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第一篇 生化技术概述 1

第一章 吸光光度法 1

一、原理 1

二、光电比色法 4

三、分光光度法 6

四、计算 12

五、荧光分析法 12

第二章 层析法 17

一、吸附层析 17

二、分配层析 19

三、离子交换层析 20

四、凝胶层析 22

五、亲和层析 24

第三章 电泳法 25

一、原理 25

二、影响电泳的主要因素 26

三、区带电泳的分类 27

四、几种电泳简介 28

第四章 离心法 32

一、分级离心法 32

二、密度梯度离心法 33

三、电动离心机的使用 34

附：离心机转速与离心力的换算 36

第五章 放射性同位素技术 37

一、基本知识 37

二、射线的探测 40

三、放射性同位素的优缺点 42

第六章 生物大分子实验技术 43

一、盐析 43

二、透析和超滤 45

三、减压浓缩和冷冻干燥 46

第七章 生化实验样品的制备 48

一、血液样品 48

三、组织样品 49

二、尿液样品 49

第八章 基本技能训练 51

一、玻璃仪器的洗涤 51

二、常用仪器的使用 52

三、容量仪器的校正 57

第九章 数据处理与实验报告 62

一、实验误差与数据处理 62

二、产生误差的原因和校正 64

三、实验报告书写 65

第二篇 生物化学实验 66

蛋白质 66

实验一 蛋白质的变性与沉淀 66

一、蛋白质的盐析 67

二、重金属盐及某些酸类沉淀蛋白质 68

三、加热沉淀蛋白质 69

四、乙醇沉淀蛋白质 70

实验二 蛋白质含量的Folin-酚法测定 72

附注：蛋白质的定量分析 74

实验三 微量凯氏(Kjeldahl)定氮法 75

实验四 血清蛋白质的定量 81

一、总蛋白测定(双缩脲法) 81

二、血清蛋白溴甲酚绿比色测定法 84

三、血清球蛋白乙醛酸比色测定法 85

实验五 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 87

实验六 血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳 89

附：聚丙烯酰胺电泳快速分离人血清蛋白质 93

核酸 96

实验七 细胞核的分离与核酸的检定 96

一、细胞核的分离与纯化 96

二、核糖核酸的测定 98

三、脱氧核糖核酸的测定 100

实验八 动物肝DNA的提取和定量 103

实验九 酵母RNA的分离及组分鉴定 106

附注：测定组织核酸含量的方法简评 108

实验十 3H胸苷参入核酸的实验 109

酶 111

实验十一 温度对酶促反应速度的影响 111

附注：不同温度条件下体液酶的稳定性 112

实验十二 PH对酶促反应速度的影响 113

实验十三 激动剂及抑制剂对酶活性的影响 114

附注：酶的激动剂与抑制剂 115

实验十四 可逆性抑制剂对酶促反应速度的影响 116

实验十五 蔗糖酶的专一性 120

实验十六 过氧化氢酶米氏常数的测定 122

附注：米氏常数的意义及应用 124

实验十七 血清乳酸脱氢酶同工酶的测定 126

实验十八 血清谷丙转氨酶的活性测定(改良Mohun法) 128

附注：1.酶活力的意义及测定方法 130

2.测定血清谷丙转氨酶活性方法简介 131

实验十九 碱性磷酸酶的提取及比活性测定 132

附注：酶的提取及纯化应注意的问题 136

实验二十 精氨酸酶的作用 138

糖 140

实验二十一 糖的滤纸层析 140

附注：层析用滤纸和溶剂选择 141

实验二十二 肝糖元的提取和定量 142

附注：饱食与饥饿对肝糖原含量的影响 144

实验二十三 血糖浓度测定 146

一、血清葡萄糖邻甲苯胺(O-TB)法测定 146

二、血清葡萄糖氧化酶(GOD)法测定 147

脂类 151

实验二十四 血清甘油三酯测定 151

一、分溶抽提乙酰丙酮显色法 151

二、酶法测定(一步终点比色法) 153

实验二十五 血清总胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇含量的测定(酶法) 155

附注：血清胆固醇含量测定方法的简评 156

实验二十六 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 158

附注：血清脂质及脂蛋白测定的临床意义 159

实验二十七 肝脏的生酮作用 161

生物氧化 163

实验二十八 乳酸脱氢酶及其辅酶 163

附注：酶蛋白与小分子物质的分离方法 164

实验二十九 细胞色素氧化酶的作用及其抑制与解毒 165

维生素 167

实验三十 胡萝卜素的色层分析 167

实验三十一 维生素B1的定性(荧光法) 169

实验三十二 还原型维生素C的定量测定及其影响因素 170

附注：测定维生素C的方法比较 172

其它 173

实验三十三 血清尿素氮(BUN)测定 173

一、二乙酰-肟显色法 173

二、脲酶-波氏比色法 174

实验三十四 血浆二氧化碳结合力(CO2CP)测定 176

附注：CO2CP的测定方法简述 177

实验三十五 血清钾钠测定-火焰光度法 178

附注：火焰光度法基本原理 181

实验三十六 尿中异常成分的定性 184

一、尿中酮体的定性测定(Lange法) 184

二、尿糖的定性测定(班氏试剂法) 185

三、尿蛋白定性(磺基水杨酸法) 187

附注：正常人尿液成分 188

附录 189

1.常用缓冲液的配制方法 189

2.常用酸碱指示剂 193

3.化学试剂纯度分级表 195

4.实验室常用酸碱比重和浓度 195

5.元素原子量表 196

6.哺乳类实验动物的血清生化值 197

7.几种食物中一般营养成分表(可食部分每百克中的含量) 198

8.生化实验须知 200

9.仪器使用管理制度及实验仪器单 201