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1 昆虫细胞培养 1

1．1 昆虫细胞培养的基础知识 2

1．1．1 细胞培养的一些基本概念 2

1．1．2 细胞的形态 4

1．1．3 细胞生长和增殖过程及其特点 6

1．2 昆虫细胞培养基与平衡盐溶液 10

1．2．1 平衡盐溶液 10

1．2．2 培养基 11

1．3 昆虫细胞培养基本技术 29

1．3．1 基本操作技术 29

1．3．2 原代培养 32

1．3．3 传代培养 35

1．3．4 细胞的冻存与复苏 38

1．3．5 影响昆虫细胞增殖的环境因素 40

1．4 昆虫细胞培养常规研究方法 42

1．4．1 细胞形态观察 42

1．4．2 细胞生长的动力学研究 43

1．4．3 细胞活力测定 45

1．4．4 细胞的克隆 46

1．4．5 细胞染色体分析 48

1．4．6 细胞的同工酶测定 50

1．4．7 DNA分子标记技术 53

1．5 常用的昆虫细胞系及其特性 56

1．5．1 昆虫细胞系的命名 56

1．5．2 常用的昆虫细胞系及其特性 58

1．5．3 我国建立的昆虫细胞系 61

主要参考文献 64

2 昆虫细胞系的生理与发育能力 70

2．1 细胞的内分泌 70

2．1．1 蜕皮甾类激素的合成和代谢 70

2．1．2 蜕皮甾类激素的作用 72

2．2 形态发生 79

2．2．1 形态的调节 79

2．2．2 发育因子来源的细胞系 82

主要参考文献 82

3 昆虫神经细胞的离体培养及其应用 86

3．1 昆虫神经细胞培养 86

3．1．1 昆虫神经细胞培养方法 87

3．1．2 离体培养神经细胞的类型和细胞形态 87

3．2 神经细胞的生理学 90

3．2．1 昆虫器官培养——脑与神经分泌 90

3．2．2 离子通道与离子电流 93

3．3 神经系统发育生物学 97

3．3．1 神经的发生与分化 97

3．3．2 神经递质表型的发育 99

3．3．3 突触的发生 100

3．3．4 轴突生长 101

3．3．5 神经胶质细胞的培养与作用 102

3．4 神经细胞受体的药理学 104

3．5 神经细胞与靶细胞的共培养及其相互作用 106

主要参考文献 108

4 离体昆虫细胞对胁迫因子的抗性 114

4．1 昆虫细胞对X射线和γ射线的抗性 115

4．1．1 昆虫细胞的相对抗性 115

4．1．2 DNA的修复 116

4．1．3 细胞的恢复及其过程 121

4．2 昆虫细胞对紫外线的抗性 126

4．2．1 昆虫细胞的相对抗性 126

4．2．2 DNA的修复 127

4．2．3 细胞的恢复及其过程 128

4．3 昆虫细胞对化学因子的抗性 129

4．3．1 昆虫细胞的相对抗性 129

4．3．2 DNA的修复 130

4．3．3 细胞的恢复及其过程 130

4．4 昆虫细胞对热的抗性 131

4．4．1 昆虫细胞的相对抗性 131

4．4．2 细胞恢复过程 132

4．4．3 分子恢复过程 133

4．5 胁迫敏感突变体细胞 134

4．5．1 突变体细胞的分离 134

4．5．2 胁迫敏感突变体细胞的特性 134

主要参考文献 135

5 杆状病毒表达载体介导外源基因在昆虫细胞中的表达 138

5．1 杆状病毒及其基因组 138

5．1．1 杆状病毒的分类及其生物学特征 138

5．1．2 杆状病毒的基因组及基因 141

5．1．3 杆状病毒基因表达 143

5．2 杆状病毒表达载体系统 145

5．2．1 杆状病毒表达载体的特性 145

5．2．2 重组杆状病毒的构建原理 146

5．2．3 转移栽体 147

5．2．4 插入重组杆状病毒中的外源基因 148

5．2．5 用于驱动外源基因表达的启动子 148

5．3 重组杆状病毒的构建方法 149

5．3．1 转移栽体的构建 149

5．3．2 转移栽体与病毒共转染 152

5．3．3 重组病毒的分离、筛选与鉴定 155

5．4 杆状病毒表达载体的应用 156

5．4．1 外源蛋白的高效袁达 156

5．4．2 基于杆状病毒表达栽体的重组病毒杀虫剂 160

5．4．3 基于杆状病毒载体的基因治疗 166

主要参考文献 172

6 从昆虫细胞诱导抗菌肽 176

6．1 抗菌肽及其类型 177

6．1．1 天蚕素类 177

6．1．2 昆虫防御素 178

6．1．3 富含脯氨酸的抗茵肽 178

6．1．4 富含甘氨酸的抗茵肽 179

6．2 抗菌肽的功能及作用方式 179

6．2．1 抗茵肽的功能 179

6．2．2 抗茵肽作用机制 185

6．3 抗菌肽的基因及其表达 191

6．3．1 抗茵肽的基因和基因组织 192

6．3．2 抗茵肽基因的表达与调控 196

6．4 利用昆虫离体细胞诱导抗菌肽 200

6．4．1 昆虫细胞与表达抗茵肽 200

6．4．2 昆虫细胞抗茵肽诱导和分离 205

主要参考文献 210

7 昆虫细胞在病毒研究中的应用 216

7．1 昆虫细胞对病毒的敏感性 216

7．2 病毒的离体复制 219

7．2．1 核型多角体病毒的离体复制 219

7．2．2 颗粒体病毒的离体复制 225

7．2．3 质型多角体病毒的离体复制 230

7．2．4 其他病毒的离体复制 233

7．3 病毒基因的表达与调控 237

7．3．1 杆状病毒基因的表达 237

7．3．2 杆状病毒基因表达的细胞因子 240

7．4 病毒与宿主细胞的相互关系研究 244

7．4．1 病毒诱导细胞凋亡 244

7．4．2 病毒复制与细胞周期 256

7．4．3 病毒复制与细胞骨架 259

主要参考文献 265

8 昆虫细胞大规模培养及其应用 271

8．1 昆虫细胞和表达载体的选择 271

8．2 昆虫细胞代谢 276

8．3 昆虫细胞大规模培养方法与大规模培养 279

8．3．1 滚瓶培养 279

8．3．2 昆虫细胞的微载体及其他固定化培养 280

8．3．3 转瓶培养 284

8．3．4 摇瓶培养 287

8．3．5 生物反应器培养 288

8．3．6 影响昆虫细胞增殖的理化因素 297

8．4 昆虫细胞大规模培养的应用 307

8．4．1 外源蛋白的生产 307

8．4．2 病毒的生产 316

主要参考文献 319

9 昆虫细胞在苏云金杆菌毒素研究中的应用 326

9．1 苏云金杆菌毒素 326

9．1．1 苏云金杆菌毒素及其性质 326

9．1．2 昆虫细胞对苏云金杆茵毒素的敏感性 330

9．2 苏云金杆菌毒素的细胞病理研究 335

9．2．1 鳞翅目昆虫细胞 336

9．2．2 双翅目昆虫细胞 339

9．3 苏云金杆菌毒素作用机制 341

9．4 利用昆虫细胞研究苏云金杆菌抗性 349

9．4．1 昆虫对苏云金杆菌的抗性 349

9．4．2 抗性细胞的建立和筛选 350

9．4．3 抗性成因和机制 355

9．5 基于昆虫细胞的苏云金杆菌毒素测定技术 364

9．5．1 草坪测定 364

9．5．2 Bt杀虫剂的离体细胞生物测定 366

主要参考文献 369