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第一章 生物化学实验基本方法 1

第一节 实验室规则 1

第二节 基本实验操作 1

一、玻璃仪器的清洗 1

二、玻璃仪器的干燥 2

三、刻度吸管的使用 2

四、可调式微量移液器的使用 3

五、溶液的混匀 3

第三节 常用实验仪器的使用 4

一、LD5-2A离心机的使用 4

二、722型分光光度计的使用方法 4

三、752紫外光栅分光光度计的使用方法 5

二、尿液样本的收集与保存 6

一、血液样本的收集与保存 6

第四节 常用实验标本的制备 6

三、组织样品的制备 7

第五节 实验报告的书写 9

第二章 生物化学基本实验技术 10

第一节 分光光度技术 10

一、基本原理 10

二、分光光度计的结构 12

三、分光光度技术的应用 13

第二节 电泳技术 14

一、基本原理 14

二、电泳技术的分类和特点 16

三、影响电泳的因素 16

四、常用电泳技术 17

一、基本原理 19

第三节 层析技术 19

二、层析法的分类 20

三、离子交换层析 21

四、凝胶层析 25

五、亲和层析 31

六、高效液相色谱 35

七、分配层析 36

第四节 离心技术 39

一、基本原理 39

二、离心机的类型 40

三、制备性超速离心的分离方法 41

四、离心操作的注意事项 43

第五节 透析技术 43

一、透析原理及影响因素 43

三、透析操作及注意事项 44

二、透析技术的应用 44

第三章 分子生物学基本技术原理 46

第一节 核酸分子杂交 46

一、核酸分子杂交的基本理论 46

二、核酸探针 47

三、核酸探针的标记 48

四、核酸分子杂交的种类与方法 50

第二节 DNA克隆技术基本原理 53

一、获取目的基因 53

二、构建基因载体 54

三、限制性核酸内切酶的作用 56

四、DNA分子重组 56

五、重组DNA分子导入宿主细胞 57

七、克隆基因的表达 58

六、阳性重组体的筛选和鉴定 58

第三节 聚合酶链反应（PCR） 59

一、基本原理与方法 59

二、PCR技术的应用 61

第四章 基本教学实验 63

实验一 蛋白质的沉淀、变性及等电点的测定 63

一、蛋白质的沉淀与变性 63

二、蛋白质沉淀反应的分类 63

三、沉淀蛋白质的主要方法 63

四、蛋白质等电点的测定 66

实验二 几种理化因素对酶活性的影响 67

实验三 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 69

实验四 运动对尿中乳酸含量的影响 71

实验五 酮体的生成和利用 73

实验六 血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（赖氏法） 75

第五章 基本技术实验 78

实验七 蛋白质的透析 78

实验八 蛋白质的定量测定（一）：酚试剂法（改良Lowry法） 79

实验九 蛋白质的定量测定（二）：紫外分光光度法 82

实验十 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 83

实验十一 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 86

实验十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子质量 88

实验十三 离子交换层析法分离氨基酸 92

实验十四 血清HDL-胆固醇的测定 94

实验十五 胡萝卜素的柱层析分离 95

实验十六 细胞核的分离与纯化 97

实验十七 激素对血糖浓度的影响 101

一、血糖的定量测定 101

第六章 综合实验 101

二、胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 103

实验十八 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定 105

实验十九 核酸的制备及测定 108

第七章 分子克隆技术基础实验 113

实验二十 DNA的琼脂糖凝胶电泳 113

实验二十一 质粒DNA的提取（碱裂解法） 114

实验二十二 限制性内切酶对质粒DNA的酶切作用 116

实验二十三 感受态细菌的制备及质粒DNA的转化 118

实验二十四 核酸的分子杂交 119

实验二十五 聚合酶链反应（PCR）体外扩增DNA 121

二、试剂配制的一般注意事项 124

一、一般化学试剂的分级 124

附录Ⅰ 化学试剂分级及注意事项 124

附录 生物化学与分子生物学常用资料 124

附录Ⅱ 常用缓冲液配制表 125

附录Ⅲ 分子生物学实验中常用试剂的配制 127

一、有机试剂的配制 127

二、细菌培养基和抗生素的配制 127

三、分子生物学实验中常用缓冲液的配制 128

四、常用电泳缓冲液的配制 129

五、常用凝胶加样缓冲液的配制 129

六、常用限制性内切酶的酶切位点及其缓冲液的配制 130

附录Ⅳ 溴化乙锭稀溶液（如含有0.5μg/ml的电泳缓冲液）的净化处理 130

附录Ⅴ 细菌的保存 130

附录Ⅵ 重铬酸洗液的配制与再生 131

附录Ⅶ 常用的生物化学与分子生物学相关网站 131

参考文献 133