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第一章　绪论 1

一、生化分离技术发展的历史和地位 1

二、生化分离技术的研究范畴 2

三、生化分离技术的应用及发展趋势 5

思考题 7

参考文献 7

第二章　生物样品的预处理 8

第一节　概述 8

第二节　动植物材料预处理 8

一、植物组织提取物的制备 8

二、动物组织提取物的制备 12

三、细菌中重组蛋白的提取制备 13

第三节　细胞的破碎与分离 16

一、概述 16

二、常用的几种破碎方法 16

三、细胞破碎技术研究的发展方向 21

第四节　沉淀技术 21

一、概述 21

二、沉淀方法 22

第五节　预处理技术实例 32

一、纳米级微生物细胞破碎原理及实例 32

二、β-环糊精共沉淀分离法 33

三、壳聚糖沉淀分离法 33

思考题 33

参考文献 34

第三章　膜分离技术 35

第一节　概述 35

一、发展史 35

二、作用及存在问题 35

三、分类和定义 36

第二节　技术原理 39

一、压力特征 39

二、浓差极化 40

三、膜分离理论 41

四、膜的截留能力 41

五、膜的污染 42

六、膜组件的选择 43

七、膜的选择及使用 43

第三节　微滤技术 45

一、概述 45

二、膜的分类 45

三、膜的特点和分离机理 46

四、膜的污染和清洗 47

第四节　超滤技术 47

一、概述 47

二、原理 48

三、问题及解决措施 48

四、膜的改性 48

第五节　纳滤技术 49

一、概述 49

二、分离机理 50

三、纳滤膜 51

第六节　超-微滤操作技术 51

一、预处理 51

二、膜的操作 52

三、膜的清洗和膜性能的再生 55

第七节　膜分离技术的应用 56

一、微滤技术应用 56

二、超滤技术应用 57

三、纳滤技术应用 59

思考题 60

参考文献 60

第四章　色谱分离技术 62

第一节　概述 62

一、色谱的基本概念 62

二、色谱法的分类 63

第二节　吸附色谱简介 64

一、吸附色谱影响因素 64

二、羟基磷灰石色谱方法介绍 65

第三节　凝胶过滤色谱 67

一、凝胶过滤色谱原理 68

二、凝胶过滤色谱介质 70

三、凝胶过滤色谱实验技术 78

四、凝胶过滤色谱的应用 83

第四节　离子交换色谱 84

一、离子交换色谱相关理论 85

二、离子交换色谱介质（离子交换剂） 89

三、离子交换色谱实验技术 96

四、离子交换色谱的应用 109

第五节　亲和色谱 110

一、基本原理 110

二、亲和色谱配体 111

三、亲和吸附剂 112

四、亲和色谱实验技术 119

五、亲和色谱的特殊类型 122

六、亲和色谱的应用 132

第六节　反相色谱 134

一、反相色谱原理 135

二、反相色谱介质 138

三、反相色谱流动相 141

四、反相色谱实验技术 144

五、反相色谱的应用 148

第七节　疏水作用色谱 150

一、疏水作用色谱基本原理 150

二、疏水作用色谱介质 153

三、疏水作用色谱实验技术 155

四、疏水作用色谱的应用 158

第八节　色谱聚焦简介 159

一、机制简介 160

二、多组分缓冲剂与多缓冲离子交换剂 162

三、实验要点 163

思考题 165

参考文献 166

第五章　电泳技术 168

第一节　概述 168

一、基本原理 168

二、凝胶支持介质 170

三、检测方法 171

四、电泳仪器 172

第二节　天然聚丙烯酰胺凝胶电泳 173

一、基本原理 173

二、天然聚丙烯酰胺凝胶电泳的类型 174

三、影响分离效果的因素 174

四、蛋白质分子量的测定 176

五、天然聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法 176

六、天然聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用范围 180

第三节　十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 180

一、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离原理 180

二、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的类型 181

三、影响分离效果的因素 181

四、蛋白质亚基分子量的测定 182

五、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法 182

六、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用范围 183

第四节　等电聚焦 184

一、原理 184

二、载体两性电解质和pH梯度的形成 185

三、载体两性电解质等电聚焦方法 186

四、固相pH梯度介质及其pH梯度的形成 189

五、固相pH梯度等电聚焦方法 191

六、等电聚焦系统的选择 192

七、等电聚焦的应用范围 193

第五节　双向电泳 193

一、样品制备 193

二、等电聚焦 193

三、缓冲液置换 195

四、梯度十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 195

五、检测 196

六、蛋白质图谱分析 196

七、应用 196

第六节　免疫电泳 196

一、原理 196

二、免疫电泳类型 196

三、免疫电泳技术 198

四、电泳方法 199

五、应用 200

第七节　蛋白质印迹 200

一、原理 200

二、试验材料的选择 202

三、蛋白质印迹试验方法 203

四、应用 204

第八节　毛细管电泳 205

一、原理 205

二、毛细管电泳的主要类型 206

三、毛细管电泳仪 208

四、影响毛细管电泳分离的主要因素 209

五、毛细管电泳过程 210

六、毛细管电泳的应用 210

思考题 210

参考文献 211

第六章　其他分离技术 212

第一节　离心分离技术 212

一、概述 212

二、基本原理和计算 219

三、超离心技术 225

第二节　泡沫分离技术 229

一、分类 229

二、基本原理 230

三、操作方式及其影响因素 231

四、泡沫分离的应用 233

第三节　膜分离集成技术 234

一、概述 234

二、原理和特点 234

三、膜色谱介质材料及其组件 236

四、膜色谱的制备 237

五、膜色谱的应用 238

第四节　模拟移动床简介 240

一、概述 240

二、工作原理 240

三、模拟移动床模型 241

四、模拟移动床的应用 242

思考题 242

参考文献 243

第七章　分离方案的设计 244

第一节　概述 244

第二节　分离的主要流程 245

一、建立分析方法 245

二、提取材料选择 246

三、提取方法选择 246

四、分离纯化方法的探索 248

五、均一性的鉴定 248

第三节　分离技术的选择和组合 248

一、单元分离技术的选择 248

二、融合技术或称集成分离技术 249

三、分离技术组合方案的选择原则 253

第四节　典型生物分子分离实例分析 254

一、蛋白质（酶）的分离纯化与鉴定 254

二、核酸的分离纯化与鉴定 261

三、多糖的分离纯化与鉴定 265

四、小分子物质的分离与鉴定 268

思考题 273

参考文献 274

附录　生化分离实验部分 275

系列实验1　凝胶色谱法测定蛋白质相对分子质量 275

一、实验目的 275

二、实验原理 275

三、实验器材和试剂 275

四、实验操作 276

五、实验结果分析与处理 277

系列实验2　酵母蔗糖酶的提取与纯化 278

一、实验目的 278

二、实验过程 278