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目录 2

序 2

前言 2

第一篇 基本操作篇 2

第一章 绪论 2

第一节 基因操作技术 2

第二节 实验室规则与安全 5

第一节 常用器皿与仪器 8

第二章 仪器操作与溶液配制 8

第二节 溶液 11

第三章 大肠杆菌培养与保存 14

第一节 培养前准备 14

第二节 大肠杆菌培养 20

第三节 大肠杆菌菌株保存 24

第四章 基因操作中的酶学反应 27

第一节 常用酶的选购与保存 27

第二节 限制性内切核酸酶 28

第三节 限制性内切核酸酶消化DNA实验 31

第四节 DNA作图 36

第五节 连接酶 37

第六节 其他核酸酶 39

第五章 电泳技术 43

第一节 基本原理 43

第二节 琼脂糖凝胶电泳 45

第三节 从琼脂糖凝胶中回收DNA 49

第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 53

第五节 从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA 56

第二篇 DNA篇 60

第六章 DNA基本操作 60

第一节 DNA保存 60

第二节 DNA检测 61

第三节 DNA浓缩 62

第四节 DNA纯化 64

第七章 扩增与提取质粒DNA 70

第一节 质粒有关基本知识 70

第二节 质粒DNA提取 71

第三节 质粒DNA纯化 79

第八章 DNA转化 83

第一节 制备感受态细胞 83

第二节 转化 87

第九章 扩增与提取噬菌体DNA 90

第一节 噬菌体生活史 90

第二节 感染力测定 90

第三节 噬菌体回收与繁殖 91

第四节 提取噬菌体DNA 93

第十章 提取真核生物基因组DNA与构建基因组文库 95

第一节 SDS／酚法提取基因组DNA 96

第二节 试剂盒法提取基因组DNA 98

第三节 CTAB法提取基因组DNA 100

第四节 构建基因组DNA文库 101

第十一章 PCR基本操作 103

第一节 PCR基本原理 103

第二节 引物设计 104

第三节 耐热DNA聚合酶 106

第四节 PCR仪 109

第五节 PCR基本操作 110

第六节 PCR实例 113

第七节 预防污染 114

第八节 热启动 115

第十二章 DNA重组 119

第一节 重组流程 119

第二节 插入DNA的准备 120

第三节 载体的准备 120

第五节 插入DNA的修饰与改造 123

第四节 连接 123

第六节 转化 132

第七节 重组子筛选 133

第十三章 探针制备 137

第一节 探针标记法 137

第二节 随机引物法 138

第三节 末端标记法 139

第四节 探针纯化 143

第二节 PCR产物的纯化 146

第十四章 PCR产物克隆 146

第一节 PCR产物重组策略 146

第三节 末端平齐 147

第四节 TA克隆 149

第五节 添加限制性内切核酸酶识别序列 151

第十五章 PCR应用 154

第一节 菌落PCR 154

第二节 简并引物PCR 156

第一节 DNA酶切 158

第十六章 Southern印迹 158

第二节 琼脂糖凝胶电泳 159

第三节 变性、转膜与固定 161

第四节 杂交 165

第十七章 分子标记 170

第一节 微卫星标记 170

第二节 RFLP与RAPD 172

第十八章 DNA序列测定与比对 176

第一节 测序原理 176

第二节 自动测序仪 177

第三节 DNA序列的同源比对 180

第三篇 RNA篇 188

第十九章 RNA提取 188

第一节 RNA实验前的准备 188

第二节 实验材料 190

第三节 用AGPC法提取RNA 195

第四节 用NP-40法提取RNA 197

第五节 使用试剂盒提取RNA 200

第二十章 纯化poly(A)+RNA 203

第一节 利用oligo（dT）纯化poly(A)+mRNA 204

第二节 用oligo（dT）·纤维素进行柱层析 206

第二十一章 构建cDNA文库 210

第一节 以质粒为载体构建cDNA文库 210

第二节 以λ噬菌体为载体构建cDNA文库 215

第二十二章 RT-PCR 222

第二十三章 RACE 225

第一节 5′RACE 225

第二节 3′RACE 230

第一节 Northern印迹 231

第二十四章 转录分析 231

第二节　RNase保护分析 235

第四篇 表达篇 242

第二十五章 无细胞蛋白质合成 242

第一节 概述 242

第二节 大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统 243

第三节 小麦胚芽无细胞蛋白质合成系统 247

第一节 表达载体结构 254

第二十六章 大肠杆菌表达系统 254

第二节 表达中的问题 256

第三节 表达实例与SDS-PAGE检测 257

第二十七章 枯草杆菌表达系统 261

第一节 菌株与载体 261

第二节 转化 261

第三节 蛋白质的提取 263

第三节 转化 264

第二节 放线菌培养 264

第一节 菌株与载体 264

第二十八章 放线菌表达系统 264

第四节 蛋白质的提取 265

第二十九章 酿酒酵母表达系统 267

第一节 酿酒酵母表达系统概述 267

第二节 外源基因在酿酒酵母表达系统中的表达 269

第三十章 毕赤酵母表达系统 274

第一节 宿主 274

第二节 重组 274

第三节 重组基因的表达 279

第五篇 附录 284

附录一 储液配制 284

附录二 核酸及蛋白质数据 291

附录三 各种识别位点的限制性内切核酸酶分类表 294

附录四 部分限制性内切核酸酶需要的保护碱基 295

附录五 筛选重组子用的平板标签贴纸（φ＝9cm） 296

附录六 常用DNA相对分子质量标准物的琼脂糖凝胶电泳图像示意图 297

附录七 本书作为教材的使用方法 298