毒理学实验方法与技术 供预防医学类专业用pdf电子书版本下载

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第一章 毒理学实验基础 1

第一节 毒理学实验的原则和局限性 1

第二节 毒理学毒性评价试验的基本目的 3

第三节 动物实验的职业道德 4

第四节 实验动物的选择和管理 4

一、实验动物物种的选择 4

二、实验动物品系的选择 6

三、对实验动物微生物和寄生虫控制的选择 6

四、个体选择 7

五、实验动物的管理 8

第五节 受试物和样品的准备 8

第六节 实验动物的准备和操作 10

一、动物实验前的准备 10

二、实验动物的抓取和保定 11

三、实验动物的标示和识别 12

四、实验动物随机分组 13

第七节 实验动物染毒和处置 13

一、实验动物染毒 13

二、实验动物生物标本采集 17

三、实验动物疼痛评估 18

四、实验动物的麻醉 19

五、实验动物安死术 20

六、病理解剖和标本留取 22

第八节 毒理学试验的统计学基础 23

一、毒理学试验设计要点 23

二、毒理学试验的统计学要点 25

三、统计学意义、生物学意义和毒理学意义 27

第九节 转基因动物模型 29

一、转基因动物的培育原理与技术方法 29

二、转基因动物模型在毒理学中的应用 31

第二章 一般毒性试验 36

第一节 急性毒性试验 36

一、经口急性毒性试验 36

二、经呼吸道静式吸入急性毒性试验 39

三、经皮肤急性毒性试验 40

第二节 局部毒性试验 41

一、急性眼刺激试验 41

二、阴道黏膜刺激试验 44

第三节 亚慢性毒性实验 46

一、亚慢性经口毒性试验 46

二、亚慢性经皮毒性试验 50

第四节 慢性毒性试验 51

第三章 遗传毒性试验和致癌试验 54

第一节 遗传毒性试验 54

一、鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变试验 54

二、哺乳动物细胞基因突变试验 58

三、染色体畸变分析 62

四、小鼠骨髓细胞微核试验 65

第二节 致癌试验 67

一、哺乳动物细胞体外恶性转化试验 67

二、哺乳动物长期致癌试验 69

第四章 分子毒理学实验 72

第一节 生物大分子的分离与纯化 72

一、组织与细胞核酸的分离与纯化 72

二、组织与细胞蛋白质的分离与纯化 75

第二节 生物大分子损伤的检测 77

一、DNA链断裂检测 78

二、DNA交联检测 79

三、DNA加合物检测 82

四、DNA氧化产物检测 84

五、蛋白质氧化产物检测 86

第三节 基因突变和多态性检测 90

一、DNA序列分析 90

二、聚合酶链反应-单链构象多态性分析 92

三、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析 95

四、微卫星分析 97

五、荧光原位杂交 98

第四节 表观遗传效应检测 100

一、DNA甲基化检测 100

二、组蛋白修饰检测 102

三、microRNA检测 105

第五节 基因表达检测 106

一、差异表达基因分析 106

二、差异蛋白质组分析 111

第五章 细胞毒理学实验 114

第一节 体外细胞毒性试验的种类和选择依据 114

第二节 细胞形态学研究方法 116

一、普通显微镜观察方法 116

二、电子显微镜观测技术 118

第三节 细胞存活率测定 121

一、台盼蓝染色法 121

二、乳酸脱氢酶释放法 122

三、中性红染料滞留试验 122

四、碘化丙啶染色法 123

第四节 细胞增殖测定 124

一、细胞直接计数法 124

二、3 H-TdR掺入法 124

三、细胞周期分析 125

第五节 细胞代谢活力测定 125

一、MTT试验 125

二、Alamar Blue还原法 125

第六节 细胞凋亡的检测方法 126

一、形态学观察方法 126

二、生化特征检测方法 128

第七节 细胞自噬的检测 131

一、电子显微镜观察自噬体形成 131

二、GFP-LC3融合蛋白示踪自噬体形成—荧光显微镜定量检测法 132

三、蛋白印迹检测LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ 133

第八节 流式细胞仪分析技术 134

一、流式细胞仪的检测原理和应用 134

二、细胞周期检测 135

三、细胞凋亡检测 136

第九节 免疫细胞化学法 138

一、免疫细胞化学染色方法 138

二、免疫荧光细胞化学法 139

三、免疫酶细胞化学法 140

四、亲和免疫细胞化学法 141

第十节 激光共聚焦显微镜和荧光标记技术 143

一、激光扫描共聚焦显微镜 143

二、荧光标记技术 145

三、细胞内钙离子测定 146

第六章 血液毒理学研究方法 148

第一节 红细胞毒理学检测 148

一、网织红细胞计数 148

二、红细胞渗透脆性试验 149

三、高铁血红蛋白测定 149

四、变性珠蛋白小体测定 150

五、碳氧血红蛋白测定 151

六、铁动力学试验 152

第二节 白细胞和血小板毒理学检测 152

一、白细胞墨汁吞噬试验 152

二、血小板黏附试验 153

第三节 凝血功能毒理学检测 154

一、活化部分凝血活酶时间测定 154

二、血浆凝血酶原时间测定 155

三、血浆凝血酶时间测定 156

第四节 骨髓毒理学检测 157

一、骨髓细胞学检查 157

二、外源性脾结节测定 159

三、体内扩散盒琼脂培养技术 159

四、骨髓微循环观察 160

第七章 免疫毒理学研究方法 161

第一节 免疫细胞和免疫功能检测方法 161

一、固有免疫功能测定——NK细胞活性测定 161

二、固有免疫功能测定——巨噬细胞吞噬功能测定 162

三、体液免疫功能测定——ELISA法检测免疫球蛋白 163

四、体液免疫功能测定——溶血空斑试验 164

五、细胞免疫功能测定——淋巴细胞增殖试验 166

六、细胞免疫功能测定——迟发型超敏反应 167

七、免疫细胞表型分析——T淋巴细胞亚群测定 168

第二节 超敏反应检测方法 169

一、Ⅰ型超敏反应测定——豚鼠支气管激发试验 169

二、Ⅳ型超敏反应测定——局部淋巴结试验 170

第八章 生殖毒理学研究方法 172

第一节 生殖毒性试验 172

一、一代生殖毒性试验 172

二、两代（多代）生殖毒性试验 174

三、三段生殖毒性试验 175

第二节 环境内分泌干扰物筛选与评价方法 179

一、大鼠子宫增重试验 179

二、雌激素受体结合试验 180

三、雌激素受体转录激活试验 182

四、雄激素受体转录激活试验 183

五、甲状腺激素受体转录激活试验 184

六、H295R类固醇合成试验 186

七、非洲爪蟾变态试验 187

第三节 精子动力学分析 188

一、大鼠精子动力学分析 188

二、小鼠精子动力学分析 189

第四节 性激素水平分析 191

一、血清、睾丸或卵巢组织匀浆液中促卵泡激素检测 191

二、尿液中促卵泡激素检测 192

三、尿液中人绒毛膜促性腺激素检测 194

第九章 神经毒理学研究方法 197

第一节 神经毒性评价方法 197

一、迟发型神经毒性试验 197

二、形态学方法 198

三、生理学与生物化学方法 200

四、分子生物学方法 206

五、电生理实验方法 209

第二节 神经行为功能评价方法 211

一、FIOH测试组合 211

二、WHO-NCTB测试组合 211

三、NES方法 211

第三节 行为发育毒性测试方法 212

一、行为发育毒性测试组合 212

二、行为发育毒性研究组合 214

第十章 呼吸毒理学研究方法 219

第一节 整体实验研究方法 219

一、肺功能测定 219

二、呼吸道液分泌功能测定——小鼠酚红排泄法 222

三、在体BAL与BALF分析 222

四、大鼠气道黏液中肺表面活性物质的测定 224

第二节 离体试验法 225

一、离体肺灌流与分析 225

二、离体气管片实验法 226

三、胎鼠肺细胞原代培养与上皮细胞纯化 227

四、体外培养的肺巨噬细胞中LDH活性测定 228

第十一章 肝脏毒理学研究方法 230

第一节 肝损害的体内评价方法 230

一、化学性肝损伤动物模型 230

二、肝微粒体制备及蛋白质含量与相关酶活性测定 231

三、肝脏排泄功能测定 237

四、肝脏分泌功能测定 240

五、肝纤维化测定 242

第二节 肝损害的体外评价方法 243

一、体外离体肝灌流与分析 243

二、大鼠肝细胞原代培养试验方法 245

三、肝细胞膜流动性检测 247

四、肝细胞线粒体提取及线粒体活性测定 249

五、肝细胞线粒体膜通透性转运孔检测 251

六、肝细胞线粒体呼吸功能检测 253

七、肝细胞线粒体能量代谢功能检测 255

第十二章 肾脏毒理学研究方法 258

第一节 体内实验 258

一、尿液的一般生化指标 258

二、肾脏血流动力学和血流量分析 259

三、肾小球滤过率和肾脏清除率测定 261

四、肾脏的微穿刺和微灌注技术与应用 265

五、电子探针微分析法 267

第二节 体外试验 268

一、体外细胞培养与细胞毒性试验 268

二、肾膜囊泡的分离与应用 269

三、离体肾脏灌流 269

第十三章 心血管毒理学研究方法 271

第一节 心功能评价方法 271

一、心电图 271

二、心向量图 271

三、心搏出量 272

四、心阻抗血流图 272

五、超声心动图 272

六、磁共振技术 272

第二节 心血管毒理学体外研究方法 273

一、心肌细胞原代培养 273

二、大鼠血管内皮细胞原代培养 274

第三节 心血管毒理学体内研究方法 275

第十四章 皮肤毒理学研究方法 277

第一节 皮肤刺激性/腐蚀性试验 277

一、皮肤刺激性/腐蚀性试验 277

二、小鼠皮肤功能完整性试验 281

第二节 皮肤致敏和光毒性试验 282

一、皮肤致敏试验 282

二、小鼠耳肿胀试验 286

三、皮肤光毒性试验 287

四、皮肤光变态反应试验 289

五、体外3T3中性红摄取光毒性试验 290

第三节 皮肤接触性荨麻疹试验 292

一、非免疫接触性荨麻疹试验 292

二、免疫接触性荨麻疹试验 293

第四节 人体皮肤毒理学评价试验 294

一、人体斑贴试验 294

二、光斑贴试验 296

三、人体激发斑贴试验 297

四、人体皮肤试用试验 298

第十五章 毒理学试验替代方法 301

第一节 急性毒性试验替代方法 301

一、经口急性毒性试验-固定剂量法 302

二、经口急性毒性试验-急性毒性分级法 305

三、经口急性毒性试验-上下法 308

第二节 皮肤刺激/腐蚀性替代方法 311

一、体外皮肤腐蚀—透皮电阻试验 311

二、体外皮肤腐蚀—人类皮肤模型试验 312

三、皮肤腐蚀的体外膜屏障试验方法 313

第三节 皮肤吸收替代试验—皮肤吸收：体外方法 314

第四节 皮肤致敏试验替代方法 316

一、局部淋巴结试验—DA法 316

二、局部淋巴结试验—BrdU-ELISA法 317

第五节 眼刺激试验替代方法 318

一、牛角膜混浊和通透性试验 319

二、离体鸡眼试验 321

第六节 发育毒性替代试验 324

一、胚胎干细胞试验 324

二、微团培养试验 329

三、植入后全胚胎培养试验 331

主要参考文献 338