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第一章 离体器官的灌流技术 1

第一节 离体肺灌流技术 1

一、仪器装备 1

二、灌流液体 1

目录 1

三、通气气体 2

四、操作步骤 2

五、毒理学应用举例 2

第二节 离体心脏灌流技术 3

六、注意事项 3

一、仪器装置 4

二、灌流液的配制 5

三、心脏灌流的应用实例 6

第三节 离体肝脏灌流技术 6

一、仪器装置 7

二、灌流液的配制 8

三、离体肝脏灌流程序 8

四、灌流肝脏可用性的鉴定 8

五、离体肝脏灌流的应用及实例 9

第四节 人胎盘灌流技术 10

一、胎盘灌流 11

二、结果及计算 13

三、锌的体外人胎盘灌流研究 15

主要参考文献 17

第二章 细胞毒理学研究方法 20

第一节 细胞培养 20

一、培养细胞生物学 20

二、细胞培养技术 21

三、常用几种细胞的培养 26

第二节 培养细胞的生物特征与检测 29

一、培养细胞的常规观察 29

二、细胞染色体分析 31

三、培养细胞恶性转化 35

四、大鼠气管上皮细胞转化试验 38

五、鸡胚绒毛膜（抗）新生血管形成试验 40

主要参考文献 43

一、光镜切片的制备 45

第一节 光镜和电镜的制片技术 45

第三章 组织学方法 45

二、常用组织学染色法 48

三、电镜超薄切片的制备 51

第二节 酶组织化学技术 53

一、水解酶 53

二、氧化酶与过氧化物酶 59

三、脱氢酶和一氧化氮合酶 61

第三节 免疫组织（细胞）化学技术 63

一、荧光标记免疫组织化学法 64

二、酶标记免疫组织化学法 65

三、金标记免疫组织化学法 69

四、免疫电子显微镜技术 71

主要参考文献 73

第四章 细胞凋亡常用的研究方法 74

第一节 概述 74

第二节 细胞凋亡的形态学评价 76

一、倒置显微镜和光学显微镜观察法 76

二、荧光显微镜观察法 77

三、透射电子显微镜观察 79

一、磷脂酰丝氨酸外化分析（Annexin V联合PI法） 80

第三节 细胞凋亡时质膜的改变 80

二、Hoechst 33342PI双染色法 81

第四节 细胞凋亡时DNA的改变 81

一、DNA Ladder测定 81

二、大分子染色体DNA片段的测定 83

三、凋亡细胞DNA含量的流式细胞仪分析 84

四、DNA片段原位标记 85

五、凋亡细胞断裂核小体DNA的免疫化学测定 88

一、线粒体跨膜电位的检测 89

第五节 细胞凋亡时线粒体膜电位变化的检测 89

二、与线粒体膜电位有关的因素 90

第六节 其他 90

一、Caspase-3活性的检测 90

二、PARP活性的测定 93

三、人类凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析 94

四、凋亡相关基因的检测 95

主要参考文献 96

一、红细胞膜的分离与鉴定 97

第一节 细胞膜的制备 97

第五章 亚细胞组分的制备与功能检测 97

二、肝细胞膜的分离与鉴定 99

三、脑突触体膜的分离制备 101

第二节 肾小管和小肠上皮细胞刷状缘膜的制备 102

一、肾小管上皮细胞刷状缘膜的分离与鉴定 102

二、小肠上皮细胞刷状缘膜的分离与鉴定 106

第三节 线粒体的分离制备 107

一、脑线粒体的分离及鉴定 108

三、肝脏线粒体的分离制备 109

二、心脏线粒体的分离制备 109

四、肾脏线粒体的分离制备 110

第四节 微粒体的制备及微粒体酶系的测定 110

一、微粒体的分离制备 110

二、微粒体混合功能氧化酶系活性的测定 111

第五节 溶酶体和过氧化氢酶体的分离制备 112

一、原理 112

二、仪器与试剂 112

四、溶酶体纯度鉴定 113

三、分离技术 113

主要参考文献 114

第六章 蛋白质（酶）的分离与纯化 116

第一节 蛋白质（酶）的粗分离 116

一、细胞破碎和蛋白质（酶）的溶剂提取方法 116

二、盐析方法 118

三、有机溶剂沉淀方法 121

一、吸附层析方法 122

二、离子交换层析方法 122

第二节 蛋白质（酶）的层析纯化 122

三、凝胶过滤层析方法 124

四、亲和层析方法 127

五、金属螯合层析方法 130

第三节 电泳技术分离纯化蛋白质（酶） 132

一、醋酸纤维素电泳 132

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳 134

三、双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 136

主要参考文献 138

第一节 酶的功能测定 139

第七章 蛋白质（酶）的功能测定 139

一、胆碱酯酶的活性测定 140

二、O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶的测定 143

三、超氧化物歧化酶的测定 145

四、细胞色素P450单加氧酶测定 146

五、乳酸脱氢酶同功酶测定 148

六、附：蛋白质定量测定（Lowry法） 149

第二节 蛋白质受体功能的测定 151

一、受体放射分析法 151

二、基因重组检测系统 152

第三节 蛋白加合物测定 153

一、血红蛋白加合物的测定 154

二、白蛋白加合物的测定 155

第四节 蛋白质（酶）功能研究新进展 157

一、质谱技术 157

二、酵母双杂交技术 158

三、蛋白芯片技术 159

主要参考文献 160

一、核酸杂交的基本原理——核酸的变性和复性 162

第一节 核酸的印迹杂交 162

第八章 分子毒理学基本技术 162

二、核酸杂交的重要工具——核酸探针 163

三、常用的核酸分子杂交技术 165

第二节 蛋白质印迹杂交 169

一、蛋白质样品的制备 169

二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 170

三、蛋白质的电转移 171

四、蛋白质的杂交 172

第三节 聚合酶链式反应 173

一、参与PCR反应体系的因素及其作用 174

二、PCR反应温度和循环次数 176

三、常用的几种PCR反应 177

第四节 基因的序列测定 179

一、双脱氧链末端终止法 179

二、化学（裂解）法 181

第五节 重组DNA技术 181

一、基因工程的重要工具——酶类 182

二、基因工程的重要工具——载体 183

三、获得目的基因 185

四、目的基因与载体的连接 187

五、重组子导入受体菌 189

六、重组子的筛选与鉴定 189

七、重组体在宿主细胞中表达与调控 190

八、表达产物辊辊——蛋白质的分离与纯化 193

主要参考文献 194

第九章 分子毒理学技术的应用 195

第一节 单细胞凝胶电泳技术 195

一、检测机理 195

二、实验程序及方法 195

三、结果评价 197

四、SCGE实验中的注意事项 197

五、SCGE在毒理学中的应用 198

第二节 荧光原位杂交（FISH）技术 199

一、基本原理 199

二、FISH技术的发展 199

三、毒理学研究中应用的FISH技术 201

五、FISH操作举例 202

四、FISH技术中的注意事项 202

第三节 PCR-SSCP技术 203

一、基本原理 204

二、基本实验过程 204

三、影响因素 205

四、银染显色法 205

五、PCR-SSCP分析在毒理学中的应用 206

第四节 mRNA差异显示PCR技术 206

二、主要操作步骤及注意事项 207

一、基本原理 207

三、该技术的不足之处及弥补办法 208

四、mRNA差异显示法在毒理学中的应用 209

主要参考文献 209

第十章 基因芯片技术 210

第一节 基因芯片的原理和合成方法 210

一、基因芯片的原理 210

二、基因芯片的离片合成法 210

三、基因芯片的在片合成法 211

五、基因芯片的微排列制作 212

六、基因芯片的生化反应 212

四、基因芯片的基质 212

七、基因芯片的结果检测与分析 213

第二节 基因芯片的分类 213

一、载体材料分类 213

二、点样方式分类 214

三、DNA种类分类 214

四、用途分类 215

五、新近发展的两种芯片技术 215

一、在基础医学研究方面的应用 216

第三节 基因芯片的广泛应用 216

二、在药物筛选方面的应用 217

三、在指导用药方面的应用 217

四、在临床诊断方面的应用 217

五、在卫生毒理学研究中的应用 217

六、在其他方面的应用 219

主要参考文献 219

第一节 细胞间缝隙连接通讯的检测 220

一、划痕标记染料示踪技术（SLDT） 220

第十一章 信号传递与细胞通讯 220

二、显微注射染料示踪技术 222

三、代谢合作检测法 224

第二节 细胞膜受体的分离与纯化 225

一、概述 225

二、受体溶脱 226

三、受体纯化 228

第三节 第二信使系统 230

一、磷脂酶A2 230

二、蛋白激酶C活性测定 232

三、环核苷酸 233

四、三磷酸肌醇的检测 234

五、一氧化氮及合酶的测定 235

六、二酰甘油的测定 241

七、细胞内pH值的测定 243

主要参考文献 245

第十二章 免疫毒理学方法 246

第一节 B淋巴细胞功能检测方法 246

一、空斑形成细胞检测方法 246

二、血清溶血素测定 249

一、小鼠外周血T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶（ANAE）染色法 250

第二节 T淋巴细胞功能检测方法 250

二、T淋巴细胞亚群的检测 252

三、T淋巴细胞增殖功能测定 254

四、迟发型超敏反应试验 256

第三节 巨噬细胞功能测定 256

一、巨噬细胞非特异性吞噬功能测定 257

二、巨噬细胞Fc受体功能检测 258

三、肿瘤坏死因子（TNF）的测定 260

四、一氧化氮生成的测定 261

第四节 中性粒细胞和NK细胞活性测定 262

一、中性粒细胞吞噬功能的测定 262

二、NK细胞活性的测定 262

第五节 细胞因子的测定 264

一、白细胞介素1（IL-1）的检测 264

二、白细胞介素2（IL-2）的检测 265

第六节 过敏反应和自身免疫 266

一、皮肤致敏试验 266

三、耳淋巴结试验 268

二、小鼠耳肿胀试验 268

四、腘窝淋巴结实验 269

第七节 宿主抵抗力试验 270

一、肿瘤细胞攻击试验 271

二、对细菌的抵抗试验 272

三、对旋毛虫螺旋体的抵抗试验 274

主要参考文献 275

第一节 动物行为评价方法 276

一、一般行为毒理学方法 276

第十三章 行为毒理学方法 276

二、行为致畸学方法 279

三、神经科学的发展与行为毒理学 283

第二节 人的行为功能评价方法 289

一、发展概况 289

二、研究方法 290

主要参考文献 292

第十四章 毒理学指标的统计分析方法 294

第一节 联合作用的统计方法 294

一、比值法 294

三、等概率和曲线法 295

二、效应图解法 295

四、Logistic图解法 297

第二节 存活寿命表的统计指标 299

一、存活寿命表的统计指标 299

二、计算步骤 300

第三节 生殖发育试验的统计指标 301

一、试验动物与剂量 301

二、生殖发育的统计指标 301

一、概述 302

第四节 致突变试验的统计指标 302

三、数据处理和结果评价 302

二、实例 305

第五节 致癌试验的数学模式示例 307

一、几项指标 307

二、实例 307

第六节 行为毒理学 308

第七节 毒理学相关学科的统计分析指标 310

一、数据类型 310

二、体重与器官重量 311

三、临床化学 312

四、血液学 313

五、组织病理学损害的发生率 314

第八节 样品与染毒方式的统计问题 315

一、经食物和空气染毒分析 315

二、悬浮颗粒物统计量 315

第九节 对毒理学数据处理中常见错误的分析 317

三、非参数资料不能用参数统计方法分析 318

四、配对关系 318

二、随机分组不均衡 318

一、统计学结论的描述性错误 318

五、计量资料中方差是否整齐及计数资料中样本是否足够大 319

六、有顺序关系的计数资料 319

七、有效数字的取舍 319

主要参考文献 320

第十五章 毒理学良好实验室规范 322

一、概述 322

二、良好实验室规范 323

三、附言 326

主要参考文献 326