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绪论 1

第一章 核酸化学组分的结构和性质 4

一、核酸的一般化学组分 4

二、糖环的折叠形式 4

1．信封式 5

2．扭转式 5

三、核苷的顺反构象 6

四、核酸的修饰组分 8

3．含有C-C糖苷健的核苷 9

2．含有修饰核糖的核苷 9

1．含有修饰碱基的核苷 9

五、核酸及其组分的化学反应 16

1．水解反应 16

2．β-消除反应 17

3．肼解反应 19

4．与羟胺的反应 19

5．亲电取代反应 20

6．加成反应 20

7．脱氨反应 21

8．与甲基氢氧化汞和醛类的反应 21

9．核糖的氧化反应 22

六、核酸组分的分离鉴定 23

10．糖的脱水反应 23

参考文献 25

第二章 核酸的分离纯化 28

一、核酸在细胞中的存在状态、分布、含量及大小 28

二、分离纯化核酸时的注意事项 29

三、核酸的分离提取 31

1．破细胞 31

2．核蛋白的解聚和蛋白质的去除 32

3．核酸的沉淀 33

6．核酸制剂纯度的初步鉴定 34

4．其他杂质的去除 34

5．核酸制剂的保存 34

7．核酸分离提取实例 35

四、核酸的纯化 37

1．超离心 37

2．胶电泳 43

3．柱层析 56

4．体外重组DNA法 61

5．R-loop法 62

6．免疫法 62

参考文献 63

第三章 核酸工具酶 65

一、核酸水解酶 65

1．核酸酶 65

2．RNA酶 68

3．DNA酶 70

二、其他工具酶 74

1．磷酸单酯酶 74

2．多核苷酸磷酸化酶 75

5．大肠杆菌DNA聚合酶I和Klenow酶 76

4．末端脱氧核苷酸转移酶 76

3．T4多核苷酸激酶 76

6．T4 DNA聚合酶 77

7．大肠杆菌多聚（A）聚合酶 77

8．反转录酶 77

9．DNA连接酶 77

10．T4 RNA连接酶 78

11．DNA甲基化酶 78

参考文献 79

第四章 核酸的体外标记和DNA物理图谱的构建 81

一、核酸的体外标记 81

1．5＇-末端标记 82

2．3＇-末端标记 83

3．T4 DNA聚合酶合成标记的DNA 84

4．切口平移 85

5．随机引发的DNA标记 86

6．体外转录合成标记的RNA链 86

7．标记反应的检验和标记产物的分离 87

8．非放射性标记 88

二、DNA物理图谱的构建 89

1．部分酶解法 90

3．末端标记-部分酶解法 91

2．多酶降解法 91

4．Bal 31逐步降解法 92

5．重组粘性质粒限制性片段分析法 93

参考文献 93

第五章 DNA的结构 95

一、DNA的一级结构 96

1．Sanger的酶法——链末端终止法或双脱氧法 98

2．Maxam-Gilbert化学法 109

3．电子计算机在顺序分析中的应用 115

4．一级结构分析进展及其在核酸研究中的作用 115

1．双螺旋模型的依据 127

二、DNA的二级结构——双螺旋结构模型 127

2．双螺旋模型的特征 129

3．DNA二级结构的稳定因素 132

4．双螺旋结构的构象变异 135

5．左螺旋Z-DNA 138

三、DNA的三级结构 142

1．超螺旋 142

2．超螺旋状态的定量描述 143

3．DNA超螺旋的鉴定 144

4．拓扑异构酶 146

5．生物体内的超螺旋结构 149

四、变性与复性 153

1．变性 153

2．复性 158

3．分子杂交 161

参考文献 163

第六章 RNA的结构 165

一、RNA的一级结构分析 166

1．片段重叠法 166

2．直读法 172

1．tRNA 175

二、RNA的类型及结构 175

2．rRNA 184

3．rnRNA 197

参考文献 205

第七章 细胞小RNA、线粒体和叶绿体核酸、病毒核酸以及具有生物活性的核苷酸、寡核苷酸 207

一、细胞小RNA 207

1．真核生物细胞中的小RNA 207

2．原核生物细胞中的小RNA 211

二、线粒体核酸和叶绿体核酸 212

1．线粒体核酸 212

3．病毒感染的细胞中的小RNA 212

2．叶绿体核酸 217

三、病毒、类病毒和拟病毒核酸 220

1．病毒核酸 220

2．卫星病毒和卫星RNA 223

3．类病毒核酸 223

4．拟病毒核酸 225

四、具有生物活性的核苷酸和寡核苷酸 225

1．单核苷多磷酸类 225

2．二核苷多磷酸和寡核苷多磷酸类 226

参考文献 227

4．核苷酸衍生物 227

3．环核苷酸类 227

第八章 核酸的人工合成 229

一、核酸小片段的人工合成 229

1．化学合成 229

2．酶促合成 234

二、核酸大分子的人工合成 236

1．DNA连接酶催化合成核酸大分子 236

2．RNA连接酶催化合成核酸大分子 238

3．用DNA聚合酶和反转录酶催化合成核酸大分子 240

三、核酸人工合成的实际应用 240

4．制备限制性内切酶识别顺序的接头 241

5．研究核酸结构与功能 241

1．合成基因 241

3．制备聚合反应的引物 241

2．制备分子杂交用探针 241

6．基因定向突变 242

参考文献 242

第九章 DNA的体外重组 243

一、待克隆DNA片段的产生 244

1．限制性内切酶降解 244

4．人工合成DNA 245

2．机械剪切 245

3．合成cDNA 245

5．聚合酶链反应扩增特定的基因片段 246

二、克隆载体 248

1．质粒 248

2．λ噬菌体载体 249

3．粘性质粒 252

4．真核生物细胞的克隆载体 252

三、DNA分子的体外连接 253

1．粘性末端的连接 253

四、重组DNA分子转入受体细胞 254

五、重组子的选择和鉴定 254

2．平头末端的连接 254

3．加同聚物尾 254

1．遗传学方法 255

2．菌落（或噬菌斑）原位杂交法 255

3．免疫化学法 255

4．胶电泳鉴定 255

5．杂交阻抑翻译法和杂交释放翻译法 255

六、克隆基因的表达 257

参考文献 257