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第一章 绪论 1

一、实验须知 1

二、实验记录及实验报告的书写 2

第二章 生化实验基本技术 4

一、生化实验基本操作 4

二、生化常用实验样品的制备 7

三、离心技术 9

四、分光光度法 12

五、电泳技术 17

六、层析法 22

七、生化自动分析技术 30

第三章 生物大分子实验技术 36

一、蛋白质分析技术 36

（一）分光光度技术测定蛋白质含量 36

实验一 紫外分光光度法 36

实验二 Folin-酚试剂法（Lowry法） 38

实验三 双缩脲法 40

实验四 考马斯亮蓝法 41

实验五 二喹啉甲酸（BCA）法 43

实验六 血清总蛋白、清蛋白定量及清／球比值测定（溴甲酚绿法） 44

（二）电泳技术鉴定蛋白质 45

实验七 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳（CAME） 46

实验八 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳 48

实验九 细胞蛋白质电泳鉴定 50

（三）蛋白质分子量测定 52

实验十 SDS-PAGE法测定蛋白质分子量 52

实验十一 梯度凝胶电泳法测定蛋白质分子量 56

实验十二 凝胶过滤法测定蛋白质分子量 58

（四）蛋白质等电点测定 60

实验十三 沉淀法测定蛋白质等电点 61

实验十四 薄层等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点 62

（五）层析技术分离蛋白质或氨基酸 64

实验十五 分子筛层析（凝胶过滤法） 64

实验十六 CM-52离子交换层析法分离蛇毒蛋白质 66

实验十七 DNS-氨基酸聚酰胺薄层层析 68

二、酶分析技术 70

（一）酶活性测定 70

实验十八 碱性磷酸酶（AKP）活力测定 71

实验十九 唾液淀粉酶活性测定（碘-淀粉比色法） 74

实验二十 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性测定（连续监测法） 75

实验二十一 酶浓度对酶促反应的影响 78

（二）酶促反应动力学实验 78

实验二十二 碱性磷酸酶Km值的测定 79

实验二十三 pH对酶促反应的影响 81

实验二十四 温度对酶促反应的影响 82

实验二十五 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 83

（三）同工酶测定 84

实验二十六 乳酸脱氢酶同工酶的分析（琼脂糖电泳法） 85

实验二十八 碱性磷酸酶同工酶的电泳分离及鉴定 87

实验二十七 乳酸脱氢酶同工酶分析（醋酸纤维电泳法） 87

三、核酸分析技术 89

实验二十九 外周血白细胞DNA提取（微量法） 89

实验三十 全血DNA的提取与鉴定 90

实验三十一 DNA的琼脂糖凝胶电泳 91

实验三十二 真核细胞总RNA的制备 93

实验三十三 植物组织总RNA的提取（Thomas' RNA extraction） 94

实验三十四 质粒DNA的提取与鉴定（碱法快速小量提取） 96

一、糖代谢 99

实验三十五 总糖测定（3,5-二硝基水杨酸比色法） 99

第四章 物质代谢 99

实验三十六 血糖测定（葡萄糖氧化酶法） 100

实验三十七 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 102

实验三十八 红细胞中糖的酵解作用 103

实验三十九 尿糖的定性检测 106

二、脂代谢 107

实验四十 血清甘油三酯测定（乙酰丙酮显色法） 107

实验四十一 血清甘油三酯测定（酶法，一步终点比色法） 109

实验四十二 总胆固醇测定（硫磷铁法） 111

实验四十三 血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法） 112

实验四十四 高密度脂蛋白（HDL）的测定（酶法） 114

实验四十五 载脂蛋白apoA1测定（免疫透射比浊法） 115

实验四十六 载脂蛋白apoB测定（免疫透射比浊法） 117

实验四十七 apoA1与apoB的同时测定（免疫火箭电泳法） 118

实验四十八 尿酮体的定性检测 120

三、蛋白质代谢 121

实验四十九 血清尿素测定（二乙酰一肟法） 121

实验五十 血清（或血浆）肌酐测定 123

实验五十一 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力测定 125

实验五十二 血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活力测定 128

实验五十三 总胆红素及直接胆红素测定 130

实验五十四 尿胆（素）原定性检验（改良欧氏法） 132

实验五十五 尿胆素定性检验（改良许氏法） 133

实验五十六 尿胆红素定性检验 133

实验五十七 尿蛋白质定性检测 134

四、生物氧化 135

实验五十八 乳酸脱氢酶（LDH）及其辅酶的作用 135

实验五十九 细胞色素体系的作用及抑制 137

实验六十 红细胞ATP含量测定 138

实验六十一 维生素B1的测定（荧光法） 140

五、维生素及核苷酸代谢 140

实验六十二 维生素B1的测定（重氮苯磺酸法） 141

实验六十三 维生素C的定量 142

实验六十四 红细胞叶酸的测定（改良微生物法） 144

实验六十五 血清尿酸的检测（磷钨酸还原法） 146

实验六十六 5′-核苷酸酶活力测定 148

第五章 遗传信息传递的分析技术 152

一、PCR基本原理及其相关技术 152

实验六十七 PCR基本原理及实验设计 152

实验六十八 逆转录PCR（RT-PCR） 155

实验六十九 PCR及其产物限制性片段长度多态性分析 157

二、基因克隆及表达分析 159

实验七十 PCR产物与pGEM-T重组克隆 159

实验七十一 表达载体的构建及转化 163

实验七十二 克隆基因的诱导表达及检测 167

实验七十三 RNA电泳及Northern Blot 169

实验七十四 生物素标记探针的杂交及检测 172

实验七十五 蛋白印迹（Western Blot） 175

第六章 疾病的分子诊断 177

实验七十六 点突变的检测——SSCP-PCR 177

实验七十七 p53突变热点的检测 178

实验七十八 X-脆性综合征的检测 180

实验七十九 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）突变热点的检测 182

实验八十 镰型红细胞贫血检测（PCR-RFLP） 183

实验八十一 α-地中海贫血点突变的检测 185

第七章 综合实验及课题构思 187

实验八十二 血清γ-球蛋白的提取及鉴定 187

实验八十三 质膜的提取及鉴定 189

实验八十四 多肽链N-末端氨基酸分析（DNFB法） 193

实验八十五 科研课题构思 195

实验八十六 实验设计 197

一、生物大分子结构变化与疾病 199

实例一 蛋白质结构变化引起疾病 199

第八章 有关临床疾病生化机制的探讨及分析 199

实例二 核酸结构变化引起疾病 200

实例三 酶含量变化与疾病 200

实例四 酶结构变化与疾病 201

二、代谢异常与疾病 202

实例五 糖代谢异常与Ⅰ型肝糖原累积症 202

实例六 糖代谢异常与糖尿病合并酮症酸中毒 203

实例八 脂代谢异常与动脉粥样硬化 204

实例七 脂代谢异常与脂肪肝 204

实例九 生物氧化异常与酶缺陷及某些重要化合物的失衡所致的线粒体病 205

实例十 生物氧化异常与呼吸链和氧化磷酸化的抑制 206

实例十一 氨基酸代谢异常与苯丙酮尿症 207

实例十二 氨基酸代谢异常与肝性脑病 208

实例十三 核苷酸代谢异常与Lesch-Nyhan综合征 209

三、遗传信息表达异常与疾病 210

实例十四 DNA修复异常与疾病 210

实例十五 RNA转录异常与乳腺癌与基因转录表达异常 212

实例十六 蛋白质翻译修饰异常与早发性阿尔茨海默病 213

实例十七 基因表达调控异常与疾病 215

四、其他生化异常与疾病 215

实例十八 血液生化异常与疾病 215

实例十九 肝生化异常与疾病 216

实例二十 维生素不足与佝偻病 217

实例二十一 维生素不足与坏血病 218

附录 221

附录一 缓冲溶液的配制 221

附录二 常用蛋白质分子量及等电点 228

附录三 一些常用凝胶技术数据 229

附录四 硫酸铵饱和度的常用表 232

附录五 常用酸碱指示剂 232

附录六 常用原子量表 233

附录七 试剂的配制及其分级 234

附录八 易变质及需要特殊方法保存的试剂 235

附录九 实验误差及数据处理 235

附录十 法定计量单位 241

附录十一 希腊字母表 243

附录十二 常用临床生化检验项目及正常值范围 244

主要参考书目 245