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第一编 概述 2

第一章 生命大分子物质的制备 2

第一节 材料的选择与处理 2

一、材料的选择 2

二、材料的处理 3

第二节 测定方法的确立 4

一、目的与要求 4

二、常用的测定方法 4

第三节 细胞破碎 7

一、机械破碎 7

二、溶胀和自溶 8

三、化学处理 8

四、生物酶降解 8

第四节 抽提 9

一、抽提的含义 9

二、抽提有效成分的影响因子 9

第五节 浓缩 12

一、沉淀法 12

二、吸附法 12

三、超过滤法 12

四、透析法 13

五、离心法 13

六、干燥法 13

第六节 纯化方案的设计与评价 14

一、纯化方案的设计 14

二、纯化方案的评价 15

第七节 有效成分纯度和性质的分析 16

第八节 应用实例 16

一、高纯度人转铁蛋白的制备 16

二、叶绿体的提取与4.5S RNA的制备 16

三、细菌质粒DNA的提取 17

思考题 17

参考文献 17

第二编 纯化方法 20

第二章 沉淀法 20

第一节 基本原理与沉淀类型 20

一、基本原理 20

二、制备蛋白质 20

三、制备核酸 29

第二节 应用实例 32

一、脾磷酸二酯酶的纯化 32

二、细菌染色体DNA的制备 32

三、蔗糖酶的初步纯化 33

思考题 33

参考文献 34

第三章 吸附层析 35

第一节 吸附柱层析 36

一、常用术语 36

二、基本原理 37

三、吸附剂 38

四、洗脱液 41

五、层析柱的制备与层析操作 41

六、应用与实例 43

第二节 薄层层析 45

一、操作及注意事项 46

二、应用实例 51

第三节 聚酰胺薄膜层析 52

一、基本原理 52

二、应用实例 53

思考题 56

参考文献 57

第四章 疏水层析 58

第一节 基本原理 58

一、疏水作用 58

二、吸附剂 59

第二节 操作与应用 59

一、层析柱的制备 59

二、加样与洗脱 60

三、应用实例 60

思考题 62

参考文献 62

第五章 离子交换层析 63

第一节 基本原理 63

第二节 离子交换剂的分类及性质 65

一、分类 65

二、性质 71

第三节 离子交换剂与缓冲液的选择 78

一、离子交换剂的选择 78

二、缓冲液的选择 79

三、加样量的确定 82

第四节 操作 82

一、离子交换剂的处理、再生和转型 82

二、分离物质的交换 83

三、物质的洗脱与收集 84

第五节 应用 86

一、制备、纯化生命物质 86

二、测定蛋白质的等电点 89

思考题 89

参考文献 90

第六章 凝胶过滤 91

第一节 凝胶的分类及性质 91

一、葡聚糖凝胶 92

二、琼脂糖凝胶 94

三、聚丙烯酰胺凝胶 95

四、Sephacryl 96

五、Superdex 97

第二节 基本原理 97

第三节 操作 100

一、凝胶的选择和处理 100

二、凝胶柱的制备 101

三、加样与洗脱 102

四、凝胶柱的再生及保存 106

第四节 应用 106

一、脱盐和浓缩 106

二、分离生命物质 107

三、去除热源物质 108

四、测定分子质量 108

五、其他 111

思考题 111

参考文献 111

第七章 亲和层析 112

第一节 基本原理 112

第二节 操作 114

一、载体的选择 114

二、配体的选择 115

三、亲和吸附剂的制备 116

四、特异性吸附 118

五、分离大分子物质 120

六、亲和层析柱的再生 121

第三节 提高吸附剂的操作容量 121

一、在配体和载体间引入“手臂” 121

二、增加配体取代的程度 123

三、配体与载体衍生物以最少的键连接 123

四、载体多孔性的影响 123

五、其他 124

第四节 应用实例 124

一、纯化大分子物质 124

二、研究酶的结构与功能 127

三、实例 128

思考题 131

参考文献 131

第八章 聚焦层析 132

第一节 基本原理 132

一、多缓冲剂和多缓冲交换剂 132

二、聚焦层析原理 133

第二节 操作 136

一、多缓冲剂的选择 136

二、多缓冲交换剂用量的确定 136

三、多缓冲交换剂的处理 137

四、样品的准备 137

五、加样和洗脱 137

六、样品中多缓冲剂的去除 138

第三节 应用 138

一、分离模型蛋白质 138

二、分离复杂物质 139

三、鉴定某些酶的性质 140

思考题 141

参考文献 141

第九章 高效液相色谱 142

第一节 基本原理 143

一、高效液相色谱仪 143

二、固定相 145

第二节 反相高效液相色谱 148

一、固定相、流动相和色谱柱 149

二、纯化糖基化白蛋白肽片段 151

第三节 应用 153

一、定性和定量分析 153

二、测定酶活性 154

三、测定蛋白质分子质量 154

四、分离核酸和蛋白质 155

思考题 160

参考文献 160

第十章 固定化的酶与微生物 161

第一节 制备方法 162

一、固定化酶 162

二、固定化微生物 165

三、生物传感器 166

第二节 制品的性质 167

一、酶的相对活性 167

二、活性曲线与最适pH 168

三、稳定性 169

四、米氏常数 170

五、其他 170

第三节 应用实例 171

一、工业方面 171

二、医学方面 174

三、生化分析方面 175

四、应用实例 177

思考题 179

参考文献 179

第三编 鉴定方法 182

第十一章 标记 182

第一节 核酸标记 182

一、基本原理 182

二、标记方法 183

第二节 蛋白质标记 189

一、机制 190

二、类型 190

三、标记物制备 191

第三节 标记物的纯化与鉴定 195

一、标记物纯化 196

二、探针的鉴定 197

第四节 应用实例 201

一、cDNA组学和蛋白质组学 201

二、激酶的磷酸化和脱磷酸化 205

三、蛋白质半衰期的测定 206

思考题 207

参考文献 207

第十二章 重组DNA 208

第一节 重组DNA的部件 208

一、工具酶 208

二、载体 211

三、目的基因 213

第二节 重组 218

一、黏性末端连接法 219

二、平端连接法 220

三、平黏连接法 221

四、T-A连接法 221

五、同聚物加尾连接法 221

六、人工接头连接法 221

第三节 DNA扩增 223

一、重组DNA导入宿主细胞 223

二、重组子的筛选与鉴定 225

三、表达产物的纯化 227

第四节 应用实例 227

一、分离总RNA和mRNA 228

二、反转录合成第一链cDNA 228

三、PCR扩增及其产物纯化 228

四、PCR产物的克隆 229

五、重组质粒的提取及分析 229

思考题 230

参考文献 230

第十三章 DNA序列测定 231

第一节 双脱氧链终止法 231

一、基本原理 231

二、载体系统 232

三、测序试剂 236

四、测序操作 238

五、变性电泳 241

六、序列读取 242

第二节 PCR法 242

一、直接测序 243

二、循环测序 244

三、应用实例 245

第三节 化学降解法 246

一、测序原理 246

二、具体操作 247

第四节 新一代测序法 250

一、第二代测序法 250

二、第三代测序法 252

思考题 253

参考文献 253

第十四章 生物芯片 254

第一节 基因芯片 254

一、基本原理和工作流程 254

二、制备及操作 257

三、应用实例 262

第二节 蛋白质芯片 267

一、原理及特点 267

二、制备与操作 268

三、应用实例 270

第三节 芯片实验室 273

一、结构与制作 273

二、应用实例 276

思考题 282

参考文献 282

第十五章 聚合酶链反应 283

第一节 基本原理及操作系统 283

一、扩增DNA 283

二、扩增RNA 290

第二节 PCR的类型 294

一、普通PCR 294

二、原位PCR 295

三、反转录PCR 295

四、反向PCR 295

五、不对称PCR 296

六、巢式PCR 296

七、彩色PCR 297

第三节 应用 297

一、筛选目的基因 297

二、直接测序 297

三、标记DNA探针 298

四、寻找新基因 298

五、检测血液和组织成分 298

六、检测环境中的致病菌与指示菌 298

思考题 299

参考文献 299

第十六章 电泳 300

第一节 基本原理 301

一、泳动度概念 301

二、影响泳动度的因子 302

第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 303

一、基本原理 303

二、不连续垂直板状和柱状凝胶电泳 309

三、连续的垂直板凝胶的电泳 319

四、线性和阶梯式梯度的板状凝胶电泳 320

五、双向电泳 322

第三节 琼脂糖凝胶电泳 323

一、缓冲液的配制 324

二、琼脂糖胶板的制备 324

三、加样和电泳 325

四、观察 325

第四节 应用 325

一、测定分子质量 326

二、测定蛋白质等电点 328

三、鉴定微量物质 333

四、诊断疾病（转移电泳） 336

思考题 339

参考文献 339

第十七章 免疫分析 340

第一节 抗体的性质、制备及纯化 340

一、抗体的性质 340

二、多克隆抗体的制备 341

三、单克隆抗体的制备 346

四、抗体的检测 350

五、抗体的纯化 352

第二节 抗原抗体反应与应用 354

一、凝集反应 354

二、免疫扩散 357

三、免疫电泳 359

四、固相免疫吸附（含ELISA） 363

五、免疫微球测定 370

思考题 372

参考文献 373

第十八章 气相色谱 374

第一节 基本原理 374

一、常用术语 374

二、塔板与速率理论 376

第二节 气相色谱仪的构造 379

一、载气流速的控制和测量 380

二、进样系统 380

三、恒温室 380

四、色谱柱 380

五、检定器 384

第三节 操作 385

一、操作要点 385

二、条件的选择 386

第四节 定性和定量检测 386

一、定性检测 386

二、定量检测 387

第五节 应用 390

一、分析蛋白质和氨基酸 390

二、分析核酸 391

三、分析糖类物质 391

四、分析脂肪酸 392

五、分析农药 392

思考题 392

参考文献 392

第十九章 分光光度法 393

第一节 基本原理 393

一、光谱 393

二、物质结构与光谱的关系 394

三、光吸收的基本规律——比尔-朗伯定律 396

第二节 分光光度计的结构及类型 397

一、主要结构 397

二、类型 400

第三节 应用 402

一、定性分析 402

二、含量测定 404

三、参数测定 409

四、物质结构的分析 410

思考题 410

参考文献 411

第二十章 离心法 412

第一节 基本原理 412

一、沉降现象 412

二、离心力 413

三、离心法 413

四、沉降系数 415

第二节 离心机的类型及构造 416

一、制备型离心机 416

二、分析型离心机 419

第三节 应用 419

一、离心机的操作概述 419

二、应用实例 421

三、测定沉降系数 423

四、分离纯化生命物质 424

思考题 424

参考文献 425

参考文献 426

附录 435

中英文缩写词 448