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第一章 流式细胞分析技术原理 1

第一节 流式细胞仪的组成部件和工作原理 1

一、流式细胞仪的组成部件 1

二、流式细胞仪的工作原理 2

第二节 流式细胞分析技术的相关概念 3

一、前向散射与侧向散射 3

二、荧光信号 3

三、流式通道 4

四、流式图 5

五、光谱重叠与荧光补偿 6

第三节 流式细胞分析技术的基本原理 7

一、阈值设定 7

二、光电倍增管电压设定 8

三、补偿调节 9

四、门与设门 10

五、分析原理 11

第二章 流式细胞分析标本处理 12

第一节 流式细胞分析标本来源与制备 12

一、外周血标本 12

二、骨髓标本 13

三、实体瘤组织标本 13

四、脱落细胞标本 14

五、培养细胞标本 14

第二节 流式细胞分析对照的设置 14

一、阴性对照的设置 14

二、阳性对照的设置 16

三、空白对照的设置 16

四、补偿对照的设置 17

第三节 流式细胞分析标记抗体的选择 17

一、荧光染料 17

二、荧光抗体 19

三、荧光抗体的选择 19

四、荧光抗体滴度的选择 20

第三章 流式细胞分析仪操作规程 21

第一节 FACSCalibur流式细胞仪的操作规程 21

一、开机 21

二、校准 21

三、运行软件 24

四、样品检测 26

五、关机 29

六、仪器保养 30

七、数据分析 31

第二节 FACSCantoⅡ流式细胞仪的操作规程 32

一、开机 32

二、校准 33

三、FACSCanto Clinical六色免洗淋巴细胞亚群检测及HLA-B27分析 35

四、BD FACSDiva软件进行多色获取和分析 38

五、关机 40

六、仪器保养 41

第四章 急性白血病免疫分型及应用 42

第一节 急性白血病诊断及分型 42

一、急性白血病的FAB分型 42

二、急性白血病的MIC分型 43

三、急性白血病2008版WHO分类 43

第二节 正常骨髓造血细胞分化发育的抗原表达规律 45

一、正常粒系细胞和单核系细胞的抗原表达规律 45

二、正常红系细胞的抗原表达规律 46

三、正常巨核细胞的抗原表达规律 46

四、正常B淋巴细胞的抗原表达规律 46

五、正常T淋巴细胞的抗原表达规律 46

第三节 急性白血病免疫分型的基本原理及检测方法 47

一、急性白血病免疫分型的基本原理 47

二、急性白血病免疫分型的检测方法 52

三、样本 55

四、细胞标记 55

五、流式细胞仪检测 56

六、数据分析及结果解读 56

七、临床意义 58

第四节 急性髓系白血病的免疫表型 58

一、急性髓系白血病伴重现性细胞遗传学异常 58

二、急性髓系白血病（非特指） 62

三、原始浆细胞样树突细胞肿瘤 73

第五节 急性淋巴细胞白血病的免疫表型 73

一、B淋巴母细胞白血病／淋巴瘤 74

二、T淋巴母细胞白血病／淋巴瘤 79

第六节 急性系列不明型白血病的免疫表型 82

一、急性未分化型白血病 83

二、混合表型急性白血病伴t（9;22）（q34;q11.2）；BCR-ABLl 83

三、混合表型急性白血病伴t（v;11q23）；MLL重排 84

四、混合表型急性白血病，B／髓，非特殊类型 84

五、混合表型急性白血病，T／髓，非特殊类型 84

六、NK细胞淋巴母细胞白血病／淋巴瘤 85

第七节 流式细胞术检测急性白血病微小残留 85

一、流式细胞术检测微小残留病的方法学特点 85

二、流式细胞术检测微小残留病的方法 86

三、微小残留病检测的临床应用 87

第五章 淋巴细胞增殖性肿瘤的免疫分型及应用 91

第一节 淋巴细胞增殖性肿瘤流式免疫分型的检测方法 91

一、主要仪器 91

二、主要试剂 91

三、样本 92

四、细胞标记 92

五、流式细胞仪检测 92

六、数据分析及结果解读 92

第二节 成熟B细胞肿瘤 93

一、2008版WHO对成熟B细胞肿瘤的分类 93

二、成熟B细胞肿瘤免疫表型分析的基本思路及策略 94

三、常见的成熟B细胞肿瘤的免疫表型 95

第三节 成熟T/NK细胞肿瘤 107

一、2008版WHO对成熟T/NK细胞肿瘤的分类 107

二、成熟T/NK细胞肿瘤免疫表型分析的基本思路及策略 108

三、常见的成熟T/NK细胞肿瘤的免疫表型 109

第六章 多发性骨髓瘤免疫分型及应用 122

第一节 多发性骨髓瘤概述及流式细胞术免疫分型的应用 122

第二节 多发性骨髓瘤免疫分型 125

一、多发性骨髓瘤FCM检测样本的制备 125

二、多发性骨髓瘤FCM检测 125

三、多发性骨髓瘤FCM免疫表型 130

第三节 多发性骨髓瘤微量残留病流式细胞术检测 134

一、流式细胞术检测MM微小残留病变 134

二、MRD FCM检测注意事项 135

三、与其他MRD检测方法的比较 136

第四节 多发性骨髓瘤免疫表型流式细胞术检测结果评估 137

一、浆细胞比例问题 137

二、恶性浆细胞病的临床分类问题 137

第七章 细胞凋亡的检测与应用 140

第一节 细胞凋亡 140

一、细胞凋亡概述 140

二、细胞凋亡的生物学特征 141

三、细胞凋亡发生过程与机制 142

四、细胞凋亡研究意义 144

第二节 细胞凋亡的流式细胞术检测方法 144

一、活化的caspase 3检测法 144

二、Annexin-V/PI或Annexin-V/7-AAD法 146

三、JC-1法、Apo2.7法（线粒体跨膜电位检测法） 148

四、TUNEL法（原位末端转移酶标记法） 150

五、DNA含量分析法 152

六、SYTO/PI双染色法 154

七、细胞凋亡相关基因蛋白的流式细胞术检测 155

第三节 细胞凋亡在医学研究中的应用 156

一、细胞凋亡与疾病发生密切相关 156

二、调节细胞凋亡治疗疾病 157

第四节 细胞凋亡研究进展 157

第八章 细胞免疫功能分析与应用 160

第一节 淋巴细胞及其亚群分析 160

一、淋巴细胞发育及其亚群分类 160

二、淋巴细胞免疫表型分析 162

第二节 淋巴细胞几种常见功能亚群分析 165

一、辅助性T细胞和诱导性T细胞 166

二、调节性T细胞 170

三、细胞毒性T细胞和抑制性T细胞 173

四、初始T细胞和记忆T细胞 175

五、活化T细胞 177

第三节 机体免疫功能监测的质量控制 180

第九章 细胞因子的检测与应用 181

第一节 细胞因子的基本概念与应用 181

一、基本概念 181

二、临床应用 181

第二节 检测方法 183

一、胞内染色法 183

二、液相芯片技术与BD流式微球阵列分析 187

三、方法学评价 190

第十章 PNH阳性克隆的筛查与应用 192

第一节 基于CD55和CD59分子表达的PNH筛查方法 192

一、白细胞表面CD55和CD59分子的测定 192

二、红细胞表面CD55和CD59分子的测定 196

第二节 基于FLAER的PNH筛查方法 197

第三节 流式诊断和监测PNH及相关疾病的指南 199

一、PNH实验的临床指征 200

二、流式细胞术检测PNH 200

第十一章 HLA-B27的流式检测与应用 203

第一节 概述 203

第二节 HLA-B27检测方法 203

一、补体依赖性微量淋巴细胞毒法（CDMA） 204

二、酶联免疫测定试验（ELISA） 204

三、引物特异性聚合酶链反应（SSP-PCR） 205

四、流式细胞术（FCM）法 205

第三节 HLA-B27检测的临床应用 209

一、HLA-B27检测在AS诊断中的应用价值 209

二、HLA-B27在其他脊柱关节病中的应用 210

三、HLA-B27在急性葡萄膜炎中的应用 210

四、HLA-B27与感染性疾病的关系 210

第十二章 造血干细胞的流式分析及应用 211

第一节 概述 211

一、造血干细胞概念 211

二、造血干细胞的生物学特性 211

第二节 造血干细胞检测方法 212

一、动物体内重建实验 212

二、体外克隆形成实验 213

三、造血干细胞表面标志测定 213

第三节 造血干细胞的计数 214

一、ISHAGE法检测CD34+细胞 215

二、ProCOUNT造血干细胞计数 217

第四节 造血干细胞的临床应用 221

一、造血干细胞移植 221

二、造血干细胞可作为基因治疗的靶细胞 222

附录 常用溶液的配置 224