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第一部分　分子生物学技术的基础理论 1

第一章　核酸的分离制备 1

一、核酸分离制备的总原则 1

二、核酸提取的主要步骤 1

三、制备核酸时应注意的问题 1

四、核酸提取 2

五、核酸沉淀 3

六、核酸定量 4

七、核酸保存 4

一、蛋白质分离纯化的一般原则 5

第二章　蛋白质的分离纯化 5

二、蛋白质分离纯化的主要方法 6

三、蛋白质纯度鉴定与含量测定 9

第三章　电泳技术 10

一、基本原理 10

二、影响电泳迁移率的因素 10

三、核酸电泳的指示剂与染色剂 11

四、不同波长紫外线对EB-DNA复合物的影响 12

第四章　核酸分子杂交 13

一、基本原理 13

二、探针的种类 13

三、探针的标记方法 14

四、核酸分子杂交的基本方法 15

五、常见的放射性核素标记物的比较 16

第五章　放射自显影术 17

一、放射自显影术的基本原理 17

二、放射自显影的特点 17

三、放射自显影的应用 18

第六章　PCR技术 19

一、PCR技术的基本原理 19

二、PCR主要相关技术 19

三、PCR技术在医学中的主要应用 21

二、检测的基本过程 23

三、生物芯片的类型 23

第七章　简介生物芯片技术 23

一、基本概念 23

四、生物芯片技术在医学领域中的应用 25

第八章　流式细胞术 27

第一节　流式细胞术的基本原理 27

第二节　流式细胞仪的分类和基本构造 28

第三节　流式细胞仪的主要技术指标 38

第四节　流式细胞仪应用的技术要求 39

第五节　流式细胞仪在医学研究中的应用 46

实验一　细菌的培养与收集 51

第二部分　分子生物学实验的基本方法 51

实验二　质粒DNA的提取 54

实验三　人外周血白细胞DNA的提取 59

实验四　哺乳动物细胞基因组DNA的提取 62

实验五　真核细胞总RNA的制备 65

实验六　真核细胞mRNA的提取 70

实验七　核酸的定量 73

实验八　DNA的限制性内切酶消化法 76

实验九　琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 79

实验十　聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测DNA 81

实验十一　STR的检测方法 85

实验十二　低熔点琼脂糖凝胶回收DNA片段 88

实验十三　DNA分子的体外连接 90

实验十四　感受态细胞的制备及转化 93

实验十五　重组质粒的筛选 97

实验十六　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量 101

实验十七　等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 105

实验十八　Western印迹法检测表达蛋白 108

实验十九　免疫荧光法检测重组蛋白 114

实验二十　放射免疫沉淀法检测重组蛋白 117

实验二十一　RT-PCR-微孔板杂交-ELISA法检测基因表达 121

实验二十二　DNA片段的印迹杂交 125

实验二十三　RNA片段的印迹杂交 130

实验二十四　放射性核素32P随机引物延伸标记法 136

实验二十五　光敏生物素标记DNA法 139

实验二十六 地高辛标记DNA探针 141

实验二十七 乙型肝炎病毒的检测方法 143

实验二十八 RT-PCR法检测HCV RNA 148

实验二十九 PCR-SSCP分析 152

实验三十 apoE多态性分析 157

实验三十一 凋亡细胞梯状条带电泳 161

实验三十二 流式细胞术检测细胞周期及DNA倍体分析 164

附录一　分子生物学实验中常用参数及试剂的配制 167

一、常见的市售酸碱 167

第三部分　附录 167

二、常用的缓冲液 168

三、常用酶的配制 173

四、常用贮存液的配制 175

五、杂交实验中封闭剂的配制与用途 178

六、放射性核素数据 179

七、常用物理系数及分子量标准 180

八、细菌培养基和抗生素 183

九、中国汉族等位基因频率表 184

附录二　分子生物学的重要知识点 188

一、名词理解 188

二、简答题 196