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专家述评1 1

科学研究的创新和艺术 1

一、创新性科学研究的概念和内涵 1

二、科学研究的本质 4

三、怎样产生科学研究的思路和顿悟的灵感 5

四、应该怎样进行科学研究 6

五、成熟的科研人员的特征 6

专家述评2 8

生物医学研究设计思路及基本要点 8

一、选题 8

二、设计 9

三、实验 10

第一篇 分子生物学方法及在口腔医学中的应用 15

第一章 分子生物学简介 15

第一节 分子生物学发展 15

一、现代分子生物学诞生 15

二、现代分子生物学建立 16

三、现代分子生物学发展 17

四、我国口腔分子生物学的发展 20

第二节 分子生物学在口腔医学领域的应用 21

一、基因克隆技术在口腔医学领域中的应用 21

二、特异的DNA扩增技术在口腔领域的应用 23

三、DNA序列分析在口腔领域的应用 23

四、口腔领域的基因文库 24

第三节 分子生物学相关数据库及其应用 25

一、分子生物学相关数据库概述 25

二、数据库在课题中的实际应用 28

第四节 蛋白质组学 37

一、蛋白质组学研究内容 37

二、蛋白质组学研究方法概述 37

三、牙蛋白质组学研究进展 38

第五节 生物信息学基础知识 40

一、人类基因组研究计划的由来 40

二、基因组研究计划的缺陷与蛋白质组学研究计划的提出 42

三、基因组研究计划与蛋白质组学研究对生命科学的影响 44

第二章 重组DNA及相关基本技术 47

第一节 质粒重组 48

一、概述 48

二、基本实验步骤 49

第二节 重组DNA转化大肠杆菌 50

一、大肠杆菌感受态细胞的制备 50

二、重组DNA转化大肠杆菌 52

第三节 单菌落扩增与小量DNA制备 54

第四节 重组质粒的筛选鉴定 57

一、α-互补鉴定重组质粒 57

二、杂交鉴定重组质粒 57

三、菌落PCR鉴定重组质粒 58

四、质粒PCR鉴定重组质粒 58

五、电泳及酶切鉴定重组质粒 58

第五节 凝胶电泳分离DNA片段及从凝胶中回收DNA 59

一、凝胶电泳分离DNA片段 59

二、从凝胶中回收DNA 61

第六节 大量质粒DNA制备 63

第三章 真核基因组DNA研究基本技术 67

第一节 哺乳类动物基因组DNA的提取 67

一、提取原则 67

二、基本技术方法 68

三、注意事项 69

第二节 基因组文库的建立与筛选 70

一、基因组文库的建立 70

二、基因组文库的筛选 71

第三节 Southern杂交 72

一、基本技术方法 73

二、注意事项 74

第四节 DNA双脱氧链终止法测序 74

一、基本原理 74

二、基本技术方法 75

三、注意事项 76

第四章 真核基因组RNA研究的基本技术 78

第一节 总RNA提取及mRNA分离 78

一、组织和细胞总RNA提取 79

二、RNA的定量和完整性分析 81

三、试剂的配制 81

四、操作步骤 81

五、注意事项 82

第二节 Northern杂交 82

一、RNA的分离提取 83

二、RNA甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 83

三、RNA的转膜 84

四、膜杂交 85

五、结果分析 85

第三节 原位杂交 86

一、样本的制备 86

二、杂交 87

三、杂交后处理 88

四、显示 88

五、原位杂交技术的对照实验 88

第四节 cDNA库建立及基因鉴定 89

一、细胞总RNA的提取和mRNA的分离 89

二、cDNA第一链的合成 90

三、cDNA第二链的合成 90

四、双链cDNA连接到噬菌体等载体并导入宿主菌中繁殖 90

五、用于cDNA克隆的λ噬菌体载体 91

六、目的cDNA克隆的筛选和鉴定 91

第五章 聚合酶链式反应（PCR）及相关技术 93

第一节 聚合酶链式反应的基本原理 94

一、PCR的过程 94

二、PCR的优化 95

三、PCR操作过程中的注意事项 95

第二节 快速扩增cDNA末端的PCR技术 96

一、3′ RACE和5′ RACE 97

二、新型RACE 98

第三节 长距离PCR 98

一、一般PCR的局限性 98

二、长距离PCR 98

第四节 反向PCR 100

一、简介 100

二、反向PCR的实验流程 100

三、反向PCR的不足 101

四、锅柄PCR 101

第五节 定量PCR 102

一、Ct值 102

二、溶解曲线 103

三、标准曲线 103

四、荧光化学试剂 103

第六节 用PCR产物制备克隆 104

第七节 mRNA差异显示PCR 106

一、mRNA差异显示技术简介 106

二、mRNA差异显示技术流程 106

三、DD-PCR的优缺点 107

第六章 基因芯片 109

第一节 基因芯片的基本原理 109

第二节 各种芯片介绍及应用 109

一、基因芯片的制备方法 110

二、样品的准备和标记 110

三、杂交 112

四、基因芯片信号的检测 112

第三节 结果分析 112

第七章 蛋白质研究的基本技术 114

第一节 哺乳类动物组织蛋白的提取与纯化 114

一、蛋白质的提取 114

二、蛋白质的分离与纯化 115

三、蛋白质的含量测定 116

第二节 Western杂交 117

一、原理 117

二、操作流程 117

第三节 酶联免疫吸附试验 119

一、原理 119

二、ELISA的类型 119

三、ELISA的操作要点 120

第四节 免疫组织化学 122

一、原理 122

二、免疫组织化学分类 122

三、免疫组织化学技术要点 123

第五节 单克隆抗体制备技术 125

一、单克隆抗体的概念 125

二、杂交瘤技术 125

三、单克隆抗体的生产 128

第六节 蛋白质双向电泳和质谱分析 129

一、原理 129

二、操作要点 130

第七节 蛋白质相互作用研究技术 132

第八章 基因功能与表达调控研究的基本方法 135

第一节 报告基因与基因调控元件的检测 135

一、报告基因的概念 135

二、报告基因在检测基因调控中的应用原理 137

第二节 PCR为基础的基因定点诱导突变 138

一、基本原理 139

二、方案 139

三、优缺点 140

第三节 蛋白质与核酸交互作用 141

一、DNA酶Ⅰ足迹法 142

二、凝胶阻滞分析 143

第四节 基因过表达的基本技术 146

一、哺乳动物细胞表达系统 146

二、转染技术与基因导入的主要方法 147

第五节 RNA干扰技术 149

一、RNA干扰的作用机制与应用 149

二、RNA干扰基本实验步骤 150

第九章 口腔组织细胞的培养及分选技术 152

第一节 口腔细胞的培养 152

一、细胞培养的基本技术及应用 152

二、口腔特殊细胞的培养与鉴定 159

第二节 口腔细胞的分选鉴定技术 163

一、细胞分选方法 164

二、口腔细胞的分选与鉴定 167

第十章 牙发育及细胞分化基因调控 173

第一节 牙发育中的信号传导及分子调控 173

一、生长因子信号传导及分子调控 173

二、转录因子在牙发育过程中的作用 178

三、牙发育分子调控网络间相互作用 179

第二节 牙相关干细胞分化分子调控 180

一、牙髓干细胞分化分子调控 180

二、牙周膜干细胞分化分子调控 182

三、非牙源性细胞牙向分化的分子调控 183

四、牙囊细胞分化分子调控 184

五、颈环干细胞和HERS细胞分化分子调控 186

第十一章 颌骨发育及改建的分子生物学基础 189

第一节 颌骨形态确定的分子生物学基础 189

一、四肢原基的结构和三个体轴的确定 189

二、决定颌骨（软骨）形态的基因 191

第二节 颌骨改建的分子生物学基础 193

一、影响骨改建的内分泌因素 193

二、影响与调控骨改建的局部因子 194

三、骨改建的分子调控环节及信号传导通路 196

四、颌骨改建的特点 202

第三节 口腔种植学骨增量技术及分子生物学基础 203

一、口腔种植学骨增量技术 203

二、骨增量技术的分子生物学基础 208

第十二章 唾液腺发育、唾液分泌的分子调控及唾液腺基因治疗 217

第一节 唾液腺发育的分子调控 217

一、唾液腺发育的位置及细胞类型的决定 217

二、唾液腺形态发生中的基因调控 218

三、哺乳动物类唾液腺发育分子调控机制 219

第二节 唾液分泌机制 222

一、唾液腺重要的离子通道和转运蛋白 222

二、唾液腺分泌机制 225

三、唾液硝酸盐、亚硝酸盐功能及分泌机制 227

第三节 唾液腺疾病的基因诊断及治疗 231

一、唾液腺肿瘤的基因诊断 231

二、唾液腺基因治疗及基因疗法 234

第十三章 口腔癌的分子生物学 242

第一节 口腔癌的起源及分子发病机制 242

一、物理化学致癌因素 242

二、生物致癌因素 244

三、遗传易感因素 245

四、口腔癌变学说 246

五、口腔癌前病变 248

第二节 口腔癌前病变和口腔癌发生的遗传学 251

一、染色体异常与微卫星不稳定 251

二、端粒与端粒酶异常 254

三、癌基因与抑癌基因 255

四、DNA的损伤与修复 259

五、癌前病变和口腔癌的基因突变 261

六、癌前病变和口腔癌的表观遗传学 263

第三节 口腔癌信号分子的异常 267

一、细胞增殖和凋亡 267

二、细胞分化和去分化 269

三、细胞生长因子 272

四、信号传导通路和转录因子 276

五、细胞周期检测点 279

第四节 口腔癌的浸润与转移 282

一、浸润与转移的过程及微环境 282

二、浸润与转移的分子机制 285

第五节 口腔癌的分子诊断及治疗靶点 294

一、分子诊断的意义和应用现状 294

二、基因表达谱 298

三、蛋白表达谱 305

四、分子诊断芯片 308

五、分子治疗靶点 310

第六节 口腔肿瘤干细胞 314

一、肿瘤干细胞学说 314

二、口腔肿瘤干细胞的初步分离及相关研究 317

三、口腔肿瘤干细胞相关的分子调控机制 318

四、肿瘤干细胞研究存在问题与展望 319

第十四章 口腔遗传病相关基因的定位、克隆与鉴定 321

第一节 概述 321

一、医学遗传学概念 321

二、口腔颌面部遗传病的特点 322

第二节 遗传病的分类 322

一、单基因病 322

二、线粒体遗传病 326

三、染色体病 327

四、多基因遗传病 327

第三节 单基因遗传病致病基因的确定 328

一、单基因遗传病的家系调查 328

二、致病基因定位 329

三、单基因遗传病分析中的几个概念 331

四、基因多态与突变 333

第四节 口腔遗传疾病与综合征 338

一、牙体硬组织的遗传性疾病 338

二、牙周组织的遗传性疾病 345

三、骨组织的遗传性疾病 347

四、先天性面裂 351

第二篇 口腔实验动物模型 357

第十五章 口腔实验动物模型概述 357

第一节 实验动物和动物模型研究的现状 357

一、实验动物学 357

二、实验动物 357

三、动物模型 358

四、口腔科学动物模型 359

第二节 实验动物的分类和质量的控制 359

一、实验动物的分类 359

二、实验动物的环境控制 360

三、实验动物饲养 362

四、实验动物的疾病 363

第三节 常用实验动物和动物疾病模型分类 368

一、常用实验动物 368

二、实验动物疾病模型分类 372

第十六章 肿瘤动物模型 374

第一节 人口腔肿瘤组织裸鼠移植瘤模型 374

一、肿瘤模型的建立 374

二、肿瘤模型的生物学特点 375

三、肿瘤组织块移植瘤模型在口腔肿瘤研究中的应用 375

第二节 肿瘤细胞系裸鼠移植瘤模型 376

一、肿瘤模型的建立 376

二、肿瘤模型的生物学特点 377

三、肿瘤模型在口腔肿瘤研究中的应用 378

第三节 化学诱导鼠口腔肿瘤模型 379

一、肿瘤模型的建立 379

二、肿瘤模型在口腔肿瘤研究中的应用 380

第四节 口腔癌转移模型 380

一、转移模型的建立 381

二、转移模型在口腔鳞癌中的应用 382

三、模型应用实例 383

第五节 口腔肿瘤转基因动物模型 384

一、转基因动物的原理和技术方法 384

二、转基因动物表型和基因型的鉴定 386

三、口腔肿瘤转基因动物模型介绍 387

第十七章 口腔常见感染性疾病的动物模型 390

第一节 龋病的动物模型 390

一、动物选择 390

二、模型建立与损害类型 391

三、龋齿动物模型样本制作及记录方法 392

四、龋病模型的应用 394

第二节 根尖周病动物模型 397

一、动物选择 397

二、模型建立方法 398

三、相关实验方法 398

四、生物学特性 399

五、根尖周病动物模型的应用 400

六、根尖周病动物模型应用实例 401

第三节 牙周病动物模型 401

一、动物选择 401

二、模型建立方法 403

三、生物学特征 405

四、牙周病动物模型的应用 406

第四节 牙龈增生动物模型 407

一、动物选择 407

二、模型建立方法及生物学特性 408

三、牙龈增生模型的应用 409

第十八章 口腔黏膜病动物模型 411

第一节 口腔白斑动物模型 411

一、动物选择 411

二、模型建立方法及模型生物学特性 412

三、动物模型应用实例 414

第二节 口腔白色念珠菌病动物模型 417

一、动物选择 417

二、模型建立方法和模型生物学特性 418

三、动物模型应用实例 419

第三节 天疱疮动物模型 426

一、动物选择 426

二、模型建立方法及模型生物学特性 427

三、动物模型应用实例 429

第四节 艾滋病口腔表征动物模型 432

一、动物选择 432

二、模型建立方法 433

三、动物模型应用实例 433

第十九章 颞下颌关节疾病动物模型 437

第一节 颞下颌关节紊乱病动物模型 437

一、实验动物选择及其生物学特性 437

二、模型建立与鉴定方法 440

三、动物模型的应用 444

第二节 颞下颌关节强直动物模型 445

一、建模方法与鉴定 446

二、动物模型的应用 446

第二十章 口腔颌面放射损伤动物模型 449

第一节 颌骨放射性骨坏死动物模型 449

一、动物选择 449

二、模型建立技术和方法 450

三、模型表现特点 451

四、动物模型在发病机制及治疗研究中的应用 451

第二节 唾液腺放射损伤动物模型 453

一、动物选择 453

二、模型建立技术和方法 453

三、模型的形态及功能特点 454

四、动物模型在预防和治疗基础研究中的应用 455

五、动物模型应用实例 456

第二十一章 唇腭裂动物模型 458

第一节 概述 458

一、小鼠的唇腭发育 458

二、模型分类与动物选择 459

第二节 自发性唇腭裂模型 460

一、概述 460

二、生物学特性 460

三、动物模型的应用 460

第三节 化学诱导性唇腭裂模型 461

一、概述 461

二、模型建立的方法 462

三、模型的评价 465

四、动物模型的应用 465

第四节 转基因动物模型 467

一、概述 467

二、动物模型的应用 467

第五节 外科手术人工造裂模型 468

一、唇裂模型 468

二、腭裂模型 468

三、模型的评价 469

第六节 唇腭裂研究的常用实验技术 469

一、5-溴脱氧尿嘧啶核苷法 469

二、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 470

三、腭板的体外器官培养 470

四、腭间充质细胞分离及培养法 470

五、全胚胎颅颌面骨骼染色法 471

六、LacZ染色法 471

第二十二章 基因敲除动物模型在口腔医学研究中的应用 473

第一节 概述 473

一、现状 473

二、原理和方法 474

三、基因型和表型鉴定 477

第二节 口腔颌面发育异常的动物模型 478

一、基因条件敲除研究牙及颌骨发育及疾病动物模型 478

二、基因条件敲除在牙发育研究中的应用 479

三、基底细胞痣样综合征 480

四、唇腭裂 483

第三节 MAL基因敲除动物模型 488

一、MAL基因与肿瘤的关系 488

二、MAL基因敲除鼠模型的建立 489

三、基因型和表型分析 489

附录 495

中英文名词对照索引 539