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第1章 基本原理介绍 1

1.引言 1

2.培养细胞的生物学 1

2.1培养的来源和特征 1

2.2分化 3

3.培养材料的选择 4

3.1器官培养或细胞培养 4

3.2组织来源 5

3.3传代培养 6

3.4培养液的选择 8

3.5气相 9

3.6基质 10

4.培养的准备 10

4.1基质 10

4.2培养液 11

4.3细胞 12

参考文献 15

第2章 培养哺乳类细胞使用的化学成分明确培养液及无血清培养液 17

1.引言 17

2.血清在细胞培养中的作用 17

2.1血清成分的作用 17

2.2细胞培养中使用血清的优点和缺点 22

3.无血清培养液设计策略和培养液的应用 24

3.1一般程序 24

3.2培养液选择前的考虑 25

3.3无血清培养液要求的成分和因素:作用和性质 26

3.4最佳培养液的测定分析 34

3.5细胞培养的低血清和无血清培养液 35

3.6激素和生长因子的选择 36

3.7大规模培养生产细胞时无血清和化学明确培养液的设计 42

4.无血清培养液的制备和操作 44

4.1一般原则和准备过程 44

4.2细胞从有血清到无血清和化学明确培养液的适应 45

5.生物基质涂抹培养表面的程序 48

参考文献 50

第三章 动物细胞大规模培养技术 54

1.引言 54

2.一般方法和培养参数 55

2.1细胞的定量测定 55

2.2设备和试剂 57

2.3实施考虑 58

2.4细胞生长的动力学 59

2.5培养液和营养物质 60

2.6pH值 62

2.7氧气 64

2.8大规模培养系统的类型 69

2.9限制大规模培养因素的概述 71

3.单层细胞培养 72

3.1引言 72

3.2细胞贴壁 74

3.3大规模细胞培养 75

4.悬浮细胞培养 91

4.1细胞对悬浮培养的适应 91

4.2静止的悬浮培养 94

4.3小规模的悬浮培养 95

4.4影响大规模悬浮培养的因素 95

4.5搅拌生物反应器 98

4.6连续流动的培养系统 99

4.7气动发酵器 102

5.固定培养 103

5.1固定培养系统 104

5.2包被培养系统 106

5.3有孔微载体 107

参考文献 109

第4章 培养细胞的保存与特性鉴定 111

1.引言 111

2.细胞库的建立 112

3.细胞的冷冻与定量复苏 114

3.1仪器 115

3.2准备二作及冷冻程序 117

3.3冷冻细胞的定量复苏和再建 118

4.细胞系特征 122

4.1细胞种的鉴定 122

4.2微生物污染的检测 132

4.3同种细胞间交叉污染的测定 144

4.4细胞系组织来源的鉴定 159

4.5免疫产物的定性与定量测定 167

5.细胞来源及特征数据的计算机化 172

6.致谢 173

参考文献 173

第5章 细胞离心淘洗分离活细胞技术 176

1.引言 176

2.细胞分离方法 176

3.细胞淘洗器 178

3.1淘洗器转头 178

3.2淘洗室 178

3.3蠕动泵及附件 180

3.4离心淘洗系统 182

4.技术操作 183

5.数据收集及处理 187

5.1不同种细胞群的淘洗(各部分细胞纯度的测定) 187

5.2已建立细胞系的细胞群体的淘洗 187

6.发展前景 190

7.致谢 193

参考文献 193

第6章 流式细胞术 194

1.引言 194

2.操作原理 196

2.1流体动力学的聚集 196

2.2激发 197

2.3聚焦 198

2.4光束几何学 199

2.5光学过滤 201

2.6光散射 204

3.数据输出与分析 211

3.1数据显示 211

3.2数据分析 213

4.质量控制 217

4.1检查 217

4.2重合校正 217

4.3脉冲形状分析 218

4.4时间 220

5.细胞分选 222

5.1静电分选 222

5.2分选效率 224

6.样品的制备 228

6.1不同组织细胞悬液的制备 228

7.分析种类范例 232

7.1非染色细胞的光散射 232

7.2染色方法 233

7.3染色方法的应用 238

7.4荧光素抗体的应用技术 240

7.5讨论 242

参考文献 244

第7章 器官培养 247

1.引言 247

2.器官组织培养技术的回顾 247

2.1凝固的血浆底物 248

2.2琼脂基质 248

2.3漂浮法 249

2.4格栅培养法 249

2.5交替暴露培养液和气相的培养法 249

3.表玻璃培养技术 250

3.1血浆凝固体与“球王筏”技术的结合 256

4.Maximow单载片培养技术 257

5.琼脂胶培养技术 259

5.1体外运用悬浮技术研究小鼠胚胎块的发育 266

6.用于畸胎学研究的胚胎培养 269

7.格栅培养方法 271

8.组织的器官培养:实例 280

8.1神经细胞 280

8.2新生大鼠肝脏 282

8.3兔主动脉 283

8.4人小梁网系统 285

8.5人胃肠粘膜 286

9.人成体组织的长期培养 287

10.器官培养物光镜样品的制备 290

10.1组织切片的制备 290

10.2染色方法 291

11.放射自显影术 294

11.1类固醇放射自显影 298

12.结果的定量 300

13.器官培养的优缺点 301

参考文献 302

第8章 细胞毒和活性检测 305

1.引言 305

2.背景知识 306

3.特异的培养技术 307

3.1培养方法 308

3.2药物作用时间与药物浓度 312

3.3恢复期 314

4.终点显示 315

4.1细胞毒性、存活力和存活 315

4.2细胞毒性与存活力 315

4.3存活(生殖完整性) 323

5.检测法的比较 324

6.操作步骤 325

6.1药物及药物溶液 325

6.2药物温育 326

6.3存活与繁殖能力检测 327

6.4细胞毒性检测 334

7.结果的解释 342

7.1细胞数和细胞毒指数间的关系 342

7.2剂量-反应曲线 343

8.细胞毒和活力检测的疑难点 345

8.1大的标准误 346

8.2检测间的变异 346

8.3高于对照水平的刺激 346

9.自动化作业与未来的发展 348

参考文献 348

第9章 原位杂交 352

1.引言 352

2.杂交技术 352

2.1载玻片的处理 352

2.2固定 353

2.3原位杂交 355

2.4洗脱程序 356

2.5信号检测 356

3.原位杂交的应用 356

4.探针的选择 357

5.标记物的选择 358

6.灵敏度 359

7.阴性对照 359

8.原位杂交的具体步骤 360

9.致谢 363

参考文献 363

附录 365

A1常规试剂 365

A2专门项目供应 367