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目录第一章 流式细胞分析原理 1

第一节 流式细胞仪的发展简史 1

一、细胞计数的发展 1

二、流式细胞仪的发展 2

三、流式细胞仪的商品化 2

第二节 流式细胞仪的工作原理 3

第三节 流式细胞分析的技术特点 4

一、鞘流原理 4

二、激发光源 5

三、光信号检测 6

四、荧光色素特性及其应用 9

五、细胞分选 14

第四节 流式细胞仪的组成 15

一、仪器种类与组成 15

二、仪器性能参数与质量控制 18

第五节 数据分析 19

一、数据采集与存储格式 19

二、图形分析与设门 19

三、单参数分析 20

四、多参数分析 21

一、数字化发展 23

第六节 流式细胞分析技术发展展望 23

二、模块化发展 24

第二章 临床流式细胞分析技术与方法 27

第一节 流式细胞分析系统 27

一、流式细胞分析系统的组成 27

二、流式细胞仪的校准 31

第二节 流式细胞分析技术 43

一、免疫荧光探针的选择 43

二、流式细胞分析设门策略 45

第三节 流式细胞免疫表型分析方法 52

一、标本的准备 52

二、抗体的选择 53

三、免疫荧光染色 54

四、荧光染色对照的设置 56

五、去除干扰细胞 57

六、标本的固定与保存 57

七、流式细胞仪的应用 58

八、影响免疫表型分析的一些问题 59

第四节 血液淋巴细胞免疫表型分析 61

一、双色荧光分析血液淋巴细胞免疫表型 62

二、多色荧光分析血液淋巴细胞免疫表型 68

三、血液淋巴细胞亚群绝对计数 72

四、血液淋巴细胞免疫表型分析的临床应用 78

第五节 流式细胞内或细胞核内抗原分析 82

一、白血病、淋巴瘤细胞内和核内抗原分析 83

二、细胞内细胞因子测定 86

三、肿瘤细胞内或核内抗原的检测 97

第六节 临床流式细胞分析的质量控制 99

一、流式细胞免疫表型分析的质量控制 99

二、细胞周期和DNA倍体分析的质量控制 103

第三章 白细胞分化抗原及其应用 113

第一节 CD分子的分类方法 113

一、国际人类白细胞分化抗原协作组的CD命名方法 113

二、国际人类白细胞分化抗原协作组的CD分类 114

第二节 各种CD分子及其意义 115

第三节 非CD类抗原及其意义 223

第四章 流式造血干细胞分析 233

第一节 造血细胞的分化、发育与成熟规律 233

一、造血 233

二、造血干细胞分化、发育与成熟 235

第二节 造血干／祖细胞的生物学特征 235

一、造血干细胞 235

二、造血干／祖细胞的实验研究 236

三、造血干／祖细胞分化的等级性 238

第三节 造血干／祖细胞的免疫表型分析 239

一、造血干细胞的免疫表型特点 239

二、造血祖细胞的免疫表型特点 240

第四节 造血干／祖细胞的计数 241

一、FCM计数CD34+细胞的标准化方案 243

二、ISHAGE法检测CD34+细胞百分率 246

三、ProCOUNTTM造血干／祖细胞计数试剂盒 248

第五章 流式细胞分析在造血干细胞移植中的应用 255

第一节 造血干细胞移植 255

一、造血干细胞移植的种类 255

二、异基因造血干细胞移植 256

三、自身造血干细胞移植 261

四、造血干细胞移植治疗的适应证及疗效 262

五、脐血造血干细胞移植 265

第二节 流式细胞分析在造血干细胞移植中的应用 266

一、CD34+造血干／祖细胞计数与造血重建 267

二、淋巴细胞亚群计数在造血干细胞移植中的应用 269

三、造血干细胞移植后微小残留病变的检测 270

四、流式细胞分析在诊断巨细胞病毒感染中的应用 271

五、展望 272

第六章 急性白血病的免疫分型及应用 275

第一节 急性白血病的诊断与分型 275

一、急性白血病的FAB分型 275

二、急性白血病的MIC分型 277

三、急性白血病的WHO分型 278

一、流式细胞仪检测的主要参数 279

第二节 流式细胞免疫分型方法 279

二、流式细胞仪数据的计算机分析方法 280

三、标本制备及数据获取和分析 281

第三节 正常造血细胞分化成熟的抗原表达规律 287

一、粒系和单核系细胞抗原表达规律 288

二、淋巴细胞分化发育的抗原表达规律 289

第四节 急性白血病免疫表型分析及其临床意义 291

一、急性髓系白血病免疫表型特点 292

二、急性淋巴细胞白血病免疫表型特点 300

三、其他类型急性白血病免疫表型特点 306

第五节 流式细胞术分析残留白血病 308

一、白血病相关的免疫表型特点 310

二、急性髓系白血病相关免疫表型特点 310

三、急性淋巴细胞白血病相关免疫表型特点 312

第六节 急性白血病免疫分型部分病例分析 319

一、正常者血液和骨髓细胞免疫表型 319

二、急性髓系白血病-M2型 321

三、急性早幼粒细胞白血病 322

四、急性T淋巴细胞白血病 323

五、急性单核细胞白血病 328

六、急性红白血病 329

七、急性巨核细胞白血病 330

八、双表型急性白血病 333

第一节 WHO对淋巴系肿瘤的分类 339

第七章 淋巴瘤与慢性淋巴系白血病的免疫分型与应用 339

第二节 B慢性淋巴细胞白血病与淋巴瘤免疫分型及其临床意义 340

一、B慢性淋巴细胞白血病／小淋巴细胞淋巴瘤 340

二、B幼淋巴细胞白血病 342

三、外套细胞淋巴瘤 342

四、滤泡型淋巴瘤 342

五、边缘带及相关的B淋巴细胞淋巴瘤 344

六、多毛细胞白血病 344

七、浆细胞骨髓瘤／浆细胞瘤 345

八、淋巴样浆细胞淋巴瘤与原发性巨球蛋白血症 345

一、T幼淋巴细胞白血病 348

第三节 慢性T淋巴细胞白血病与淋巴瘤的免疫分型及其临床意义 348

二、T/NK大颗粒淋巴细胞白血病 349

三、蕈样霉菌病／Sézary综合征 351

四、成人T淋巴细胞与周围T淋巴细胞淋巴瘤／白血病 351

五、血管免疫母T淋巴细胞淋巴瘤 351

六、间变性大细胞淋巴瘤 352

七、肝脾γ／δ T淋巴细胞淋巴瘤 352

八、皮下脂膜炎样T淋巴细胞淋巴瘤 352

第四节 霍奇金淋巴瘤 353

第五节 淋巴瘤病例分析 354

一、外套细胞淋巴瘤 354

二、低分化淋巴瘤／白血病 356

第一节 网织红细胞分析及临床应用 359

一、概述 359

二、自动化网织红细胞分析仪的工作原理 359

第八章 流式红细胞分析 359

三、荧光染料及常用的染色方法 360

四、网织红细胞成熟指数的建立及发展 362

五、数据分析的方法和存在的问题 363

六、网织红细胞分析的临床应用 364

七、自动化网织红细胞分析的质量控制 365

八、流式网织红细胞分析的实验室间相关性研究 365

第二节 CD55和CD59测定诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症 366

二、中性粒细胞膜CD55和CD59的表达 367

一、红细胞和网织红细胞膜CD55和CD59的表达 367

三、淋巴细胞及其亚群膜CD55和CD59的表达 368

第三节 红细胞内血红蛋白F分析及其临床应用 371

一、概述 371

二、胎儿血红蛋白与疾病 372

第四节 红细胞血型抗原分析的临床应用 374

一、血型系统 375

二、血型抗原的生物学意义 377

三、血型抗原的鉴定 377

第五节 红细胞表面相关免疫球蛋白测定的临床意义 379

二、血小板形态 383

一、血小板生成 383

第九章 流式血小板分析与应用 383

第一节 血小板的形态结构与功能 383

三、血小板的异质性 384

四、血小板膜糖蛋白 385

五、血小板特异抗原 388

六、钙离子在血小板活化中的作用　 388

七、血小板花生四烯酸代谢　 388

八、血小板的生理功能　 389

第二节 流式血小板分析原理　 390

一、传统方法分析血小板　 390

二、流式血小板分析　 391

第三节 流式血小板活化分析　 399

一、血小板膜表面纤维蛋白原受体和P-选择素表达分析　 401

二、血小板促凝血功能检测　 405

三、血小板-白细胞聚集体测定　 408

四、血小板活化分析的应用　 410

第四节 血小板膜表面糖蛋白分析　 414

第五节 血小板自身抗体测定　 420

一、血小板相关免疫球蛋白测定　 420

二、抗血小板膜糖蛋白抗体测定　 423

三、药物相关血小板抗体测定　 423

二、红细胞与血小板比值法　 426

一、二维激光散射法　 426

第六节 流式血小板计数　 426

三、荧光微球绝对计数法（TruCOUNT法）　 427

四、三种方法计数血小板的比较　 427

第七节 流式网织血小板计数　 431

第八节 血小板微粒及其检测方法研究进展　 435

一、血小板微粒及其临床意义　 435

二、流式细胞分析在血小板微粒检测中的应用　 443

第十章 流式细胞分析在临床肿瘤学中的应用　 459

第一节 流式细胞周期与DNA倍体分析　 459

一、流式细胞周期与DNA倍体分析的基本原理　 459

二、流式细胞周期与DNA倍体的分析方法　 461

三、流式细胞周期与DNA倍体分析在临床肿瘤学中的意义　 471

第二节 流式细胞增殖标志物分析　 474

一、细胞周期蛋白测定　 474

二、Ki-67测定　 475

三、增殖细胞核抗原测定　 477

第三节 流式细胞致癌基因编码抗原分析 478

一、检测方法 478

二、临床应用　 480

第四节　流式细胞分析监测肿瘤化疗耐药的临床意义　 482

一、P糖蛋白与肿瘤　 482

三、肺抗性相关蛋白　 483

二、多药耐药相关蛋白　 483

四、乳腺癌耐药蛋白　 484

第五节　淋巴细胞免疫表型分析在肿瘤治疗前后的应用　 484

一、肿瘤发生与宿主免疫功能状态的关系　 484

二、Th1/Th2漂移与抗肿瘤免疫　 485

三、不同肿瘤患者Th1/Th2漂移　 486

第六节　流式细胞凋亡分析在临床肿瘤学中的意义　 486

一、细胞凋亡与肿瘤的发生、发展及转移　 486

二、细胞凋亡与肿瘤防治　 487

三、流式细胞分析与肿瘤细胞凋亡　 487

第一节　概述　 491

第十一章　淋巴细胞HLA-B27表型分析与强直性脊柱炎诊断　 491

第二节　HLA-B27与强直性脊柱炎的相关性　 492

第三节　HLA-B27的分型方法　 493

一、HLA-B27的检测方法　 493

二、流式细胞分析HLA-B27　 494

第四节　HLA-B27与强直性脊柱炎关联的机制　 497

一、连锁基因假说　 497

二、免疫应答基因假说　 497

三、分子模拟假说　 497

四、关节源性致病肽假说　 497

五、T淋巴细胞受体库和超抗原假说　 498

一、HLA-B27在强直性脊柱炎中的诊断价值　 499

第五节　HLA-B27与强直性脊柱炎相关的临床应用　 499

二、HLA-B27实验的应用　 500

第十二章　流式细胞分析在器官移植中的应用　 501

第一节　流式交叉配型　 502

第二节 同种异体抗体检测　 506

一、无关个体淋巴细胞作为靶抗原　 506

二、LCL作为靶抗原　 506

三、FlowPRA磁珠作为靶抗原　 506

四、方法学评价　 507

第三节 移植后的实验室监测　 509

三、自然杀伤细胞活性测定　 510

四、细胞因子和黏附分子　 510

一、T淋巴细胞亚群检测　 510

二、受者HLA抗体的检测　 510

第十三章　流式细胞分析在免疫缺陷病中的应用　 513

第一节　免疫缺陷的检查方法　 514

一、免疫缺陷的检查方法分类　 514

二、T淋巴细胞分类与功能试验　 514

第二节　原发性免疫缺陷病　 515

一、原发性免疫缺陷病的分类　 515

二、联合免疫缺陷病　 517

三、原发性T淋巴细胞免疫缺陷　 518

四、抗体缺陷为主的原发性免疫缺陷病　 519

五、其他免疫缺陷病　 520

六、补体系统缺陷　 522

七、吞噬功能缺陷　 524

八、伴发于其他疾病的原发性免疫缺陷　 524

第三节　获得性免疫缺陷综合征　 525

一、人类免疫缺陷病毒的病原学　 525

二、免疫病理改变和发病机制　 526

三、人类免疫缺陷病毒的传播特征　 530

四、临床表现　 531

六、诊断　 533

七、治疗　 533

五、辅助检查　 533

八、预防　 534

附：人类免疫缺陷病毒感染的分类标准（CDC,1993）　 534

第四节　流式细胞分析诊断免疫缺陷病　 535

一、免疫缺陷病的免疫诊断要点　 536

二、免疫缺陷的诊断策略　 538

第五节　免疫缺陷病的免疫表型分析及其临床意义　 539

一、免疫缺陷相关细胞与体液成分的流式细胞分析及意义　 540

二、部分免疫缺陷病病例的免疫表型分析　 542

第十四章　流式细胞凋亡分析　 547

第一节　细胞凋亡的特征、调控及其与疾病的关系　 547

一、细胞凋亡的特征　 547

二、细胞凋亡的基因调控　 549

三、细胞凋亡与疾病的关系　 550

第二节 流式细胞分析在细胞凋亡研究中的应用　 552

一、凋亡细胞形态学特征的检测　 552

二、细胞对染料吸收能力的检测　 552

三、caspase的流式细胞仪检测　 554

四、线粒体功能的检测　 554

五、细胞内钙离子和pH的检测　 555

六、溶酶体质子泵变化的检测　 556

七、DNA断裂的检测　 556

九、蛋白及RNA含量的检测　 557

十、膜磷脂重分布的检测　 557

八、细胞DNA含量的检测　 557

十一、凋亡小体的检测　 558

十二、凋亡相关蛋白的检测　 558

第三节　常用的细胞凋亡检测方法　 559

一、碘化丙啶单染色法　 559

二、caspase-3活性试验　 560

三、Annexin V/PI双染色法　 561

四、DNA断裂点标记　 563

五、凋亡相关蛋白的检测　 567

第十五章　流式树突状细胞分析　 569

第一节　树突状细胞的分化发育途径　 569

第三节　树突状细胞参与免疫调控　 570

第二节　树突状细胞的抗原呈递功能　 570

一、DC与肿瘤免疫　 571

第四节　树突状细胞与疾病　 571

二、DC与抗感染免疫　 572

三、DC与移植免疫　 572

四、DC与自身免疫　 572

第五节　树突状细胞的研究现状　 573

第六节　流式细胞仪分析外周血树突状细胞　 573

第七节　流式细胞仪分析关节积液中的树突状细胞　 575

第十六章　流式细胞分析在临床微生物学中的应用　 577

第一节　直接测定病原菌及其毒素　 577

第三节　抗生素敏感性试验　 578

第二节　病原体的血清学诊断　 578

第四节　其他　 582

一、真菌　 582

二、抗生素后效应　 583

三、细菌耐药异质性　 583

四、病毒　 583

第十七章　定量流式细胞分析及其临床应用　 587

第一节　定量流式细胞分析的原理　 587

一、校准微球　 588

二、定量流式细胞分析方法　 589

三、影响定量流式细胞分析的一些因素　 593

四、定量流式细胞分析的应用前景　 594

第二节 间接荧光定量流式细胞分析方法与应用　 594

一、CD8+T淋巴细胞膜CD38表达的检测及其应用　 594

二、血小板膜糖蛋白定量分析　 598

三、血液T淋巴细胞Fas表达的检测　 603

四、标准化流式细胞术分析中性粒细胞和红细胞膜CD55/CD59　 606

第三节 直接荧光定量流式细胞分析与应用　 611

一、中性粒细胞CD64和单核细胞HLA-DR表达定量分析　 611

二、CD8+T淋巴细胞活化抗原CD38表达定量分析　 614

三、慢性淋巴细胞白血病细胞CD38定量分析协助判断预后　 617

四、CD20荧光定量分析　 618

第四节　定量流式细胞分析的临床应用　 619

一、传染性疾病　 620

二、出血与血栓性疾病　 623

三、红细胞疾病　 626

四、血液透析　 628

五、小结　 628

第十八章　流式分子表型分析与应用　 641

第一节　分子表型和免疫表型结合分析　 641

一、分子表型分析　 641

二、分子表型和免疫表型结合分析　 645

一、端粒分析　 646

第二节　流式分子表型分析的临床应用　 646

二、人类免疫缺陷病毒检测　 648

三、EB病毒检测　 648

四、巨细胞病毒检测　 649

五、肿瘤细胞遗传学分析　 651

六、细胞因子测定　 651

第十九章　液相芯片技术　 653

第一节　生物芯片技术　 653

第二节　液相芯片　 655

一、LabMAPTM技术的原理　 655

二、基于LabMAP技术平台的合作产品　 657

四、液相芯片的技术优势　 658

三、流式微球阵列分析系统　 658

五、液相芯片的应用现状　 659

第三节　液相芯片技术的发展　 660

第四节　BD流式微球阵列分析介绍　 660

附录一　BD流式细胞仪及其数据管理软件系统简介　 667

一、BD FACSCalibur流式细胞仪　 667

二、BD LSR新型流式细胞仪　 668

三、BD FACSVantage SE分选增强型流式细胞仪　 669

四、FACSDiva流式细胞分析分选系统　 670

五、BD FACSAria流式细胞分选仪　 672

六、BD FACStation数据处理系统及主要软件　 673

附录二　英汉名词对照　 675