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1 神经生物学实验方法学 1

1.1科学思维方法学 1

1.1.1科学技术的历史动力 1

1.1.2辩证地去求索 3

1.1.3辩证地去思考 7

1.1.4辩证地去验证 17

1.1.5辩证地去训练 24

1.2实验设计方法学 29

1.2.1选题 30

1.2.2专业设计 44

1.2.3对照设计 54

1.2.4统计设计 63

1.3实验分析方法学 79

1.3.1数据整理 79

1.3.2统计分析 88

1.3.3专业分析 100

1.3.4论文书写 109

1.4电刺激方法学 117

1.4.1电刺激的基本原理 117

1.4.2电刺激的物理特性 119

1.4.3神经制备的生物特性 123

1.4.4选择性刺激 127

1.4.5刺激电流扩散 132

1.5电记录方法学 136

1.5.1容积导体内记录 136

1.5.2诱发电位记录 143

1.5.3单单位记录 150

1.5.4计算机辅助的记录 158

1.5.5细胞内记录 161

1.5.6膜片钳记录 174

1.5.7神经纤维速度谱测定 178

1.5.8轴突分叉点位置测定 182

1.5.9压脚痛阈测定法 187

1.6神经化学方法学 190

1.6.1组织细胞破碎法 190

1.6.2突触体制备 193

1.6.3电泳法 198

1.6.4色谱法 203

1.6.5高效液相色谱法 213

1.6.6微透析技术 222

1.7化学神经解剖学方法学 229

1.7.1免疫细胞化学技术 229

1.7.2原位杂交组织化学技术 239

1.7.3受体定位技术 248

1.7.4免疫电子显微镜技术 250

1.8神经形态学方法学 253

1.8.1辣根过氧化物酶示踪技术 253

1.8.2荧光素示踪技术 260

1.8.3放射性核素示踪技术 262

1.8.4顺行示踪技术 269

1.8.5激光扫描共焦显微镜技术 271

1.8.6定量及分析细胞学技术 278

1.9分子神经生物学方法学 282

1.9.1核酸分子杂交技术 282

1.9.2蛋白质印迹法 290

1.9.3 DNA重组技术 296

1.9.4聚合酶链反应技术 306

1.9.5 DNA序列测定技术 313

1.9.6 mRNA差异显示技术 323

1.9.7基因芯片技术 329

1.9.8转基因动物技术 334

1.10神经行为学实验方法学 338

1.10.1行为学实验的神经基础及常用动物 339

1.10.2常用的高级脑功能研究方法 340

1.10.3常用痛行为研究方法 348

1.11脑成像 352

1.11.1计算机辅助体层摄影 352

1.11.2磁共振成像 356

1.11.3放射性核素断层成像 362

1.11.4超声成像 365

2 神经生物学实验与示教 368

2.1神经生理学实验 368

2.1.1家兔外周神经干复合动作电位记录 368

2.1.2家兔后肢传入神经纤维速度谱 370

2.1.3扩张肛门对猫骶神经后根放电的影响 372

2.1.4大鼠脊髓节段性及下行性诱发电位记录 374

2.1.5脊髓节段性缺血时脊髓诱发电位的变化 375

2.1.6家兔大脑皮质体感诱发电位记录 377

2.1.7脑缺血对家兔大脑皮质诱发电位的变化 379

2.1.8蟾蜍离体脊神经节神经元静息膜电位与动作电位记录 381

2.1.9大鼠培养脑细胞膜的电学特性 384

2.1.10大鼠在体脊神经节神经元动作电位的细胞内记录 386

2.1.11猫脊髓背索突触后神经元的细胞内与细胞外记录 388

2.1.12猫脊颈束-背索突触后神经元的顺、逆向反应 390

2.1.13大鼠脊髓背角神经元电活动的细胞内记录 392

2.1.14大鼠脊孤束-背索突触后神经元对躯体与内脏传入的反应 394

2.1.15家兔中缝大核对外周传入刺激的反应 397

2.1.16家兔丘脑腹后外侧核电活动的细胞外记录 398

2.1.17躯体内脏传入在脊髓背角的相互作用 400

2.1.18缺氧预适应鼠脑提取液对ATP敏感性钾电流的作用 401

2.2神经化学实验 408

2.2.1缺氧耐受小鼠脑匀浆提取液的抗缺氧作用 408

2.2.2急性重复缺氧小鼠脑单胺类含量的变化 411

2.2.3不同强度躯体刺激对家兔脑脊液中Ca2＋、Mg2＋含量的影响 414

2.2.4不同强度躯体刺激对家兔脑脊液中单胺类含量的影响 417

2.2.5兔脑内腺苷的微透析法测定 420

2.2.6缺氧对小鼠大脑皮质突触体LDH透出率的影响 421

2.2.7低氧预适应小鼠脑匀浆提取液对PC12细胞的保护效应 423

2.3神经组织免疫细胞化学实验 425

2.3.1延髓背角和中缝大核内的P物质样阳性结构——免疫细胞化学或免疫荧光细胞化学染色法 425

2.3.2大鼠三叉神经节内阿片μ受体与降钙素基因相关肽共存的阳性神经元——免疫荧光细胞化学双重标记染色法 428

2.3.3大鼠延髓背角浅层内P物质样阳性终末与含钙结合蛋白神经元的联系——免疫荧光细胞化学双标染色及激光扫描共焦显微镜观察 430

2.3.4面口部注射甲醛溶液后大鼠延髓背角内的FOS样阳性神经元观察——免疫细胞化学染色法 432

2.3.5大鼠中缝核簇内5-羟色胺样阳性神经元表达FOS蛋白——免疫细胞化学双标染色法 435

2.3.6大鼠延髓背角内向丘脑投射的FOS样阳性神经元——逆行标记与免疫细胞化学双标染色法 437

2.3.7大鼠三叉神经节内钙结合素mRNA阳性神经元的分布——放射性核素标记的原位杂交组织化学法 440

2.3.8大鼠中脑导水管周围灰质内的5-羟色胺样阳性亚微结构——免疫电镜法 444

2.3.9大鼠孤束核内GABA能纤维终末与P物质受体样阳性神经元的突触联系——包埋前与包埋后免疫电镜双标记法 446

2.3.10大鼠延髓背角内GABA能神经元与P物质能纤维终末的突触联系——包埋前免疫电镜双标记法 449

2.4神经形态学实验 452

2.4.1大鼠脊髓灰质向孤束核的投射 452

2.4.2猫脊髓背角神经元向外侧颈核和背索核的分支投射 454

2.4.3大鼠脊孤束-背索突触后神经元的超（亚）微结构 455

2.4.4大鼠脊孤束-背索突触后神经元对躯体感觉核与内脏感觉核的分支投射 457

2.4.5大鼠脊髓立体定位磁控过半夹断模型 459

2.4.6大鼠臂旁核向杏仁中央核的投射——HRP逆行追踪方法 461

2.4.7大鼠中脑导水管周围灰质向伏核的5-羟色胺能投射——HRP逆行追踪与免疫细胞化学染色相结合的双标记法 464

2.4.8大鼠延髓背角内P物质受体样阳性神经元向丘脑胶状质核投射——荧光素逆行追踪与免疫荧光染色相结合的双标记方法 466

2.4.9大鼠中缝大核向脊髓背角和延髓背角的分支投射——荧光素双标记法 469

2.4.10中脑导水管周围灰质和中缝背核内5-羟色胺能神经元的下行分支投射——荧光素双标记与免疫荧光染色相结合的三标记法 472

2.4.11大鼠三叉神经脊束核吻侧亚核向三叉神经运动核的投射——植物凝集素（PHA-L）顺行示踪法 474

2.4.12大鼠延髓背角浅层向臂旁外侧核及丘脑腹后内侧核的投射——BDA顺行示踪法 477

2.4.13大鼠中脑导水管周围灰质-中缝大核三叉神经感觉核簇的间接投射——PHA-L顺行示踪与HRP逆行追踪相结合的双标记法的光镜观察 480

2.4.14大鼠中脑导水管周围灰质-中缝大核-三叉神经脊束核尾侧亚核的间接投射——PHA-L顺行示踪与HRP逆行追踪相结合的双标记法的电镜观察 483

2.4.15大鼠延髓背角向丘脑投射神经元与5-羟色胺阳性终末的突触联系——HRP逆行追踪与免疫细胞化学染色双标记法 486

2.4.16大鼠孤束核-臂旁核-中央杏仁核的间接投射通路——溃变与HRP逆行追踪相结合的双标记法 489

2.5分子神经生物学实验 492

2.5.1用差异显示法分离特异表达的基因片段 492

2.5.2慢性缺氧培养细胞中缺氧诱导因子-1的提取与检测 497

2.5.3大鼠三叉神经节总RNA的提取及cDNA的制备 500

2.5.4 5-HT3受体亚型mRNA在大鼠三叉神经节的表达 502

2.5.5乙酰胆碱转移酶在大鼠纹状体的表达及其DNA片段的回收 505

2.5.6乙酰胆碱转移酶DNA片段的亚克隆 507

2.5.7 ChAT-pGEM重组质粒DNA的制备及限制性酶酶切分析 510

2.5.8 ChAT-pGEM重组质粒DNA序列的测定 513

2.5.9乙酰胆碱转移酶表达蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 516

2.5.10乙酰胆碱转移酶在大鼠纹状体分布的Western印迹检测 520

2.5.11性激素对周围伤害性刺激诱导脊髓PPD mRNA表达上调的影响 523

2.5.12坐骨神经部分切断后初级感觉神经元（背根节）的差异表达基因克隆 526

2.6神经行为学实验 530

2.6.1一足致炎大鼠双足痛感受性的变化 530

2.6.2甲醛溶液致炎大鼠疼痛行为的观察 532

2.6.3神经反射在一足致炎大鼠非致炎足痛阈变化中的作用 533

2.6.4体液因素在一足致炎大鼠非致炎足痛阈变化中的作用 536

2.6.5急性缺氧预适应对小鼠缺氧耐受性的影响 537

2.6.6麻醉与兴奋小鼠缺氧耐受性的变化 539

2.6.7大鼠脊髓横断及半横断模型的复制 541

2.6.8慢性束缚应激对大鼠空间学习记忆能力的影响 543

2.6.9创伤后应激障碍模型大鼠的自发活动和焦虑水平检测 548

3 神经生物学资料 552

3.1神经生物学常见概念 552

3.1.1生物电学常见概念 552

3.1.2生物化学常见词汇 558

3.1.3细胞培养常见词汇 561

3.1.4分子生物学常见词汇 565

3.2常用的实验方法 570

3.2.1电生理学仪器方法 570

3.2.2动物实验的实施 577

3.3实验动物常用数据 589

3.3.1实验动物常用生理数据 589

3.3.2实验动物常用麻醉剂与肌肉松弛剂 589

3.4常用试剂、缓冲液、贮存液与酶的配制 592

3.4.1组织培养常用试剂 592

3.4.2电泳缓冲剂 593

3.4.3常用贮存液 595

3.4.4常用酶的配制 597

3.5常用限制性酶识别序列 598

3.6常用细胞系、细胞培养基、抗生素 603

3.6.1细胞系 603

3.6.2常用培养液成分及配方 605

3.6.3抗生素 607

3.7核酸、蛋白质常用数据及相对分子质量标准参照物 607

3.7.1常用核酸的长度与相对分子质量 607

3.7.2常用蛋白质分子质量标准参照物 607

3.8赫尔辛基宣言Ⅱ 608