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第一篇 基本实验技能与操作技术 1

第一章 实验室基本知识 1

一、实验室安全 1

二、化学药品、试剂的存储及使用 2

三、废品的销毁 2

四、无菌室要求 3

五、实验记录和报告 3

第二章 制药基本操作技术 4

第一节 生物药物的基因工程技术 4

一、基因工程工具酶 4

二、基因工程的载体 6

三、目的基因的制备 7

四、目的基因与载体的连接 8

五、重组DNA导入受体细胞 8

六、重组体的检测 9

七、克隆基因的表达 9

第二节 生物制药常用仪器及其操作技术 10

一、常用仪器简介 10

二、实验室常用器材的处理与消毒灭菌 16

第三节 化学合成基本操作技术 18

一、常用的实验仪器 18

二、合成反应常用装置 20

三、化合物的分离和提纯常用方法 23

四、化合物的物理常数测定常用方法 31

第四节 天然药物提取与分离技术 34

一、常用提取技术 34

二、常用分离技术 36

第三章 药物分析操作技术 40

第一节 化学分析法 40

第二节 紫外、可见分光光度法 40

一、显色与操作条件的选择 40

二、紫外-可见分光光度法的应用 42

三、使用方法 43

第三节 原子吸收分光光度法 43

一、原子吸收分光光度计测定条件的选择 43

二、定量方法 44

三、应用 45

第四节 荧光分析法 45

第五节 红外光谱法 45

一、样品的制备 45

二、定性分析 46

三、定量分析 47

第六节 层析技术 48

一、概述 48

二、常用层析技术 49

三、色谱柱填充 52

第七节 薄层层析 53

一、吸附剂和支持剂 54

二、展开剂 55

三、薄层板的制作 55

四、薄层层析操作 55

五、薄层层析的定性与定量分析 55

六、薄层层析的应用 56

第八节 高效液相色谱 56

一、高效液相色谱法的分离依据 56

二、高效液相色谱系统 56

三、样品制备方法 57

四、高效液相色谱的定性定量分析 58

五、高效液相色谱在医药方面的应用 59

第四章 细胞培养基本技术 60

第一节 细胞培养的无菌操作 60

一、培养用品的清洗和消毒灭菌 60

二、无菌操作的基本要领和要求 60

三、细胞培养用液 61

第二节 细胞培养技术 62

一、细胞的冻存方法 63

二、细胞的复苏 63

三、传代细胞的传代培养 63

四、细胞的计数方法 64

五、生长曲线的测定 65

六、单层培养细胞的生长过程观察 65

第三节 酶细胞化学技术 66

一、碱性磷酸酶Gomori钙钴法的实验方法 66

二、酸性磷酸酶Gomori硝酸铅改良法 67

第四节 免疫细胞化学技术 67

第五章 药理学基本实验技能 70

第一节 Pclab-UE/US软件使用和常用手术器材 70

一、Pclab-UE/US软件使用 70

二、常用手术器械 73

第二节 常用实验动物 74

一、动物选择 74

二、常用实验动物的捉持方法 74

三、常用实验动物的给药方法 75

第三节 常用溶液配制 84

一、常用生理盐溶液的成分及配制量 84

二、常用抗凝剂的浓度 85

第六章 制剂学基本操作技术 86

第一节 制剂基本技术 86

一、制剂前处理过程的基本技术 86

二、制剂成型技术 90

第二节 制剂的基本要求 97

第二篇 基础实验内容 99

第七章 制药技术 99

第一节 生物化学与分子生物学 99

实验一 总糖和还原糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法） 99

实验二 粗脂肪的提取和测定 101

实验三 血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法） 102

实验四 蛋白质的两性反应和等电点的测定 103

实验五 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳及定量分析 105

实验六 蔗糖酶米氏常数的测定 108

实验七DNA提取及浓度和纯度测定 110

实验八 酵母核糖核酸的提取及组分鉴定 112

实验九 牛血清白蛋白的分离纯化及鉴定 113

实验十 聚合酶链式反应扩增DNA 118

实验十一 质粒DNA的转化 121

实验十二 小量质粒DNA的提取 123

实验十三 大量质粒DNA的制备 125

实验十四 质粒DNA的限制性内切酶酶切分析 127

实验十五 质粒DNA的提取、酶切与鉴定 128

第二节 微生物学 132

实验一 放线菌的形态观察及一般染色 132

实验二 细菌的革兰染色 133

实验三 真核微生物细胞的形态观察 135

实验四 细菌的生理生化实验 138

实验五 物理化学因素对微生物的影响 142

实验六 水中大肠菌群的检测 143

实验七 土壤样品中微生物的分离纯化 147

实验八 运用紫外诱变技术筛选抗药性突变菌株 148

实验九 正交试验法优化双歧杆菌发酵培养基 150

实验十 抗生素效价的微生物学测定 155

附录Ⅰ 常用的教学培养基 157

附录Ⅱ 常用的染色液与溶液 158

第三节 药物化学及天然药物化学 159

实验一 阿司匹林的合成 159

实验二 磺胺醋酰钠的合成 160

实验三 苯佐卡因的合成 161

实验四 琥珀酸喘通的合成 163

实验五 地巴唑的合成 164

实验六 中药延胡索中总生物碱的制备以及定性、定量分析的方法 166

实验七 灵芝粉中三萜和多糖的提取与分析 167

第八章 药物分析 170

实验一 药物的一般杂质检查 170

实验二 药物的特殊杂质检查 173

实验三 苯甲酸钠的含量测定 176

实验四 枸橼酸铁铵的杂质检查及含量测定 177

实验五 维生素C注射液的分析及含量测定 179

实验六 气相色谱法测定酊剂中乙醇含量 180

实验七 血浆中苯妥英浓度的高效液相色谱法测定 181

实验八 三点校正——紫外分光光度法测定维生素AD胶丸中维生素A的含量 183

第九章 药效药理学测定 185

第一节 细胞生物学 185

实验一 动物细胞线粒体的分离与观察 185

实验二 动物细胞凋亡的双荧光染色与观察 186

实验三 血管内皮细胞损伤的药效评价 188

实验四 染色体制备 189

实验五 四唑盐（MTT）比色法检测细胞活力 190

实验六SRB比色法检测药物活性 191

实验七 吖啶橙（acridineorange， AO）荧光染色法 192

实验八 肿瘤细胞迁移实验 194

第二节 免疫学 195

实验一 中性粒细胞吞噬功能测定 195

实验二 硝基四氮唑蓝还原实验 196

实验三 单向琼脂扩散试验 197

实验四 双向琼脂扩散试验 199

实验五 对流免疫电泳 200

实验六 酶免疫标记技术 202

实验七 白细胞介素-2的生物学活性检测 205

第三节 药理学 207

实验一 药物的基本作用 207

实验二 药物剂量对药物作用的影响 208

实验三 药物半数有效量（ED50）的测定 208

实验四 传出神经药物对家兔血压的影响 209

实验五 药物的抗惊厥作用 211

实验六 热板法观察药物的镇痛作用 212

实验七 药物对小鼠自发活动的影响 213

实验八 强心药对离体蛙心作用 214

实验九 药物对家兔离体肠平滑肌的作用 215

实验十 糖皮质激素对炎症的影响 216

实验十一 药物的体内抗凝血作用 217

实验十二 肝功能对戊巴比妥钠的药物代谢作用的影响 218

第十章 药剂学 220

实验一 溶液型液体药剂的制备 220

实验二 混悬型液体制剂的制备 221

实验三 乳浊型液体制剂的制备 223

实验四 注射剂的制备 224

实验五 片剂的制备 227

实验六片剂的薄膜包衣 230

实验七 软膏剂的制备 231

实验八 栓剂的制备 232

实验九 热原检查 233

实验十 对乙酰氨基酚片溶出度测定 235

实验十一 阿司匹林片崩解时限影响因素的检查 236

实验十二 薄荷油/β-环糊精包合物的制备和检查 237

第十一章 制药工艺学 239

实验一 工程菌培养基配制 239

实验二 工程菌的复苏与保藏 239

实验三 工程菌的摇床发酵 240

实验四 工程菌的自动罐上发酵 241

实验五rhIFNα-2b复性和纯化 242

实验六 生物催化法还原乙酰乙酸乙酯制备手性醇S（+）-3-羟基丁酸乙酯 248

实验七（一）-（1R， 2S）-1-苯基-1，2-丙二醇的生物催化法非对称合成 249

实验八 外消旋DL丙氨酸的酶法拆分 250

实验九 樟芝发酵菌粉中三萜和多糖的提取与分析 252

第三篇 拓展实验内容 255

第十二章 药效药理学拓展 255

第一节 动物模型建立 255

模型一 脑缺血动物实验模型 255

模型二 迷宫实验 257

模型三 实体瘤动物模型的建立和药物疗效评价 259

模型四 实验性糖尿病模型 261

第二节 药物安全性评价 262

一、国内一般药理学实验技术要求 262

二、毒理学研究 264

三、实例：XXX毒理试验设计方案 266

第三节 药物代谢动力学 272

一、实验设计原则 272

二、生物利用度实验设计 275

三、生物样品测定方法的要求 276

四、天然药物药物动力学研究概况 278

实例1磺胺类药物在正常与肾衰家兔体内的药代动力学参数测定 278

实例2重组蛋白药物A的体内分布测定 280

实例3融合蛋白X的体内排泄及药动学实验 281

第十三章 制药工艺优化原则 284

第一节 重组蛋白质及多肽药物制备工艺优化的原则 284

一、优化的原则 284

二、实例：碳源对重组子KM71/IH菌体生长的影响 287

三、自己制造重组蛋白质药物的实验方案、实施与评价 292

第二节 化学制药工艺优化的原则 293

一、原则要求 293

二、实例：维生素B6工艺条件优化 294

第三节 天然药物提取分离工艺改造原则 296

一、原则要求 296

二、实例：松口蘑中抗肿瘤活性多糖的提取工艺改造 296

三、自己制备的药物的工艺改造实验方案、实施及评价 300

第四节 制剂工艺改造 301

一、剂型选择时应考虑的因素 301

二、处方拟定时的研究方法 303

三、实例：水飞蓟素固体脂质纳米粒制剂处方优化 304