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第一部分 基础知识 3

第一章 实验室安全防护知识 3

一、化学试剂安全防护知识 3

二、放射性核素安全防护知识 5

三、生物安全知识 7

四、用电安全及其他安全知识 13

第二章 分子生物学实验室标准及功能分区 15

一、生物学约束 15

二、物理学约束 15

三、标准实验室的组成 16

第三章 分子生物学实验室常规仪器设备 18

一、紫外分光光度计 18

二、离心机 21

三、制水系统 24

四、PCR仪 27

五、凝胶成像系统 29

六、酶标仪 30

七、微量移液器 32

八、pH计 34

九、生物安全柜 35

十、超净工作台 36

十一、凝胶电泳系统 37

十二、高压蒸汽灭菌器 39

十三、液氮罐 41

第四章 实验基本技能与实验室常规基础知识 42

一、常用器材的清洗处理 42

二、实验用品及实验环境的消毒灭菌 44

三、细菌接种技术 49

四、细菌培养技术 51

五、细胞培养技术 54

六、实验材料的采集与处理 59

七、试剂及样品的保存 63

八、溶液的混匀法 66

九、实验室废弃物的处理 66

第二部分 实验 71

实验一 质粒DNA的提取及鉴定 71

实验二 构建重组质粒EGFP/pET-28a 78

实验三 阳性克隆的筛选与鉴定 87

实验四 IPTG诱导EGFP蛋白表达 92

实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳 98

实验六 重组蛋白的分离与纯化 105

实验七 多克隆抗体的制备 114

实验八 间接ELISA法测定抗体效价 121

实验九 Western blotting检测抗体含量 126

参考文献 136

附录 139

附录一 核酸及蛋白质数据 139

附录二 分子克隆中常用缓冲液与试剂的配制 142

1．Tris缓冲液 142

2．磷酸缓冲液 143

3．电泳缓冲液和上样缓冲液 144

4．其他常用缓冲液 148

附录三 常用贮存液的配制 151

附录四 常用酶的配制 156

1．溶菌酶 156

2．蛋白水解酶类 156

3．无DNA酶的RNA酶 157

附录五 细菌培养基、抗生素的配制 158

1．常用培养基 158

2．常用抗生素溶液 160

附录六 溴化乙锭（EB）的净化处理 161

1．EB浓溶液（即质量浓度＞0.5 g/L）的净化处理 161

2．EB稀溶液（如含有0.5 mg/L EB的电泳缓冲液）的净化处理 161

3．其他处理方法 162

附录七 常用试剂的作用 163

1．水饱和酚溶液去除蛋白质的原理 163

2．溶液Ⅰ：溶菌液 163

3．溶液Ⅱ：NaOH-SDS液 163

4．溶液Ⅲ：3 mol/L NaAc（pH 4.8）溶液 164

5．无水乙醇沉淀DNA的原理 164

6．乙醇沉淀DNA时，加NaAc或NaCl的作用 164

7．使用乙醇沉淀DNA，降温保存的作用与方式 164

8．加DNase降解核糖核酸后再用SDS与KAc处理的原因 165

9．在保存或抽提DNA过程中，用TE缓冲液的作用 165

10．抽提DNA去除蛋白质时使用酚与氯仿的方法 165

11．用酚与氯仿抽提DNA时还要加少量异戊醇的原因 166

12．pH 8的Tris水溶液饱和酚的作用原理 166

附录八 常见载体图谱 167

1．GST融合表达载体 167

2．His标签融合表达载体 168

3．真核表达载体 169

4．RNA干扰载体 171

5．酵母表达载体 172

6．T载体 173