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第一编 概述 3

第一章 生命大分子物质的制备 3

第一节 材料的选择与处理 3

一、材料的选择 3

二、材料的处理 4

第二节 确立测定方法 5

一、目的与要求 5

二、常用的测定方法 5

第三节 细胞的破碎 8

一、机械破碎 9

二、溶胀和自溶 9

三、化学处理 10

四、生物酶降解 10

第四节 抽提 10

一、抽提的含义 10

二、抽提有效成分的影响因子 10

第五节 浓缩 13

一、沉淀法 14

二、吸附法 14

三、超过滤法 14

四、透析法 14

五、减压蒸馏法 15

六、冰冻干燥法 15

第六节 纯化方案的设计与评价 15

一、纯化方案的设计 15

二、纯化方案的评价 17

第七节 有效成分纯度和性质的分析 18

第八节 应用实例 18

思考题与参考文献 19

第二编 纯化方法 23

第二章 沉淀法 23

第一节 基本原理与沉淀类型 23

一、基本原理 23

二、制备蛋白质 23

三、制备核酸 33

第二节 应用实例 36

一、脾磷酸二酯酶的纯化 36

二、细菌染色体DNA的制备 36

思考题与参考文献 37

第三章 吸附层析 39

第一节 吸附柱层析 40

一、常用术语 40

二、基本原理 41

三、吸附剂 42

四、洗脱剂 45

五、层析柱的制备与层析操作 45

六、应用与实例 48

第二节 薄层层析 51

一、操作及注意事项 52

二、应用实例 58

第三节 聚酰胺簿膜层析 59

一、基本原理 59

二、应用实例 59

思考题与参考文献 63

第四章 疏水层析 64

第一节 基本原理 64

第二节 操作与应用 65

一、层析柱的制备 65

二、加样与洗脱 66

三、应用实例 66

思考题与参考文献 69

第五章 离子交换层析 70

第一节 基本原理 70

第二节 离子交换剂的分类及性质 72

一、分类 72

二、性质 80

第三节 离子交换剂与缓冲液的选择 88

一、离子交换剂的选择 88

二、缓冲液的选择 89

三、加样量的确定 92

第四节 操作 92

一、离子交换剂的处理、再生和转型 92

二、分离物质的交换 93

三、物质的洗脱与收集 94

第五节 应用 96

一、制备、纯化生命物质 96

二、测定蛋白质的等电点 99

思考题与参考文献 100

第六章 凝胶过滤 101

第一节 凝胶的分类及性质 101

一、葡聚糖凝胶 102

二、琼脂糖凝胶 104

三、聚丙烯酰胺凝胶 106

四、Sephacryl 106

五、Superdex 108

第二节 基本原理 109

第三节 操作 111

一、凝胶的选择和处理 111

二、凝胶柱的制备 112

三、加样与洗脱 113

四、凝胶柱的再生及保存 117

第四节 应用 118

一、脱盐和浓缩 118

二、分离生命物质 118

三、去热源物质 120

四、测定分子质量 120

五、其他 123

思考题与参考文献 123

第七章 亲和层析 124

第一节 基本原理 124

第二节 操作 126

一、基质的选择 126

二、配体的选择 127

三、亲和吸附剂的制备 129

四、特异性吸附 131

五、分离大分子物质 132

六、亲和层析柱的再生 134

第三节 提高吸附剂的操作容量 134

一、在配体和基质之间引入“手臂” 134

二、增加配体取代的程度 135

三、配体与基质以最少的键连接 137

四、基质多孔性的影响 137

五、其他 137

第四节 应用实例 138

一、纯化大分子物质 138

二、研究酶的结构与功能 141

三、实例 142

思考题与参考文献 145

第八章 聚焦层析 146

第一节 基本原理 146

一、多缓冲剂和多缓冲交换剂 146

二、聚焦层析原理 147

第二节 操作 150

一、多缓冲剂的选择 150

二、多缓冲交换剂用量的确定 150

三、多缓冲交换剂的处理 151

四、样品的准备 152

五、上样和洗脱 152

六、样品中多缓冲剂的去除 153

第三节 应用 153

一、分离模型蛋白质 153

二、分离复杂的物质 154

三、鉴定某些酶的性质 154

思考题与参考文献 156

第九章 高效液相色谱 157

第一节 基本原理 158

第二节 反相高效液相色谱 161

一、固定相、流动相和色谱柱 162

二、分离纯化糖基化白蛋白肽片段 164

第三节 应用 166

一、定性和定量分析 166

二、测定酶活性 167

三、测定蛋白质分子质量 167

四、分离核酸和蛋白质 168

思考题与参考文献 174

第十章 固定化的酶与微生物 175

第一节 制备方法 176

一、固定化酶 176

二、固定化微生物 179

第二节 制品的性质 180

一、酶的相对活力 180

二、活力曲线与最适pH值 181

三、稳定性 182

四、米氏常数 183

五、其他 184

第三节 应用 184

一、工业方面 184

二、医学方面 185

三、生化分析方面 186

四、应用实例 188

思考题与参考文献 190

第三编 鉴定方法 193

第十一章 标记 193

第一节 核酸标记 193

一、标记物的制备及类型 193

二、非核素标记 194

三、核素标记 208

四、标记物纯化 211

五、探针的鉴定 213

六、应用实例 216

第二节 蛋白质（酶、抗体）标记 220

一、标记方法 220

二、核素和非核素标记 226

思考题与参考文献 234

第十二章 重组DNA 235

第一节 重组DNA的部件 236

一、工具酶 236

二、载体 238

三、目的基因 241

第二节 重组 247

一、黏性末端连接法 247

二、平端连接法 249

三、平黏连接法 249

四、T-A连接法 249

五、同聚物加尾连接法 249

六、人工接头连接法 250

第三节 DNA扩增 252

一、重组DNA导入宿主细胞 252

二、重组体的筛选与鉴定 254

三、表达产物的纯化 256

第四节 应用实例 257

一、分离总RNA和mRNA 257

二、反转录合成第一链cDNA 257

三、PCR扩增及其产物纯化 257

四、PCR产物的克隆 258

五、重组质粒的提取及限制性内切核酸酶分析 258

思考题与参考文献 260

第十三章 DNA序列测定 260

第一节 双脱氧链终止法 260

一、基本原理 260

二、载体系统 262

三、测序试剂 265

四、测序操作 268

五、变性电泳 271

六、序列读取 271

第二节 PCR法 273

一、直接测序 273

二、循环测序 274

第三节 化学降解法 275

一、测序原理 276

二、一般程序 277

三、具体操作 277

四、应用实例 280

思考题与参考文献 281

第十四章 生物芯片 282

第一节 基因芯片 282

一、基本原理和工作流程 282

二、制备及操作 285

三、应用实例 291

第二节 蛋白质芯片 296

一、原理及特点 297

二、制备与操作 297

三、应用实例 299

第三节 芯片实验室 303

一、芯片实验室的特点 303

二、应用实例 304

思考题与参考文献 307

第十五章 聚合酶链反应 308

第一节 基本原理 308

一、反应系统 308

二、反应过程及条件 313

第二节 PCR的类型 315

一、普通PCR 315

二、原位PCR 316

三、反转录PCR 316

四、反向PCR 317

五、不对称PCR 318

六、巢式PCR 318

七、彩色PCR 319

第三节 应用 320

一、构建cDNA文库 320

二、直接测序 320

三、标记DNA探针 320

四、寻找新基因 320

五、检测环境中的致病菌与指示菌 321

思考题与参考文献 321

第十六章 细胞凋亡 322

第一节 基本原理与主要特性 322

一、基本原理 322

二、主要特性 334

第二节 检测细胞凋亡的方法 337

一、形态学 337

二、DNA片段 339

三、酶活性与组蛋白 340

四、流式细胞仪 342

第三节 应用 344

一、抗肿瘤药物的研究和开发 344

二、疾病的诊断和治疗 344

思考题与参考文献 346

第十七章 生物传感器 347

第一节 基本原理 347

一、离子选择电极 348

二、生物活性材料 349

第二节 类型与制备 350

一、类型 350

二、制备 350

第三节 应用 351

一、工业方面 351

二、医学方面 352

三、环境监测方面 353

思考题与参考文献 353

第十八章 电泳 355

第一节 基本原理 356

第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 358

一、基本原理 359

二、一般操作 364

第三节 琼脂糖凝胶和半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳 383

一、琼脂糖凝胶电泳 384

二、半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳（分离DNA） 387

第四节 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 388

一、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 389

二、尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳 390

三、SDS-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳 391

第五节 聚丙烯酰胺凝胶电聚焦 392

一、基本原理 393

二、载体两性电解质的理化性质 393

三、载体两性电解质的pH范围与用量选择 394

四、测定蛋白质等电点的操作 395

第六节 毛细管电泳 399

一、基本原理与类型 399

二、电泳装置 402

三、应用实例 405

第七节 印迹法（转移电泳） 407

一、基本原理 408

二、操作及注意事项 409

三、应用 411

思考题与参考文献 413

第十九章 免疫分析 414

第一节 抗体的性质、制备及纯化 414

一、抗体的性质 414

二、多克隆抗体的制备 415

三、单克隆抗体的制备 421

四、抗体的检测 425

五、抗体的纯化 428

第二节 抗原抗体反应 430

一、凝集反应 430

二、免疫扩散 434

三、免疫电泳 436

四、固相免疫吸附（含ELISA） 441

五、免疫微球测定 449

思考题与参考文献 454

第二十章 气相色谱 456

第一节 基本原理 457

一、常用术语 457

二、原理 458

第二节 气相色谱仪的构造 460

一、载气流速的控制和测量 460

二、进样系统 461

三、恒温室 461

四、色谱柱 461

五、检定器 465

第三节 操作 466

一、操作要点 466

二、条件的选择 467

第四节 定性和定量检测 467

一、定性检测 467

二、定量检测 468

第五节 应用 472

一、分析蛋白质和氨基酸 472

二、分析核酸 472

三、分析糖类物质 472

四、分析脂肪酸 473

五、分析农药 474

思考题与参考文献 474

参考文献 475

附录 484

一、常用数据 484

二、常用缓冲液的配制 494

缩写词索引 499