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第一节 研制核酸疫苗的理论依据 1

第一章 概论 1

第二节 核酸疫苗应用研究的进展 2

一、核酸疫苗研制的技术路线 2

二、免疫接种途径 3

三、核酸疫苗载体中的非编码免疫刺激序列的免疫佐剂功能 4

四、临床或临床前研究的核酸疫苗 4

第三节 核酸疫苗研制中面临的机遇 6

一、核酸疫苗的优势 6

二、核酸疫苗的推广应用及亟待解决的问题 6

一、免疫器官 8

第二章 核酸疫苗的免疫学基础 8

第一节 机体的免疫系统 8

二、免疫细胞 11

三、抗原 15

四、抗体 17

五、补体系统 19

六、主要组织相容性复合体 19

七、细胞因子 22

第二节 人体的免疫应答反应 24

一、免疫应答的阶段 24

二、免疫应答中的MHC限制性 25

三、特异性体液免疫应答 26

四、特异性细胞免疫应答 31

第三节 病态免疫 33

—、变态反应 34

二、免疫耐受与自身免疫 35

三、免疫缺陷 39

四、肿瘤免疫 42

第四节 抗感染免疫及疫苗免疫防护 43

一、抗感染免疫机制 44

二、免疫记忆 45

第四节 保护率的测定 47

三、核酸疫苗诱导的免疫反应 47

第一节 核酸疫苗的候选基因 53

一、候选基因的筛选原则 53

第三章 核酸疫苗的构建 53

二、已用于构建核酸疫苗的候选基因 55

第二节 用于构建核酸疫苗的相关载体 57

一、克隆载体 57

二、表达载体 63

第三节 获取候选基因的方法 67

一、构建cDNA表达文库筛选候选基因 67

二、用PCR法获得候选基因 70

三、人工合成候选基因 74

第四节 核酸疫苗构建的策略与方法 74

一、抗原基因和载体的制备 74

二、抗原基因和载体的连接 77

三、重组DNA分子导入宿主细胞 78

四、重组子的筛选和鉴定 80

第五节 核酸疫苗在体外哺乳动物细胞中的表达与检测 82

一、核酸疫苗导人哺乳动物细胞的主要方式 83

二、体外哺乳动物细胞中抗原表达的检测 85

一、细菌的扩增 89

二、核酸疫苗的纯化 89

第一节 核酸疫苗的制备 89

第四章 核酸疫苗的免疫流程 89

三、核酸疫苗的质量监控 93

第二节 核酸疫苗免疫接种的方法及途径 96

一、肌肉注射 97

二、基因枪介导的皮内或皮下导入 98

三、其他途径的导入方法 99

四、几种免疫接种途径的免疫保护效果评价 100

第三节 核酸疫苗的剂量及周期 101

一、免疫接种剂量的确定原则 101

二、免疫周期 102

第一节 细胞免疫检测 105

一、T细胞功能测定 105

第五章 免疫保护效应的评价 105

二、NK细胞活性测定 108

三、间接反映细胞免疫应答状况的细胞因子检测 110

四、抗体亚类的检测 118

第二节 体液免疫检测 118

一、免疫酶技术 118

二、免疫荧光技术 122

四、免疫组织化学技术 126

三、放射免疫分析法 126

五、免疫印迹法 134

六、B细胞功能的检测 137

七、间接反映体液免疫应答状况的细胞因子检测 139

八、血清免疫球蛋白的测定 142

第三节 病毒血清学试验 142

一、空斑形成试验 142

二、中和试验 143

三、血凝和血凝抑制试验 145

一、DNA序列中CpG基元的免疫刺激作用 149

第一节 载体设计对核酸疫苗免疫效果的影响 149

第六章 影响核酸疫苗诱发机体免疫应答的因素 149

二、复制型RNA疫苗 154

三、启动子对抗原基因转录水平的影响 156

四、载体大小等因素对疫苗载体表达的影响 158

五、多抗原的表达 158

第二节 核酸疫苗导入的方法对免疫效果的影响 158

一、肌肉注射法引发的免疫应答 159

二、基因枪法(微粒介导的转染)引发的免疫应答 162

三、皮内注射法引发的免疫应答 163

五、不同接种方法对免疫应答影响的比较 164

四、“无针头”注射引发的免疫应答 164

第三节 佐剂及辅佐分子的作用 168

一、细胞因子的免疫佐剂效应 168

二、共刺激分子的佐剂效应 173

三、趋化因子的佐剂效应 174

四、脂质体介导的DNA免疫 175

第四节 多种疫苗形式的联合作用 176

第五节 其他影响因素 178

一、年龄和性别因素对肌注质粒DNA表达的影响 179

二、肌注的剂量、体积等因素对DNA表达的影响 179

三、预先注射蔗糖溶液对表达的影响 180

四、抗原提呈细胞的应用 181

第七章 中试研究及安全性评价 183

第一节 中试工艺流程的确定 183

一、中试研究的规模 183

二、工程菌的发酵条件 183

三、核酸疫苗纯化工艺 196

第二节 中试产品的质量控制 204

一、原材料的质量控制 204

二、培养过程的质量控制 205

四、最终产品的质量控制 206

三、纯化过程的质量控制 206

第三节 核酸疫苗的安全性评价 207

一、免疫效能评估 207

二、局部反应和全身毒性研究 207

三、遗传毒性 207

四、生殖毒性研究 208

五、肿瘤发生研究 208

六、佐剂和疫苗接种设备的使用 208

第八章 核酸疫苗的应用 210

第一节 病毒感染性疾病的核酸疫苗 210

一、乙型肝炎核酸疫苗 210

二、艾滋病核酸疫苗 218

三、流感病毒核酸疫苗 231

第二节 核酸疫苗与非病毒微生物感染性疾病 235

一、结核病 235

二、肺炎支原体感染 237

三、肺炎球菌感染 238

四、幽门螺旋杆菌感染 239

五、破伤风杆菌感染 240

六、布鲁菌感染 241

七、沙眼衣原体感染 242

九、莱姆病 244

八、考德里立克次体感染 244

第三节 寄生虫病核酸疫苗 246

一、疟疾核酸疫苗 246

一、肿瘤概述 251

二、利什曼病核酸疫苗 253

三、日本血吸虫(亚洲种)的DNA疫苗 254

四、猪带绦虫病核酸疫苗 255

第四节 肿瘤核酸疫苗 256

二、肿瘤抗原 258

三、经典肿瘤疫苗 259

四、肿瘤核酸疫苗 261

一、自身免疫性疾病的发病机制 268

第五节 核酸疫苗与自身免疫性疾病 268

二、实验室自身免疫性脑脊髓炎 269

附录一 中国生物制品规程(一部，1995年版) 274

一、生物制品统一名称规程 274

二、生物制品生产、检定用菌种、毒种管理规程 275

三、生物制品国家标准品的制备和标定规程 277

四、生物制品分批规程 278

五、生物制品分装规程 278

六、生物制品包装规程 280

八、实验动物和动物试验管理规程 281

七、生物制品贮存、运输规程 281

附录二 人用重组DNA制品质量控制要点 285

附录三 新生物制品审批办法 289

一、总则 289

二、新生物制品的分类和命名 289

三、新生物制品的研究 289

四、新生物制品的人体观察 289

五、新生物制品的生产 290

六、附则 290

附录四 《新生物制品审批办法》的补充规定 292

附录五 新制品人体观察的技术要求 295