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实验须知 1

第一章 实验技术与方法 1

第一节 基本实验操作 1

一、玻璃仪器的洗涤和干燥 1

二、常用普通仪器及其使用 2

三、液体混匀法 5

第二节 分光光度技术 6

一、基本原理 6

二、分光光度计的结构和工作原理 9

三、常见分光光度计 10

四、扫描光密度计 13

五、测定物含量的计算方法 13

第三节 层析技术 15

一、纸层析 16

二、薄层层析 17

三、离子交换层析 17

四、凝胶层析 19

五、高效液相层析 21

六、气相层析 21

七、亲和层析 21

第四节 电泳技术 22

一、基本原理 22

二、影响电泳的因素 24

三、电泳的分类 26

四、电泳仪器设备简介 27

五、几种常见的电泳 27

六、电泳技术的应用 31

七、PAGE结果不正常现象与对策 32

第五节 离心分离技术 33

一、基本原理 33

二、离心机的分类和使用方法 34

三、特殊的离心分离技术 38

第六节 核酸与蛋白分析技术 40

一、聚合酶链式反应技术 40

二、Southern印迹杂交技术 42

三、Northern印迹杂交技术 43

四、Western印迹法 43

第二章 基本实验 44

第一节 氨基酸、蛋白质与酶 44

实验一 蛋白质含量的测定 44

实验二 血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳及定量分析 49

实验三 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 52

实验四 蛋白质印迹免疫分析 57

实验五 血清超薄SDS-琼脂糖凝胶电泳 59

实验六 凝胶层析分离血红蛋白和维生素B2 61

实验七 离子交换层析分离氨基酸 62

实验八 心、肝、肾组织乳酸脱氢酶同工酶的电泳分离 64

实验九 蛋白质的双向电泳 67

第二节 核酸 71

实验十 核酸含量的测定 71

实验十一 DNA的电泳及限制性内切酶谱分析 74

实验十二 组织细胞基因组DNA的提取 77

实验十三 质粒DNA的提取与鉴定 79

实验十四 核糖核酸的提取及成分鉴定 82

实验十五 动物组织总RNA的提取 84

实验十六 聚合酶链式反应扩增DNA片段 85

第三节 物质代谢 87

实验十七 肝糖原的提取与鉴定 87

实验十八 改良赖氏法测定血清ALT活性 88

实验十九 二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮含量 91

实验二十 肌糖原的酵解作用 93

实验二十一 乳酸脱氢酶及辅酶Ⅰ 95

第三章 综合性实验 98

实验二十二 标准曲线的制作及回收试验 98

实验二十三 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定 100

实验二十四 碱性磷酸酶的提取和比活性测定 106

第四章 设计性实验 110

实验二十五 酶促反应动力学实验的设计 110

实验二十六 PCR引物设计 115

附录 118

一、实验室安全防护及意外事故处理 118

二、实验误差及其产生原因与纠正 119

三、化学试剂纯度分级表 121

四、常用限制性内切酶酶切位点 121

五、质粒pBR322的物理图谱 122

六、λDNA（48502bp）常用限制性酶切位点 122

七、常用术语英汉对照表 124