 321

10.5 造血干细胞的低温保存方法 321

主要参考文献 325

11.1 有效性研究 326

第11章 干细胞治疗的临床前研究 326

11.2 安全性研究 335

11.3 干细胞的采集、分离、鉴定及体外操作的质量控制 340

主要参考文献 342

第12章 干细胞治疗的临床（试验）研究 343

12.1 临床研究的产生及筹划 343

12.2 临床研究的不同阶段 352

12.3 干细胞治疗的临床新技术申请 354

12.4 干细胞相关的临床试验研究示例 356

主要参考文献 361

13.1 基因治疗概述 362

第13章 干细胞与基因治疗 362

13.2 病毒介导的基因转导实验技术 370

13.3 干细胞的转染 387

13.4 以干细胞为基因导入靶细胞的基因治疗临床应用策略及前景 392

主要参考文献 396

附录1 缩略语 398

附录2 常用溶液配制方法 402

附录3 主要共聚焦激光对应常用荧光染料表 405

附录4 合适小鼠卵的培养基配方（g/L） 408

附录5 Zimmermann细胞融合培养基成分（pH7.0） 409

附录6 补加锶的M16培养基 410

附录7 FDA/NIH关于基因治疗的相关文献 411