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第1章 体内药物分析概述 1

第1节 休内药物分析的重要性及与其他学科的关系 1

一、体内药物分析的重要性 1

二、体内药物分析与其他学科的关系 1

(一) 与药物动力学及生物药剂学的关系 1

(二) 与临床药理学的关系 1

三、体内药物分析的特点 2

二、体内药物分析的任务 2

一、体内药物分析的对象 2

第2节 体内药物分析的对象、任务与特点 2

(三) 与治疗药物浓度监测及临床药物治疗学的关系 2

第3节 体内药物分析样品的种类与储存 3

一、样品的种类 3

(一) 血样 3

(二) 尿样 4

(三) 唾液 4

(二) 待测药物测定的目的与浓度范围 5

(一) 待测药物的理化性质 5

一、生物样品处理方法选择的一般原则 5

二、样品的储存 5

第4节 生物样品测定前的处理方法 5

(三) 生物样品处理与分析方法的选择 6

二、生物样品中蛋白质的处理 6

(一) 加入可与水混溶的有机溶剂及中性盐 6

(二) 加入酸性沉淀剂 6

(三) 组织的酶消化法 7

三、生物样品中药物及其代谢物的萃取 7

(一) 液-液萃取 7

四、生物样品中待测组分的浓集 8

(二) 固相萃取 8

五、生物样品中待测组分的衍生化 9

(一) 酰化 9

(二) 烷基化 9

(三) 芳香化 9

(四) 酯化 10

(五) 硅烷化 10

参考文献 10

(三) 荧光分光光度法 11

二、色谱法 11

(二) 紫外分光光度法 11

(一) HPLC法 11

第2章 体内药物分析方法的设计与评价 11

一、光谱分析法 11

第1节 体内药物分析的方法 11

(一) 比色法 11

(二) GC法 12

三、毛细管电泳法 12

四、免疫分析法 12

五、同位素法 12

第2节 体内药物分析方法设计与建立 12

二、体内药物分析方法设计与建立的一般步骤 13

(三) 回收率的测定 13

(二) 以处理过的空白样品进行测定 13

(一) 以纯品进行测定 13

一、体内药物分析方法设计的主要依据 13

(三) 仪器设备与实验室条件 13

(二) 调研文献了解待测药物的特性 13

(一) 明确分析方法设计的目的要求 13

(一) 绝对回收率 14

一、准确度 14

(四) 体内实际样品测定 14

第3节 体内药物分析方法的评价 14

(二) 方法回收率 15

二、精密度 15

(一) 标准差 15

(二) 相对标准差 15

三、灵敏度 16

(一) 检测限 16

(二) 定量限 16

(三) 最低检测浓度 16

四、分析方法的专属性 16

五、线性范围 17

六、稳定性 17

七、方法的相关性 17

参考文献 18

一、基本原理 19

二、影响测定准确性的因素 19

第3章 紫外-可见分光光度法 19

第1节 概述 19

(一) 偏离Beer定律而引起的误差 20

(二) 透光率测定误差 20

(一) 灵敏度的测算 21

(二) 测定条件的选择 21

二、常用样本处理方法 21

一、测定方法的建立 21

第2节 测定方法 21

(三) 操作不当引起的误差 21

三、计算分光光度法 22

第3节 紫外-可见分光光度法在体内药物分析中的应用 23

参考文献 25

第4章 荧光分光光度法 26

第1节 概述 26

一、药物分子结构与荧光的关系 26

二、基本原理与主要仪器装置 26

(一) 荧光法定量分析基本原理 26

(二) 仪器装置 27

一、在体内药物分析研究方面的应用 28

第2节 荧光分光光度法在体内药物分析中的应用 28

(一) 口服阿司匹林片后尿液中游离水杨酸的荧光测定法 28

三、一般测定方法的建立 28

(二) 对照法 28

(一) 标准曲线法 28

(二) 荧光分光光度法测定唾液中核黄素药-时曲线 29

二、在药物动力学研究方面的应用 31

(一) 萘普生钠注射液的药物动力学研究 31

(二) 硝喹乙酸盐在兔体内的药物动力学及组织分布 32

(三) 荧光法测定血清阿霉素浓度及家兔体内药物动力学研究 33

参考文献 34

第5章 气相色谱法 35

第1节 概述 35

第2节 气相色普法的基本原理与主要仪器装置 35

一、色谱柱 36

(一) 固定液 36

(二) 载体 37

(三) 色谱柱的制备 37

(二) 碱焰离子化检测器 38

(一) 火焰离子化检测器 38

二、检测器 38

(三) 电子捕获检测器 39

(四) 质谱检测器 39

(五) 检测器的性能指标 39

第3节 生物样品中药物及其代谢物的测定方法 39

一、内标法的原理 39

(二) 内标物与被测药物为同系物 40

(三) 内标物与被测药物结构相似 40

(一) 内标物与被测药物只相差一个化学元素 40

二、内标物的选择 40

(四) 内标物与被测药物结构不相似 41

三、内标物的应用 41

四、多内标物的应用 41

第4节 气相色谱法在体内药物分析中的应用实例 42

一、GC-FID法在体内药物分析中的应用 42

(一) 人血浆中利多卡因的测定 42

(二) 大鼠、家兔和狗血浆中麝香酮测定及药物动力学研究 42

二、GC-ECD法在体内药物分析中的应用 44

(一) 人血浆中硝苯地平气相色谱法测定及其药物动力学研究 44

(二) 气相色谱法在家兔体内硝苯吡啶药物动力学研究中的应用 46

(三) 抗心律失常新药关附甲素血浆浓度测定及临床前的药物动力学研究 47

(四) 5-单硝基异山梨醇酯片在正常人体的药物动力学和生物利用度的研究 48

三、GC-MS法在体内药物分析中的应用 49

(一) 测定人血浆中吗啡浓度的GC-MS法及其在药物动力学研究中的应用 49

(二) 盐酸苯环壬酯在人体内药物动力学及生物利用度研究 50

四、GC-NPD检测器在体内药物分析中的应用 52

参考文献 54

(一) 保留值 55

一、高效液相色谱法的基本参数 55

第1节 概述 55

第6章 高效液相色谱法在体内药物分析中的应用 55

(二) 相平衡参数 56

(三) 分离度 56

(四) 理论塔板数 56

二、仪器装置 57

(一) 贮液瓶 57

(二) 输液泵 58

(三) 梯度洗脱 58

(四) 进样器与色谱柱 59

(一) 固定相 60

一、反相键合相色谱 60

(五) 检测器 60

第2节 化学键合相色谱 60

(二) 流动相 62

(三) RP-HPLC法测定人血浆中盐酸氨溴索片的浓度及其药物动力学 63

(四) 高效液相色谱电化学检测法测定血清奥氮平浓度 64

(五) RP-HPLC法测定大鼠血浆中左旋黄皮酰胺及其代谢产物 66

二、正相键合相色谱 68

(一) 固定相 68

(二) 流动相 68

(三) 正相键合相HPLC法测定小鼠血中氮烯乙茶及其代谢产物 68

一、基本原理 70

第3节 离子对色谱 70

二、基本方法 71

(一) 固定相与流动相 71

(二) 反离子的种类 71

(三) 控制流动相的pH值 71

三、反相离子对色谱法测定苯丙醇胺控释混悬剂在健康志愿者的生物利用度 72

第4节 多维分离技术 74

参考文献 76

一、基本原理 77

第2节 免疫分析基础知识 77

第7章 免疫分析 77

第1节 概述 77

二、抗体的制备 78

(一) 人工抗原的制备 78

(二) 人工抗原的鉴定 80

(三) 人工抗原纯度的鉴定 81

(四) 获得抗体的方法 81

三、抗体质量的鉴定及免疫分析方法的评价 82

(一) 抗体的特异性 82

(二) 滴度的测定 83

(三) 亲和力与活度 84

第3节 放射免疫分析法 84

一、放射免疫分析方法的建立 84

(一) 标记抗原的制备 84

(二) 游离标记物与结合标记物的分离方法 86

(三) 标准曲线的绘制 88

(四) 血清中药物浓度的测定 89

二、RIA法在体内药物分析中的应用实例 89

第4节 酶免疫分析法 90

一、EMIT测定原理 91

(一) 酶标记物活性不变 91

(二) 酶标记物无活性 91

二、标记酶的选择及标记方法 91

三、EMIT测定方法 92

四、EMIT分析的优点及存在问题 92

(一) EMIT分析的优点 92

第5节 荧光免疫分析法 93

五、EMIT在药物动力学中的应用示例 93

(二) EMIT分析的存在问题 93

一、荧光偏振免疫分析 94

(一) 偏振荧光免疫分析测定原理 94

(二) FPIA方法评价 95

(三) 荧光偏振免疫法的应用示例 95

二、荧光酶免疫分析 96

三、猝灭荧光免疫分析 97

参考文献 98

第1节 概述 99

一、手性药物的专业术语与表示方法 99

第8章 体内手性药物色谱分析 99

二、手性药物分布概况 100

三、手性药物中对映体药效学与药动学差异 100

(一) 对映体的药效学差异 100

(二) 对映体的药动学差异 100

四、手性药物拆分的意义 101

一、概述 102

(一) 纤维素及其衍生物为载体 102

二、TLC手性固定相拆分法及其应用 102

第2节 手性药物薄层色谱诉分法 102

五、体内手性药物测定常用的方法 102

(二) β-环糊精键合相 103

(三) 手性配体交换色谱固定相 104

(四) 酸、碱或手性试剂浸渍性手性固定相 105

三、TLC手性流动相拆分法及其应用 106

(一) 添加手性离子对试剂 106

(二) 添加β-CD及其衍生物 107

(三) 手性衍生化试剂的种类 108

(二) 手性衍生化试剂及其反应条件 108

(一) 手性衍生化拆分的原理 108

二、手性衍生化(CDR)法 108

第3节 手性药物高效液相色谱拆分法 108

一、手性药物HPLC拆分法的分类 108

(四) 应用示例 109

三、手性固定相拆分法 109

(一) 吸附型手性固定相 110

(四) 配体交换手性固定相 111

四、手性流动相拆分法 111

(一) 配体交换型手性添加剂 111

(三) 模拟酶手性固定相 111

(二) 电荷转移型手性固定相 111

(二) 环糊精添加剂 112

(三) 手性离子对添加剂 114

参考文献 114

第9章 高效毛细管电泳法 115

第1节 概述 115

第2节 基本原理与装置 115

一、基本装置 115

二、基本原理 116

(二) 理论塔板数与分离度 117

三、主要分析参数 117

(一) 淌度与迁移时间 117

四、进样 118

(一) 流体力学进样 118

(二) 电动进样 118

五、检测 118

(一) 紫外-可见光检测器 118

一、毛细管区带电泳 119

第3节 主要分离模式 119

(四) 其他类型检测器 119

(三) 质谱检测器 119

(二) 荧光检测器 119

二、胶束电动毛细管色谱 120

三、毛细管凝胶电泳 120

四、毛细管等电聚焦 121

五、毛细管等速电泳 121

六、毛细管电色谱 121

第4节 高效毛细管电泳的柱技术 121

二、毛细管内壁表面涂层 122

(三) 采用化学衍生或化学键法在内壁形成一涂渍层 122

一、动态修饰毛细管壁 122

(二) 在缓冲液加入添加剂使其于内壁形成一动态吸附层 122

(一) 改变缓冲液pH值和离子强度抑制硅醇基的离解 122

三、凝胶柱和无胶筛分 123

四、毛细管填充柱 123

第5节 高效毛细管电泳法在体内药物分析中的应用 123

一、高效毛细管电泳法分析血样尿样中巴比妥类药物 124

二、毛细管区带电泳法直接进样测定腹水中左旋氧氟沙星含量 126

三、奥美拉唑血药浓度的毛细管电泳测定及其临床应用 127

四、高效毛细管电泳测定血清中盐酸反式曲马多对映体 129

参考文献 131

第10章 色谱-质谱联用技术 132

一、气相色谱-质谱联用 132

(一) 气相色谱-质谱接口 132

(二) 色谱柱 133

(三) GC-MS的常用的测定方法 133

(四) 应用示例 134

(一) 液相色谱-质谱接口 137

二、液相色谱-质谱联用 137

(二) 色谱-质谱联用技术在生物药物分析中的应用示例 138

参考文献 142

体内药物分析实验 143

实验1 血清中硫酸镁浓度的比色测定 143

实验2 血清中阿司匹林浓度的比色测定 144

实验3 唾液中扑热息痛浓度的比色测定 145

实验4 血清中维生素C浓度的比色测定 146

实验5 血清中维生素E浓度的比色测定 146

实验6 兔血浆中甘露醇浓度的比色测定 148

实验7 兔血液中磺胺嘧啶浓度的测定 150

实验8 尿中异烟肼及其代谢物乙酰异烟肼的测定 152

实验9 兔血清中茶碱的紫外分光光度法 154

实验10 兔血清中氨茶碱的双波长分光光度法 155

实验11 血清中氯喹的荧光分光光度测定法 156

实验12 血浆中利凡诺的荧光分光光度测定法 157

实验13 尿中氨苄青霉素的荧光分光光度测定 158

实验14 兔血清中茶碱的高效液相色谱分析法 159

实验15 血清中苯妥英和苯巴比妥浓度高效液相色谱法测定 160