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目录 2

前言 2

术语缩写 2

第一篇 体外免疫反应 2

第一章 小鼠细胞悬液的制备 张枫 2

§1-1 前言 2

§1-2 脾细胞的制备 2

§1-3 正常腹膜腔细胞的制备 4

§1-4 经硫乙二醇刺激的腹腔细胞的制备 4

§1-5 胸腺细胞的制备 6

§1-6 驯化的胸腺细胞 7

§1-7 可的松耐性胸腺细胞的制备 7

§1-8　骨髓细胞的采取 7

§1-9 淋巴结细胞的制备 8

§1-10　用血细胞计数板计数细胞 10

§1-11　用台盼蓝染色排斥试验决定细胞成活率 12

§1-12　伊红—Y染色排斥试验决定细胞成活率 12

§1-13 用苯胺黑染色决定活细胞百分率 13

§1-14 A．用二乙酸荧光素计数活细胞百分率 14

B．用二乙酸荧光素及蕊香红结合的抗细胞表面抗体来计数活细胞的百分率 14

§1-15 用吖啶橙—溴乙啶AO/EB染色计数活性细胞百分率 15

§1-16　低张力休克溶鲜红细胞 16

§1-17　用Tris氯化铵缓冲液溶解红细胞 17

§1-18　用Gey's溶血液溶解红细胞 17

§1-19　通过Ficoll-Hypaque液离心沉淀分离细胞 18

§1-20 死细胞的凝集反应 19

§1-21 通过玻璃棉滤去死细胞及其碎片 20

§1-22 经过FCS离心法除去死细胞 20

§2-1 引言 21

第二章 体液反应的诱导 许以盛、徐芸 21

§2-2 悬浮培养细胞的初次免疫反应 22

§2-3 扩散培养物的初次免疫反应 27

§2-4 对异种红细胞的二次免疫反应 31

§2-5 对硝基苯半抗原的二次免疫反应 32

§2-6 对偶氮苯半抗原的二次免疫反应 39

§2-7 微量悬浮培养物中的免疫反应（100微升） 43

§2-8 微量扩散培养物中的免疫反应（100微升） 44

§2-9 微量悬浮培养物中的免疫反应（100微升） 47

第三章 溶血空斑测定法 许以盛、徐芸 50

§3-1 前言 50

§3-2 载玻片法（GEL） 51

§3-3 平皿法（凝胶法） 55

§3-4 染色和固定 59

§3-5 液体基质（载玻片法） 61

§3-6 液体基质（微孔法） 63

§3-7 消除IgM空斑后测定IgG反应 64

§3-8 抗半抗原空斑 67

§3-9 用空斑测定亲和力 71

§3-10 抗蛋白质空斑 72

§3-11 多克隆反应的测定法 77

§3-12 重复性铺板法 80

§3-13 测定抗有核细胞表面抗原的IgM空斑形成细胞 81

第四章 细胞介导的溶细胞反应 许以盛、徐芸 89

§4-1 前言 89

§4-2 溶细胞淋巴细胞的体外生成法 90

§4-3 铬释放测定法 91

第五章 有限稀释分析法 许以盛、徐芸 99

§5-1 前言 99

§5-2 B淋巴细胞前体的频度测定 102

§5-4 辅助T细胞的频度 103

§5-3 反应性B细胞前体细胞克隆的平均规模 103

§5-5 溶细胞T细胞前体细胞的频度 104

第六章 细胞增生反应 许以盛、徐芸 109

§6-1 前言 109

§6-2 有丝分裂因子诱导的反应 110

§6-3 混合淋巴细胞反应 115

§6-4 抗原诱导性T细胞增生反应 116

§6-5 脾细胞培养物的放射自显影术 118

第二篇 细胞分离法 126

第七章 粘着法 陈宜峰 126

§7-1 前言 126

§7-2 葡聚糖G—10（Sephadex G—10） 126

§7-3 羰基铁粉 129

§7-4 尼龙纤维 130

§8-1 前言 134

第八章 大小和密度 陈宜峰 134

§8-2 牛血清蛋白（BSA）线性密度梯度 135

§8-3 牛血清蛋白（BSA）非连续密度梯度 138

§8-4 胶体二氧化硅密度梯度法 141

§8-5　1×g的速度沉降法 143

§8-6　低速离心速度沉降法 144

§8-7 形成玫瑰花结细胞的一步密度梯度分离法 147

第九章　细胞表面标记 陈宜峰 149

§9-1 前言 149

§9-2 利用特异性抗血清和补体的方法 150

§9-3 半抗原—夹心片玫瑰花结法 151

§9-4 用凝集法除去玫瑰花结的方法 154

§9-5 Fc和补体受体 155

§9-6 花生凝集素和大豆凝集素 160

§9-7 用抗Ig抗体覆盖的塑料表面，分离T细胞和B细胞的方法（“淘洗”法） 162

第十章 灭活增生性细胞进行功能分离 陈宜峰 167

§10-1 放射性胸苷脉冲标记法 167

§10-2 5—溴—2—脱氧尿苷（BUdR）脉冲标记法 169

§10-3 丝裂霉素C法 170

§10-4 放射线照射法 171

第三篇 细胞学研究的免疫球蛋白的制备 175

第十一章 抗血清的制备和检测 石连发 175

§11-1 异种抗小鼠脑血清 175

§11-2 小鼠抗淋巴细胞抗原同种异体血清 182

§11-3 抗半抗原血清 184

§11-4 用于间接溶血空斑试验的兔抗小鼠免疫球蛋白血清 185

§11-5 用于研究半抗原玫瑰花结形成、荧光标记及放射免疫沉淀的特异性兔抗小鼠Ig血清 187

§11-6 放射免疫沉淀及荧光标记法检测抗鼠Ig抗血清的特异性试验 190

§11-7 微量细胞毒性试验 193

§11-8 半微量沉淀反应 194

§11-9 抗血清的贮存 195

第十二章　Ig及其片段的纯化 石连发 196

§12-1 前言 196

§12-2 用硫酸铵沉淀Ig 196

§12-3 DEAE柱层析 197

§12-4 亲和层析法提纯抗半抗原抗体 198

§12-5 活性抗体片段的制备 200

第十三章 抗体的标记和使用 石连发 203

§13-1 前言 203

§13-2 半抗原夹心法 203

§13-3 荧光抗体 206

§13-4 荧光染色及观察 210

§13-5 抗体结合于其他大分子 214

§14-2 125I的安全防护 217

§14-1 前言 217

第四篇 单克隆抗体及其他方法 217

第十四章 双抗体放射免疫测定用于定量细胞蛋白质 石连发 217

§14-3 125I标记蛋白质………………………………………………（21？§14-4 检测方法……………………………………………………………（22？第十五章 免疫学外科手术 张和君 229

§15-1 前言 229

§15-2 胸腺摘除术 229

§15-3 皮肤移植 235

§15-4 脾脏摘除 237

§15-5 阉割 238

§15-6 动物去嗅觉术Induction of Anosmia 240

第十六章 半抗原修饰蛋白质抗原的制备 张和君 242

§16-1 前言 242

§16-2 氮酚类半抗原修饰钥孔？血蓝蛋白 242

§16-3 三硝基苯半抗原修饰钥孔？血蓝蛋白 243

§16-4 用二硝基苯半抗原修饰牛丙种球蛋白 245

§17-1 前言 248

第十七章 杂交瘤细胞株及培育技术 248

一、产生免疫球蛋白的杂交瘤细胞株 张和君 248

§17-2 细胞融合的准备 250

§17-3 NS—1细胞与免疫脾细胞的融合 252

§17-4 杂交瘤细胞株的选择培养（HAT选择作用） 254

§17-5 杂交细胞初筛确定是否产生特异性抗体 257

§17-6 转种于1毫升培养孔（转种板）和杂交细胞的冰冻保存 257

§17-7 有限稀释法进行克隆 259

§17-8 抗体生产 260

§17-9 抗体的纯化 261

§17-10 抗体的检定 263

§17-11 细胞分发中心 263

二、杂交细胞瘤培育技术 张和君 264

§17-12 前言 264

B．动物的选择 265

A．实验室基本装备 265

§17-13 细胞融合前的准备工作 265

C．免疫 266

D．骨髓瘤细胞株的选择 266

§17-14 培养液的成分培养液和细胞悬液的制备 267

A．100×的次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶贮存液（100×HAT）的配制 267

B．营养液的配制 267

C．聚乙二醇（PEG）的配制 267

D．细胞悬液的配制 267

§17-15 PEG作细胞融合剂 268

§17-16 融合细胞的产物 269

A．特异性抗体的检测 269

B．抗体的贮存 271

C．抗体的纯化 271

B．细胞复苏 273

参考文献 273

§17-17 杂交瘤细胞株的冷冻保存和复苏 273

A．细胞冷冻 273

D．琼脂双向扩散法（OuchterlonyTest），测定免疫球蛋白的类和亚类 273

三、生产单克隆抗体的战略与战术问题 张和君、郭仁 274

§17-18 前言 275

§17-19 材料与方法 275

a．盐溶液 275

b．骨髓瘤细胞株 275

c．小鼠免疫 276

d．腹腔内巨噬细胞的采取 276

e．大孔培养 276

f．微量培养法 276

g．放射标记法 276

h．电泳 276

a．实验结果不一致的原因和防止方法 277

§17-20 结果 277

b．巨噬细胞在培养杂交瘤细胞株的作用 278

c．不同源的巨噬细胞 279

d．细胞加入的量 280

e．骨髓瘤细胞株的比较 280

f．融合剂的比较 282

g．最好的细胞融合温度 283

h．营养液的比较 283

i．细胞换液的方案 284

j．微量培养 285

k．无血清培养液 286

§17-21 结论 286

四、人单克隆抗体的研究 张和君、傅家忠 288

§17-22 前言 288

§17-23 建立人～人杂交瘤技术 289

§17-24 EB病毒转化与克隆筛选建立人单克隆抗体生产细胞系 291

§17-25 人单克隆抗体研究中的有关技术 292

第十八章 固相放射免疫测定……………………………………石连发 297

§18-1 前言 297

§18-2 同位素标记物的制备 299

§18-3 固相RIA一步法：125I标记抗同种异型抗体的特异性试验 301

§18-4 固相RIA两步法：抗体反应中的同型抗体及同种异型抗体的检测——对载体蛋白上二硝基苯（DNP）半抗原的反应 302

§18-5 放射免疫阻断法——Ig的定量测定 306

§18-6 细胞结合测定法——淋巴细胞的细胞表面抗原 308

第十九章 用单相或双相聚丙烯酰胺凝胶电泳分析放射性标记的淋巴细胞蛋白质 石连发 311

§19-1 前言 311

§19-2 细胞蛋白质的标记和提取 312

§19-3 细胞蛋白质的免疫沉淀法 317

§19-4 样品的制备 319

§19-5 双相聚丙烯酰胺凝胶电泳（2—D PAGE） 323

§19-6 单相SDS板型凝胶电泳 337

§19-7 放射自显影 338

附录 许以盛 徐芸 341

附录A 试剂的制备及测试法 341

A-1 胎牛血清（FCS） 341

A-2 补体：豚鼠和家兔血清 342

A-3 平衡盐溶液（BSS） 343

A-4 HEPES缓冲的平衡盐溶液 345

A-5 营养合剂 346

A-6 2—巯基乙醇（2—ME） 346

A-7 非缓冲平衡盐溶液 347

A-8 磷酸缓冲盐水（PBS）、pH7.2—7.4 10×贮存液 347

A-14 Alsever氏溶液 348

A-13 0.28M二甲砷酸缓冲液pH6.9 348

A-12 0.15M磷酸缓冲液pH7.2—7.4 348

A-11 葡萄糖磷酸缓冲盐水（G—PBS）pH7.6 348

A-10 1.0M磷酸缓冲液，pH7.6 348

A-9 硼酸缓冲盐水（BBS）0.17M硼酸盐，0.12M NaCl，pH8.0 348

A-15 Click氏改良培养剂 349

A-16 火棉胶—龙胆紫溶液 350

A-17 酸化水 350

附录B 实验室玻璃器皿的清洗和消毒 350

B-1 用于组织培养工作的玻璃器皿的清洗 351

B-2 实验室玻璃器皿的消毒 351

附录C 液体试剂的消毒 352

C-1 高压消毒法消毒 352

C-2 用膜过滤法除菌 352

附录D 透析袋的制备 353

附录E 同种异体条件培养液的制备 354

附录F 福氏佐剂 355

附录G 制造和批发厂商 356