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目 录 1

第一部分概述 1

第二部分 常用生物化学实验基本理论 8

第一章 比色分析法及分光光度法 8

第一节 比色分析法和分光光度法的原理 9

第二节荧光光谱分析法 14

第二章几种常用的生物大分子实验技术 16

第一节沉淀法 16

第二节透析和超滤 19

第三节浓缩和干燥 20

第四节离心技术 22

第三章电泳技术 25

第一节电泳基本原理 25

第二节影响电泳迁移率的因素 26

第三节电泳时电流维持机理 28

第四节常用电泳简介 28

第一节基础知识 37

第四章层析技术 37

第二节分配层析 38

第三节离子交换层析 40

第四节凝胶层析 41

第五节亲和层析 44

第六节吸附层析 45

第五章酶联免疫吸附测定技术 46

第一节基本原理及方法类型 46

第二节操作条件 48

第三节制备酶标记物的方法 49

第六章PCR技术 51

第一节PCR技术简介 51

第二节PCR基本原理 52

第三节PCR技术特点及问题解决 54

第四节PCR技术在医学上的应用 55

第五节PCR技术的发展 57

第三部分实验 61

实验一血红蛋白的吸收光谱及其含量测定 61

实验二蛋白质的比色分析法（双缩脲法、酚试剂法） 63

实验三紫外分光光度法测定蛋白质 66

实验四单底物酶促反应Km测定 68

实验五血清谷丙转氨酶活性测定（赖氏比色法） 70

实验六血糖的含量测定 72

实验七紫外分光光度法对核酸定量和质量检测 76

实验八RNase抑制法抽提分离总RNA 77

实验九酵母RNA的提取 79

实验十核酸的定量测定（定磷法） 80

实验十一肝脏中DNA的提取 82

实验十二DNA含量测定（改良二苯胺法） 84

实验十三RNA的测定（苔黑酚法Orcinol） 86

实验十四质粒DNA的提取 88

实验十五质粒的酶切与鉴定 92

实验十六醋酸纤维素薄膜电泳 95

实验十七 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离血清蛋白质 98

实验十八SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子量 100

实验十九血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 103

实验二十IEF/SDS—PAGE双向电泳分离血清蛋白质 105

实验二十一乳酸脱氢酶同工酶的分离 109

实验二十二胡萝卜素的吸附层析 111

实验二十三DEAE—纤维素离子交换层析法分离血清蛋白质 112

实验二十四亲和层析法纯化尿激酶 114

实验二十五细胞色素C的制备与纯化 116

实验二十六酶联免疫吸附测定法测定血清r－球蛋白 119

实验二十七PCR法检测淋球菌 121

实验二十八组织过氧化脂质定量测定 123

实验二十九牛血铜锌超氧化物歧化酶（CuZn—SOD）分离提纯与活性测定 125

实验三十超氧化物歧化酶蛋白含量和活性测定 127

第四部分 附录 129

附录一实验室安全及防护知识 129

附录二玻璃仪器的洗涤及洗涤液的配制 131

附录三生物化学实验样品的制备 133

附录四生物化学实验中常用仪器的使用 135

附录五化学试剂的规格与保管 143

附录六常用缓冲溶液的配制方法 144

附录七标准缓冲溶液的配制方法 148

附录八离心机转数ω（r/min）与相对离心力RCF的换算 149